微小RNA-145-5p靶向Toll样受体4参与动脉粥样硬化泡沫细胞炎症和氧化应激反应

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对动脉粥样硬化细胞模型中炎性反应和氧化应激过程的调控作用。方法 体外构建人单核细胞白血病细胞源性泡沫细胞,分为模型组和对照组,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞内miR-145-5p相对表达。采用TargetScan数据库预测miR-145-5p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系。将293T细胞分为野生型+模拟物(mimic)组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物)、野生型+mimic NC组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照)、突变型+mimic组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物)、突变型+mimic NC组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照),采用双荧光素酶实验验证miR-145-5p与TLR4的靶向关系。体外诱导泡沫细胞,分为mimic组(转染miR-145-5p模拟物)、mimic NC组(转染模拟物阴性对照)、抑制物(inhibitor)组(转染miR-145-5p抑制物)、inhibitor NC组(转染抑制物阴性对照),采用qRT-PCR、Western blot检测TLR4 mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-6表达,生化相关试剂盒测定活性氧、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组比较,模型组miR-145-5p表达明显降低(0.29±0.01 vs 1.00±0.08,t=11.180,P<0.01)。双荧光素酶实验显示,miR-145-5p mimic组荧光素酶活性较mimic NC组显著降低,差异有统计学意义(t=8.612,P<0.01)。与mimic NC组比较,mimic组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显降低,miR-145-5p表达、SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01)。与inhibitor NC组比较,inhibitor组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显升高,miR-145-5p表达、SOD活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 miR-145-5p通过靶向TLR4抑制动脉粥样硬化细胞模型中的炎症和氧化应激反应。

miR-193-5p联合Toll样受体4评估IgA肾病患者肾间质纤维化程度的价值分析

IgA肾病是一种以IgA免疫复合物在肾小球沉积引起的慢性肾脏疾病,占所有原发性肾小球疾病的30%~40%[1]。临床上诊断主要依靠肾活检和免疫病理;但是肾活检有一定的创伤性,并发症较多,而且穿刺取样不当可能造成结果不准确[2]。因此迫切需要寻找一种潜在的无创生物标志物用于IgA肾病的早期诊断。

Toll样受体5基因rs2072493与肝癌易感性的关系

目的:探讨Toll样受体5基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism SNP)rs2072493位点与肝癌遗传易感性的关系。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测205例肝癌病例组和238例正常对照组Toll样受体5基因SNP rs2072493的基因型分布。用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%置信区间评估在共显性、显性、隐性、超显性四种遗传模式下rs2072493与肝癌发病风险的关系。结果:在共显性、显性、隐性遗传模式下,Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌的发病风险有关联。其中共显性遗传模式最适合,AIC和BIC最小。与携带AA基因型者相比,携带GA和GG基因型者肝癌的发病风险降低(GA vs AA:OR=0.512,95%CI=0.333-0.787、GG vs AA:OR=0.192,95%CI=0.077-0.477)。结论:Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌发病风险关联。

LncRNA UNC5B-AS1通过调控Toll样受体信号通路对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用GEO和TCGA数据库进行差异表达分析,采用qRT-PCR在正常与癌变宫颈组织中进行验证,筛选出差异表达lncRNA UNC5B-AS1。在宫颈癌细胞株中转染lncRNA UNC5B-AS1干扰和过表达质粒,通过平板克隆、CCK-8、EdU实验检测lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖的影响;通过Transwell实验检测其对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响;通过Western blot检测EMT相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的表达水平;通过转录组测序得到lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路,验证其相关基因的表达水平。结果RNA微阵列和生物信息学分析显示,lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中的表达水平明显高于正常宫颈组织,并与患者的总生存时间相关。与阴性对照组相比,敲低lncRNA UNC5B-AS1可降低宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,而过表达则促进宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭。Western blot显示,lncRNA UNC5B-AS1能调控宫颈癌细胞EMT。转录组测序表明lncRNA UNC5B-AS1能调控Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路。qRT-PCR及Western blot结果提示,敲低及过表达lncRNA UNC5B-AS1组中TLR相关基因IL6、TICAM2表达水平明显改变(P<0.05)。结论LncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中高表达,高表达lncRNA UNC5B-AS1可通过增强TLR信号通路活性,促进宫颈癌细胞增殖及EMT能力。

牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已公布牛Toll样受体5(toll-like receptors 5,TLR5)基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582bp,开放阅读框2577bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。

猪Toll样受体5基因cDNA克隆、蛋白质序列分析及其意义

为了解猪Toll样受体5(TLR5)蛋白的结构特征和进化关系,本研究从肠系膜淋巴结组织总RNA中克隆出猪Toll样受体5基因的cDNA序列。序列全长2641bp,其中2571bp的开放阅读框编码856个氨基酸残基的猪TLR5,含17.4%的亮氨酸,并有一段19个氨基酸的信号肽序列;同源性分析结果显示,TLR5在进化过程中具有高度保守性,与人、牛、山羊、绵羊、小鼠和大鼠的氨基酸序列同源性分别为77.5%、79.6%、78.3%、81.0%、69.2%和68.9%。蛋白分子结构预测结果表明,该分子由胞外区(642个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(191个氨基酸)组成,胞外区具有LRR结构域,胞内区具有TIR结构域,表现出典型的TLR家族结构特征。表明猪TLR5分子具有病原分子模式识别和信号传导的作用,这为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。

重型颅脑损伤患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平及其与TLR4/NF-κB信号通路和预后的关系

目的观察重型颅脑损伤(TBI)患者血清微小核糖核酸-129-5p(miR-129-5p)、miR-140-5p水平变化,探讨两者与Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路及预后的关系。方法选取重型TBI患者118例作为sTBI组、轻中型TBI患者100例作为轻中型TBI组、健康体检者100例作为对照组,RT-qPCR法检测血清miR-129-5p、miR-140-5p及外周血单个核细胞TLR4、NF-κB。采用Pearson相关性分析重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB的相关性;统计重型TBI患者术后28 d内的全因死亡例数,根据重型TBI患者术后28 d内生存情况将患者分为生存者及死亡者,比较不同预后结局重型TBI患者的临床资料;采用多因素Logistic回归分析重型TBI患者预后影响因素。结果血清miR-129-5p、miR-140-5p水平对照组>轻中型TBI组>重型TBI组(P均<0.05);Pearson相关性分析显示,重型TBI患者血清miR-129-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.320、-0.312,P均<0.01),miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.358、-0.361,P均<0.01)。118例重型TBI患者28 d内死亡42例、生存76例,28 d生存率为64.40%。死亡重型TBI患者入院时外科损伤严重度(ISS)评分、术中失血量、受伤后至手术时间、外周血单个核细胞TLR4、外周血单个核细胞NF-κB高于生存重型TBI患者,入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、血清miR-129-5p、血清miR-140-5p低于生存重型TBI患者(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,入院时ISS评分高、受伤后至手术时间长、外周血单个核细胞TLR4表达高、外周血单个核细胞NF-κB表达高为重型TBI患者死亡的独立危险因素(P均<0.05),入院时GCS评分高、血清miR-129-5p水平高、血清miR-140-5p水平高为重型TBI患者死亡的独立保护因素(P均<0.05)。结论重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平降低,血清miR-129-5p、miR-140-5p水平与TLR4/NF-κB信号通路相关分子存在相关性,且为重型TBI患者死亡的独立影响因素。

清渣汤对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5表达的影响

目的:观察清渣汤口服对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体2(TLR2)、激肽释放酶5(KLK5)表达的影响。方法:7周龄健康雄性小鼠36只,用随机数字表法将其分为6组:清渣汤高剂组、中剂组、低剂组、阳性对照组(多西环素片)、模型对照组、正常对照组,每组6只。除正常组外,其余各组均进行玫瑰痤疮造模。造模24 h后给药,模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,清渣汤3剂组分别给予25 mg/kg(低剂量组)、50 mg/kg(中剂量组)和100 mg/kg(高剂量组)清渣汤灌胃,阳性对照组给予30 mg/kg盐酸多西环素溶液灌胃,每日1次,共给药4周。免疫组化法检测皮损部位皮肤组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平。结果:模型组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达较正常组明显增强(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和清渣汤高、中、低剂量组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:清渣汤能够抑制玫瑰痤疮小鼠模型皮损部VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平,从而减轻炎症反应。

TOLL样受体4对哮喘气道平滑肌细胞分泌IL-5、IL-8的影响

目的探讨TOLL样受体4(TLR4)在哮喘气道炎症反应中的作用及机制。方法建立哮喘大鼠模型,分离、培养其气道平滑肌细胞(ASMCs),传至6代后随机分为转染组和对照组,转染组应用小分子RNA干扰技术、脂质体转染法进行小干扰RNA(siRNA)-TLR4转染,对照组为空白对照。培养24 h后应用ELISA法检测两组细胞培养上清液中IL-5、IL-8水平,应用RT-PCR和Western-blot法检测细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平。结果转染组IL-5、IL-8水平及TLR4 mRNA、蛋白表达水平均显著低于对照组(P均<0.01)。结论 TLR4可能通过促进ASMCs合成分泌IL-5、IL-8而加重哮喘气道炎症反应,此为临床靶向治疗提供了理论依据。

rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将rnomiR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测rno-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况。结果双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P<0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P<0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展。本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础。

Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达研究

目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠ALI中的作用。方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。108只SD大鼠随机分为正常对照组(n=36)、致伤1组(n=36)和致伤2组(n=36)。经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立大鼠ALI模型。每组分别在6个时相点用原位杂交法检测大鼠肺组织中TLR5mRNA的表达,并观察动脉血气分析和肺病理改变。结果从大肠杆菌ATCC25922中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。从致伤后1h开始,鞭毛蛋白致肺损伤大鼠肺组织中TLR5mRNA表达增加,并随时间推移和鞭毛蛋白剂量增加而表达增多。各致伤组大鼠动脉血氧分压降低,肺组织出现肺间质、肺泡水肿和炎性细胞浸润等病理改变。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠ALI;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程。

鼻黏膜中Toll样受体5的表达

目的研究鼻黏膜中Toll样受体5(Toll-likereceptor-5,TLR-5)的表达以了解TLR-5在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法鼻息肉和下鼻甲组织从接受鼻内镜手术治疗的慢性鼻及鼻窦炎和鼻中隔偏曲患者取得。应用免疫组化法检测17例鼻息肉和13例下鼻甲黏膜中TLR-5蛋白的表达,应用实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescentquantitative RT-PCR,real-time FQ-RT-PCR)检测14例鼻息肉和9例下鼻甲黏膜中TLR-5 mRNA的表达。结果在所有标本中均检测到TLR-5 mRNA和蛋白表达。免疫组化显示TLR-5蛋白主要表达于鼻黏膜上皮细胞和腺体上皮细胞。在细胞核和细胞浆中均有表达。在鼻黏膜上皮,染色最强的区域位于黏膜上皮表面一侧的细胞膜和细胞核。另外在间质单核样炎症细胞及NK细胞也有表达。鼻息肉组织中TLR-5蛋白表达指数5.529±0.653较下鼻甲2.346±0.619增高,差异有统计学意义(Z=-3.107,P=0.002)。结论本次研究确认了TLR-5在鼻黏膜和鼻息肉组织的表达,鼻息肉组织中TLR-5表达的增高可能与鼻息肉内持续的炎症状态有关。提示TLR-5有可能成为鼻息肉、慢性鼻及鼻窦炎一个新的治疗靶点。

5-羟色胺2A受体基因多态性与分裂样精神病

目的 :研究分裂样精神病与 5 - HT2 A受体基因的关联性。 方法 :对 2 5例分裂样精神病患者 (病例组 )及其父母 (对照组 )组成的核心家系 ,用聚合酶链式反应扩增及内切酶酶切技术测定 5 - HT2 A受体基因的基因型及等位基因的频率分布 ,并对家系作单体型关联分析。 结果 :病例组 5 - HT2 A受体基因 A2 / A2型频率及 A2等位基因频率均显著高于对照组。 结论 :5 - HT2 A受体基因 T10 2 C多态性与分裂样精神病的易感性有关 ,基因型 A2 / A2及等位基因 A2是分裂样精神病的风险因子。

中药护心康对TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型Wnt5a表达的影响

目的探讨TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型Wnt5a表达的变化及中药护心康的干预作用。方法SPF级TLR4基因敲除小鼠共68只,随机取10只为对照组,予以普通饲料喂养;其余58只予以高脂饲料建立动脉粥样硬化模型,喂养13周后从造模动物中随机选取5只解剖观察其胸主动脉,光镜下发现粥样斑块为造模成功。造模成功动物随机分为模型组、护心康组、阿托伐他汀组,Wnt抑制剂WIF组,每组12只,分别予以相应处理。正常组不做处理,模型组予以生理盐水灌胃并腹腔注射,其余各组均予相应药物灌胃和腹腔注射处理,灌胃容积均为0. 5 ml、腹腔注射容积均为0. 3 ml,每日1次。治疗8周后处死小鼠,心脏采血,酶比色法检测血脂;取胸主动脉,光镜下观察动脉粥样硬化形成情况;免疫组化法检测斑块中Wnt5a蛋白的表达。结果 (1)血脂检测:造模后动物胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平比正常组明显升高(P <0. 05);阿托伐他汀和护心康可以降低胆固醇和低密度脂蛋白水平(P<0. 05),WIF对二者的降低作用不明显;三种药物对甘油三酯和高密度脂蛋白的影响相对较小。(2)光镜观察:正常组无斑块形成,模型组可见内膜增厚,大量斑块明显形成,血管腔明显减小;各药物干预组斑块病变相对较轻。(3)Wnt5a蛋白表达:模型组中Wnt5a蛋白表达明显高于正常组(P <0. 01);与模型组相比,三种药物均能降低Wnt5a,Wnt抑制剂WIF降低作用较强(P <0. 01),护心康组和阿托伐他汀组也有明显的降低作用(P <0. 05); WIF降低Wnt5a的作用较阿托伐他汀强(P <0. 05)。结论 TLR4基因敲除小鼠动脉粥样硬化时Wnt5a表达明显升高,中药护心康能降低血脂和Wnt5a在动脉粥样硬化中的表达,从而可以减轻动脉粥样硬化的形成。

NOD样受体家族含CARD结构域5在胃癌中的相互作用蛋白及其对胃癌的诊断价值

目的 探究NOD样受体家族含CARD结构域5(NLRC5)在胃癌中的相互作用蛋白,并明确其对胃癌的诊断价值。方法 采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究NLRC5在胃癌组织和癌旁组织中的差异,结合STRING网站分析NLRC5的相互作用蛋白,通过基因表达综合(GEO)数据库验证TCGA数据库筛选出来的蛋白对胃癌的诊断价值。引用临床模型,验证筛选出来的蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况,确定各蛋白间的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线明确其对胃癌的诊断价值。结果 TCGA结果显示,胃癌组织中NLRC5表达水平明显高于癌旁组织(P﹤0.01)。蛋白-蛋白相互作用发现,核因子κB激酶复合物抑制剂组分(CHUK)、核因子κB激酶亚单位β的抑制剂(IKBKB)、三重基序蛋白25(TRIM25)与NLRC5均呈正相关。经过GEO数据库验证得到TRIM25、CHUK、IKBKB与NLRC5可以构建联合模型诊断胃癌。临床模型中NLRC5在胃癌组织中高表达,且与TRIM25、IKBKB、CHUK表达水平均呈正相关(P﹤0.01)。NLRC5联合TRIM25、IKBKB、CHUK对胃癌有较高的诊断价值。结论 TRIM25、IKBKB、CHUK参与NLRC5在胃癌发展中的相关调控机制,在胃癌诊断中具有较高的效能。

Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关联研究

目的探索人类Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关系。方法按照成组病例对照研究原理,采用单纯随机抽样方法,分别从宾阳县华支睾吸虫常规监测中发现的华支睾吸虫感染者和正常人群选取研究对象纳入华支睾吸虫感染组和正常对照组。采集研究对象静脉血5 mL,提取外周血基因组DNA,采用PCR扩增TLR2 rs3804099和rs3804100、TLR4 rs4986790和rs49867914个位点所在基因序列并测序。结果共纳入57名研究对象,其中华支睾吸虫感染组31名、正常对照组26名。TLR2基因rs3804099位点CC、CT、TT 3个基因型频率在华支睾吸虫感染组和正常对照组的差异均无统计学意义。TLR2基因rs3804100位点,华支睾吸虫感染组CT基因型频率(25.8%)低于对照组(72.7%)(χ^(2)=7.406,P=0.006),华支睾吸虫感染组TT基因型频率(71.0%)高于对照组(27.3%)(χ^(2)=6.068,P=0.014)。TLR2基因rs3804100位点TT基因型感染者大多数属于轻度感染(81.8%,18/22)。TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点在华支睾吸虫感染组和正常对照组基因型均完全相同,前者为AA基因型,后者为CC基因型。结论未发现TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点多态性与华支睾吸虫易感性有关。TLR2基因rs3804100位点多态性可能与华支睾吸虫易感性有关;该位点TT基因型者可能对华支睾吸虫更易感,CT基因型则可能对机体华支睾吸虫感染具有保护作用。

饮食或遗传所致胰岛素抵抗小鼠Toll样受体5表达的对比研究

目的研究饮食或遗传所致胰岛素抵抗小鼠Toll样受体5(TLR5)的表达。方法m/m小鼠(糖脂代谢正常的C57BL/KsJ小鼠)经高脂喂养18周,成功筛选出6只小鼠由高脂饮食诱导胰岛素抵抗模型为m/m-HFD组,随机从正常饮食喂养18周的正常对照组和遗传因素所致胰岛素抵抗组(有基因缺陷的C57BL/KsJ小鼠)中各抽取6只作为m/m-NCD组和db/db组。收集组织样本,采用western blot技术检测回肠样本TLR5的表达,ELISA检测血清样本中炎症因子IL-6、IL-10的水平。结果干预18周后,与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠血样中糖脂、胰岛素水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。成模的小鼠QUICKI<0.339,HOMA-IR>2.69,db/db组胰岛素抵抗大于m/m-HFD组;与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠回肠样本中TLR5表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠血清样本中IL-6升高、IL-10下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素抵抗发生时回肠样本中TLR5的表达增加。

Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的表达纯化及初步鉴定

目的:构建Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,纯化得到具有生物学活性的目的蛋白。方法:首先从合成的pUC57-CBLB502质粒中扩增出CBLB502基因片段,酶切后克隆至pUC57-Fc质粒中,然后双酶切pc DNA3.1和pUC57-CBLB502-Fc,将CBLB502-Fc基因片段克隆至载体pc DNA3.1,挑选阳性克隆并测序,再将重组质粒转染CHO细胞,筛选高表达细胞系,用免疫印迹鉴定表达情况,Protein A亲和柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,用小鼠辐射试验初步验证目的蛋白的生物学活性。结果:构建了pc DNA3.1-CBLB502-Fc真核表达载体;转染CHO细胞,筛选得到CBLB502-Fc高表达细胞系,并经免疫印迹鉴定培养上清;纯化得到较高纯度的融合蛋白并经SDS-PAGE鉴定;小鼠辐射实验表明CBLB502-Fc具有抗辐射作用。结论:真核表达并纯化了具有抗辐射作用CBLB502-Fc融合蛋白,为后续研究CBLB502-Fc的生物学功能奠定了重要基础。

Toll样受体5在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是一种对人类健康构成严重威胁的常见病,病死率高,预后差,对社会造成了巨大的经济和卫生负担。尽管对心血管疾病进行了广泛的研究,但其发病机制仍不清楚。众多研究表明,Toll样受体(TLRs)是一种模式识别受体,在心血管疾病的发生与发展过程中,可通过激活细胞内多种信号传导途径,介导炎症、自然免疫反应。作为TLRs的关键成员,TLR5可以通过髓样分化蛋白88依赖或非依赖信号途径调控促炎因子、趋化因子和细胞膜表面分子的表达,参与多种心血管疾病。本文将系统总结TLR5在多种心血管疾病中的作用,以期为解决心血管的难题提供新思路。