基质金属蛋白酶和Toll样受体9在急性白血病患者中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)和Toll样受体9(TLR9)在急性白血病患者中的表达及意义。方法将44例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者纳入ALL组,将30例急性髓细胞白血病(AML)患者纳入AML组,另选取同期在医院体检的44例健康体检者纳入对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测3组外周血单核细胞中TLR9 mRNA和TLR9蛋白表达情况,采用Spearman等级相关分析法分析不同临床分型急性白血病恶性程度与MMP、TLR9蛋白表达水平的相关性。结果ALL组、AML组血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平均高于对照组,且AML组高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.01);ALL组、AML组外周血单核细胞中TLR9 mRNA和TLR9蛋白相对表达量均低于对照组,且AML组低于ALL组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关分析结果显示,血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平均分别与ALL、AML恶性程度呈正相关(P<0.05),TLR9蛋白相对表达量均与ALL、AML恶性程度呈负相关(P<0.05)。结论急性白血病患者血清MMP-2、MMP-7和MMP-9水平显著升高,且外周血单核细胞中TLR9表达显著降低。MMP异常高表达可能通过抑制TLR9表达,促进急性白血病细胞的髓外浸润和免疫逃逸,进而加速肿瘤的恶性进展。

血清Toll样受体9与创伤致脓毒症患者预后的关系

目的探讨血清Toll样受体9(TLR9)水平与创伤所致脓毒症患者预后的关系。方法选取2020年8月至2022年8月重庆市急救医疗中心收治的53例创伤后脓毒症患者(脓毒症组)和208例未发生脓毒症患者(无脓毒症组),以及63例体检志愿者(对照组)作为研究对象。记录创伤患者入院1 h(T0)、3 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4)、48 h(T5)、72 h(T6)的血清TLR9水平(对照组仅体检日检测)。分析创伤所致脓毒症患者院内死亡的危险因素以及TLR9对院内死亡的预测价值。结果脓毒症组、无脓毒症组T0时血清TLR9水平均高于对照组(P<0.05)。脓毒症组T1~T6血清TLR9水平均高于无脓毒症组(P<0.05)。死亡组T4~T6血清TLR9水平均高于生存组(P<0.05)。基线SOFA评分≥17分、T6时TLR9≥3 pg/mL是创伤所致脓毒症患者院内死亡的危险因素(P<0.05)。T6时TLR9、基线SOFA评分以及两者联合预测创伤所致脓毒症患者院内死亡的曲线下面积分别为0.719、0.754和0.824。结论创伤所致脓毒症患者血清TLR9水平显著增高,且与院内死亡有关,可作为预后评估的辅助指标。

血必净注射液在重症肺炎患者中的应用效果及对氧代谢、Toll样受体的影响

目的:探究血必净注射液在重症肺炎患者中的应用效果及对氧代谢、Toll样受体的影响。方法:将2019年12月—2023年1月辽阳市中心医院收治的100例重症肺炎患者根据随机数字表法分为对照组(n=50)和观察组(n=50)。对照组进行常规肺炎治疗,观察组则在对照组的基础上加用血必净注射液。比较两组治疗总有效率和治疗前后的炎症因子[C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)及白细胞计数(WBC)]、氧代谢指标[氧供(DO_(2))、氧耗(VO_(2))、氧供指数(DO_(2)I)及氧耗指数(VO_(2)I)]、Toll样受体[Toll样受体2(TLR2)及Toll样受体4(TLR4)]。结果:观察组治疗总有效率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组炎症因子、氧代谢指标及Toll样受体比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗1、2周后,观察组炎症因子及Toll样受体均显著低于对照组,氧代谢指标均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血必净注射液在重症肺炎患者中的应用效果较好,可显著改善患者的氧代谢,下调Toll样受体表达。

三七对慢性肾衰竭大鼠Sortilin蛋白、Toll样受体及血管钙化的影响

目的 以Sortilin为切入点,探究慢性肾衰竭(CRF)血管钙化的机制,并探讨三七干预的影响,以期为临床降低CRF心血管事件提供有效的方法。方法 将36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七低、中、高剂量组、骨化三醇组,每组6只。采用腺嘌呤联合高磷饲料喂养复制CRF血管钙化大鼠模型。检测主动脉钙盐沉积,大鼠血清Scr、BUN、TG、TC、P、Ca,主动脉TLRs、Sortilin蛋白及炎症因子水平。结果 模型组大鼠肾纤维化明显,肾间质许多腺嘌呤结晶;大量钙盐沉积。各治疗组肾纤维化、钙盐沉积均有不同程度的减轻。与正常组比较,模型组大鼠血清BUN、Cr、P、TG、TC、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-17A含量明显升高(P <0.01),Ca含量明显降低(P <0.01)。与模型组比较,三七中、高剂量组和骨化三醇组大鼠血清BUN、Cr、P、TG、TC、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-17A含量明显降低(P <0.01),Ca含量明显升高(P <0.05或P <0.01)。与正常组比较,模型组大鼠主动脉组织BMP2、RUNX2、Sortilin、TLR7、TLR9蛋白的表达显著升高(P <0.01),SM22α蛋白的表达显著下降(P <0.01)。与模型组相比,三七低、中、高剂量组和骨化三醇组BMP2、RUNX2、Sortilin、TLR7、TLR9蛋白表达下降显著(P <0.01),SM22α蛋白表达显著上调(P <0.05或P <0.01),三七高剂量组和骨化三醇组效果更显著。结论 三七可改善CRF血管钙化模型大鼠的肾纤维化、血管钙化,其机制可能与调控Sortilin、TLRs的生物学功能有关。

非小细胞肺癌患者血清基质金属蛋白酶-9与Toll样受体的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Toll样受体4(TLR4)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达及临床意义。方法:选取2018年9月-2019年1月南昌大学第一附属医院呼吸科收入的体检健康人员70例为对照组,选取同期入院确诊为NSCLC的患者70例作为试验组。两组患者均开展血清MMP-9、TLR4水平检验,对比组间检验结果,对比NSCLC不同临床分期、远处转移与未转移的MMP-9、TLR4检验结果。结果:试验组患者血清MMP-9、TLR4水平高于对照组患者(P<0.05);试验组患者的年龄、性别、吸烟情况、淋巴转移以及病理类型对其MMP-9、TLR4表达均无明显影响(P>0.05),但TNM晚期、远处转移的血清MMP-9、TLR4表达水平高于早期、无远处转移患者(P<0.05)。结论:NSCLC患者血清中的MMP-9、TLR4表达明显高于健康人员,可以作为NSCLC诊断的有效检验指标,同时该两项指标还能为NSCLC病理分期与是否远处转移评估提供有效参考依据,具有较高的临床应用价值。

血清基质金属蛋白酶-9、二胺氧化酶、Toll样受体9与急性胰腺炎患者疾病严重程度及肠黏膜屏障损伤相关性分析

目的:探讨血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、二胺氧化酶(DAO)、Toll样受体9(TLR9)与急性胰腺炎(AP)患者疾病严重程度及肠黏膜屏障损伤的相关性。方法:选择AP患者82例为观察组,根据亚特兰大分类分为三个亚组:轻度AP组(32例)、中度AP组(26例)和重度AP组(24例)。选择同期体检健康者50例为对照组。比较观察组与对照组血清MMP-9、DAO、TLR9水平及肠黏膜屏障损伤指标。比较不同严重程度AP患者入院第1、2、3、7天血清MMP-9、DAO、TLR9水平及肠黏膜屏障损伤指标。分析血清MMP-9、DAO、TLR9水平与AP严重程度及肠黏膜屏障损伤指标的相关性。结果:观察组血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值较对照组高(均P<0.05)。与轻度AP组比较,中度和重度AP组血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值升高(均P<0.05);与中度AP组比较,重度AP组血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值升高(均P<0.05)。与入院第1天比较,三组AP患者入院第2天血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值升高,入院第3、7天血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值下降(均P<0.05);与入院第2天比较,三组AP患者第3、7天血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值下降(均P<0.05);与入院第3天比较,三组AP患者入院第7天血清MMP-9、DAO、TLR9、内毒素、D-乳酸水平及乳果糖/甘露醇比值下降(均P<0.05)。血清MMP-9、DAO、TLR9与急性胰腺炎严重程度及肠黏膜屏障损伤指标均呈正相关(P<0.05)。结论:急性胰腺炎患者血清MMP-9、DAO、TLR9水平存在异常,与患者疾病严重程度及肠黏膜屏障损伤呈正相关,可用于监测疾病严重程度及肠黏膜屏障损伤。

Toll样受体在代谢相关脂肪性肝病中的基础研究

代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease, MAFLD)是目前世界上最主要的肝脏疾病,对该病发病机制进行分析,能够看出其之所以会出现肝病,并非是由于酒精引起的肝损伤而是因为肝内过度沉积脂肪产生的一种临床病理综合征。流行病学研究的结果表明超重和胰岛素抵抗是MAFLD发展的关键风险因素,而临床和实验研究结果也表明,肠道微生物群组成和肠道屏障的改变可能有助于疾病的发生和发展。随着社会的逐渐发展,目前社会居民的生活质量得到显著改善,饮食习惯也发生极大变化,该病的发病率每年都在快速增长,构成了全世界肝脏纤维化的主要原因,逐渐对人体健康构成威胁,并已成为世界范围内的一大卫生问题。近年来,许多学者已经确认了固有免疫系统的活化对MAFLD的发展起到了重要的作用,Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)途径是其中关键一环。TLR在各种肝病中均表现为异常,其作用机制是通过调节TNF-α、IL-1β的表达,从而加剧肝组织的炎症反应。

胃癌组织中Toll样受体4/9的表达与肿瘤病理分期和转移的相关性

目的:探讨Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)4和TLR9在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:收集2009年1月至2009年10月在解放军第174医院手术切除的42例胃癌及其癌旁(距癌灶边缘5 cm)组织标本。RT-PCR和Western blotting检测胃癌组织中TLR4、TLR9在mRNA和蛋白水平的表达。结果:胃癌组织中TLR4和TLR9 mRNA表达高于癌旁组织(1.29±0.03 vs 0.53±0.02,0.99±0.04 vs 0.22±0.05;均P<0.05),Ⅲ期+Ⅳ期胃癌组织中TLR4和TLR9mRNA表达显著高于Ⅰ期+Ⅱ期(P<0.05),有远处转移的胃癌组织中TLR4和TLR9 mRNA表达显著高于无远处转移者(P<0.05);TLR4和TLR9 mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、淋巴结转移没有相关性。胃癌组织中TLR4和TLR9蛋白的表达高于癌旁组织(1.36±0.05 vs 0.48±0.04,1.12±0.05 vs 0.34±0.03;均P<0.05),Ⅲ期+Ⅳ期胃癌组织TLR4和TLR9蛋白的表达显著高于Ⅰ期+Ⅱ期(P<0.05)。结论:TLR4和TLR9在胃癌组织中高表达,其表达与胃癌分期、远处转移具有相关性,表明TLR4和TLR9可能参与了胃癌的发生和发展,可能为胃癌的治疗提供一种潜在的靶点。

卡介菌多糖核酸对复发性生殖器疱疹外周血单一核细胞Toll样受体9的影响

目的:探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对复发性生殖器疱疹患者外周血单一核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLR)9的影响。方法:复发性生殖器疱疹患者63例,随机分为2组,联合治疗组32例,卡介菌多糖核酸肌内注射联合口服伐昔洛韦;对照组31例,仅口服伐昔洛韦,疗程3个月,治疗过程中观察皮损愈合时间,记录其不良反应,疗程结束后,随访1年,记录下次复发时间、复发皮损愈合时间及1年复发次数。应用实时定量PCR技术分别检测两组治疗前、后PBMCs TLR9的mRNA表达。结果:两组复发性生殖器疱疹患者PBMCs TLR9的表达均高于健康对照组(P<0.05),单独服用伐昔洛韦组3个月后TLR9的表达与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.05)。联合治疗组3个月后TLR9的表达与治疗前相比,差异无统计学意义。结论:BCG-PSN联合伐昔洛韦对预防生殖器疱疹复发有更好疗效,BCG-PSN不仅可以增强机体的细胞免疫功能,还可以将这种效应维持较长时间。

大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜患者浆细胞样树突状细胞功能及Toll样受体9 mRNA表达的影响

本研究探讨大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)功能及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。15例初诊的ITP患者给予地塞米松40 mg/d,连用4 d,采用免疫磁珠分离法体外分离15例正常对照及13例治疗有效患者治疗前后外周血中pDC;用CpG-ODN 2216刺激外周血pDC并与之共培养24 h,采用ELISA方法检测上清中IFN-α、IL-6、TNF-α的含量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测pDC的TLR9 mRNA表达量。结果表明,①治疗前pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平〔(960.83±164.65)pg/ml,(156.15±39.89)pg/ml,(137.31±35.44)pg/ml)〕明显高于正常对照组〔(616.67±105.98)pg/ml,(89.13±21.48)pg/ml,(88.53±25.81)pg/ml,P<0.05〕;治疗后pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别降至(678.46±128.88)pg/ml,(97.77±26.31)pg/ml,(103.08±26.42)pg/ml,与治疗前比较差异有统计学意(P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);②治疗前pDC的TLR9 mRNA的表达水平高于正常对照组(P<0.05);治疗后pDC的TLR9 mRNA的表达水平低于治疗前(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:pDC分泌的细胞因子及其表达的TLR9在ITP发病中起重要作用;地塞米松可能通过下调TLR9的表达,抑制pDC分泌细胞因子的功能,而对ITP起到治疗作用。

脂多糖对家蚕幼虫Toll样受体基因BmToll9-2表达的影响

【目的】Toll样受体是昆虫Toll信号传导途径的一个重要组成成员,对激活昆虫机体对入侵病原微生物的先天免疫应答起着至关重要的作用。本研究旨在探究脂多糖对家蚕Bombyx mori幼虫中Toll样受体基因BmToll9-2基因表达的影响。【方法】利用RT-PCR分析BmToll9-2基因在家蚕大造品系4龄和5龄幼虫表皮、脂肪体、马氏管、中肠、神经、丝腺、胸部肌肉共7种组织中的表达特征;将脂多糖和大肠杆菌Escherichia coli注射到5龄幼虫体腔内,诱导其免疫系统响应,采用实时荧光定量PCR分析注射后不同时间BmToll9-2基因在中肠中的表达水平。【结果】RT-PCR结果表明,BmToll9-2基因在家蚕4龄幼虫的脂肪体、马氏管、神经和丝腺中高度表达,在5龄幼虫脂肪体、中肠、马氏管和神经中均有较高表达。实时荧光定量PCR结果显示,注射脂多糖能诱导5龄幼虫中肠中BmToll9-2基因转录,在注射后6 h时的诱导效果最好;注射大肠杆菌也能诱导BmToll9-2基因转录,在注射后3和6 h时的诱导效果最好。【结论】家蚕幼虫BmToll9-2基因在脂多糖和大肠杆菌处理后上调表达,提示BmToll9-2受体可能参与昆虫Toll样受体对脂多糖和细菌的识别过程。

系统性红斑狼疮患者Toll样受体9基因多态性的初步研究

目的研究Toll样受体9(TLR9)基因在系统性红斑狼疮(SLE)中是否存在多态性。方法提取26例SLE患者mRNA并逆转录为cDNA,扩增产物经3730 DNA自动测序仪测定TLR9基因序列。结果TLR9 mRNA自起始位点起第1783、2269和3222位碱基存在二态性(A或G),这3个位点为单核苷酸多态性(SNP)位点,分别称之为SNP1、SNP2和SNP3,其中SNP1是我们新发现的多态性位点,SNP2和SNP3为美国国立生物技术信息中心(NCBI)SNP数据库中公布的位点,它们均不改变氨基酸编码。SNP2在人群中可表现为AA纯合、GG纯合或AG杂合3种基因型,在SLE患者中以AG型为主(50%),而在正常人中以GG型为主(75%)(P<0.05);SNP1和SNP3只在一名男性SLE患者中发现,表现为AG杂合,其余个体均为GG纯合。结论TLR9基因编码区中的一个单核苷酸多态性与SLE发病相关联。

小鼠脑梗死后小胶质细胞内Toll样受体9选择性上调

目的:观察脑梗死后Toll样受体9(TLR9)表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。方法:线栓法制备C57小鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,90 min后再灌注。假手术组为对照。再灌注后6 h、3d、7 d和14 d处死动物(n=3),制备脑冠状位冰冻切片。免疫荧光染色观察TLR9表达量及其在神经元和神经胶质细胞中的表达变化。结果:梗死灶边缘区TLR9的表达量随时间增加,始终高于对侧及假手术组。病变全程偶见神经元胞内小点状TLR9,TLR9阳性率无时间、组间差异。激活态小胶质细胞聚集于梗死灶边缘区,胞内TLR9由散在小点状变为团块状粗颗粒样。TLR9阳性率随时间先升后降,始终高于对侧及假手术组。星形细胞和少突胶质细胞未见TLR9阳性染色。结论:脑梗死后,中枢定居细胞中神经元TLR9维持固有表达,仅小胶质细胞TLR9表达选择性上调,星形细胞及少突胶质细胞无TLR9表达。

氧化苦参碱对大鼠溃疡性结肠炎模型结肠组织中Toll样受体9、核因子-κB mRNA表达的影响

目的：探讨氧化苦参碱对溃疡性结肠炎大鼠模型结肠组织中Toll样受体9（TLR9）、核因子-κB（NF-κB）mRNA表达的影响。方法：SPF级SD大鼠75只,随机分为模型组、氧化苦参碱组、美沙拉嗪组、氧化苦参碱＋美沙拉嗪组和空白对照组各15只。实验1周后每组各取3只大鼠结肠组织进行大体形态学及组织学观察,第16天剩余的大鼠处死取结肠组织,应用逆转录多聚酶链反应方法检测各组TLR9、NF-κB mRNA的表达水平。结果：模型组结肠组织中TLR9表达水平均明显高于其他各组（P〈0.01）,氧化苦参碱＋美沙拉嗪组中NF-κB mRNA表达水平均低于模型组、氧化苦参碱组和美沙拉嗪组（P〈0.05~P〈0.01）,氧化苦参碱组和美沙拉嗪组2项指标表达水平差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论：氧化苦参碱可干预TLR9、NF-κB mRNA在炎症性结肠组织中的表达,进而抑制溃疡性结肠炎炎症反应;氧化苦参碱联合美沙拉嗪比单用氧化苦参碱或美沙拉嗪抑制作用更强。

氧葡萄糖剥夺-再恢复小鼠小胶质细胞的激活及Toll样受体9表达的变化

目的观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)对小鼠BV-2小胶质细胞的激活以及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。方法采用OGDR法建立BV-2细胞缺氧、缺糖模型,以常氧培养的BV-2细胞作为对照。使用倒置相差显微镜观察BV-2细胞在OGDR后0、6、12、24、48、72 h形态的变化,CCK8法检测OGDR后不同时间点细胞存活率的变化,反转录PCR和Western Blot检测细胞内TLR9 mRNA和蛋白的表达。结果①OGDR后BV-2细胞由原来静止的分枝状变成激活的阿米巴状。②OGDR后,细胞存活率明显下降,0 h为对照组的(65.7±9.2)%;12 h下降至最低,为对照组的(44.8±2.3)%,后逐渐升高,48、72 h分别为对照组的(60.8±10.2)%、(72.3±10.0)%。③OGDR后,随着时间的延长,TLR9 mRNA表达逐渐升高,24 h达高峰,后逐渐降低,但72 h仍高于0 h时间点的表达。TLR9蛋白表达亦呈升高趋势,在72 h达高峰。对照组各时间点TLR9 mRNA、TLR9蛋白表达差异均无统计学意义。④相同时间点的比较,OGDR组OGDR后6～72 h,TLR9 mRNA表达均明显高于对照组(P<0.05,或P<0.01,);12～72 h,TLR9蛋白表达显著高于对照组(P<0.05,或P<0.01)。结论 OGDR后BV-2细胞被激活,其细胞内TLR9表达随着时间的延长逐渐增高,可能在脑缺血-再灌注后的炎性反应中,发挥重要作用。

Toll样受体4及核因子-κB在脂多糖诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9表达中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子(NF-)κB在脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达中的作用,观察TLR4抑制剂TAK-242对MMP-9表达的影响。方法以终浓度为0、0.1、1、10、100μg/L的LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24h,或以LPS(终浓度10μg/L)刺激细胞0、8、12、16、24h,检测LPS刺激与MMP-9表达的量效和时效性关系。以TAK-242(100μg/L)或PDTC(50mg/L)预处理HBE4-E6/E7细胞后以100μg/L LPS刺激24h,采用RT-PCR检测MMP-9mRNA表达,用Western blotting检测MMP-9蛋白表达,以明胶酶谱法检测MMP-9酶活性,采用凝胶阻滞实验检测活化NF-κB的含量。结果 MMP-9mRNA表达随着LPS刺激剂量的增加而增加(P<0.05),且随着LPS刺激时间延长,MMP-9mRNA表达量亦显著增加(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著抑制LPS诱导的MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低其酶活性(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著降低LPS诱导的活化NF-κB含量(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路在LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9表达中发挥着重要的调控作用;TAK-242可抑制LPS诱导的MMP-9的表达。

血小板因子4经Toll样受体4上调巨噬细胞基质金属蛋白酶9表达

目的观察血小板因子4（PF4）对THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响,并初步探讨其机制。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞经不同浓度PF4（0-200μg/L）处理一定时间后,RT-PCR和Western blot检测MMP-9和Toll样受体4（TLR4）表达。为了研究TLR4在其中的作用,细胞经TLR4阻断剂预处理30 min后,再与PF4孵育特定时间,检测MMP-9表达。结果与对照组比较,50μg/L PF4即可显著上调巨噬细胞MMP-9 mRNA和蛋白水平,至100μg/L时,MMP-9 mRNA和蛋白表达达到最大效应水平,分别较对照组增高约3.8倍（P〈0.001）和1.5（P〈0.01）倍。PF4（100μg/L）也较对照组显著上调TLR4 mRNA和蛋白水平。而加入TLR4阻断剂后可逆转PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调,其mRNA和蛋白水平分别较PF4单独孵育组降低约26%和21%（P均〈0.05）。结论 PF4可能通过TLR4上调巨噬细胞MMP-9的表达。

Toll样受体9信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用

目的探讨Toll样受体9(TLR9)信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能障碍发病过程中的作用。方法 24只SD大鼠随机分成观察组(n=18)和对照组(n=6)。观察组采用牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管诱导SAP模型,对照组采用生理盐水代替牛磺胆酸钠胰胆管注射。观察组分别在造模后6、12、24 h活杀,每个时间点活杀6只,对照组造模后24 h活杀,分别取回肠黏膜组织检测TLR9的表达情况和核因子-κB(NF-κB)的活性,取外周静脉血测定血清淀粉酶(AMS)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,取胰腺和小肠组织进行病理评分,比较两组各项指标的差异。结果观察组各时间点小肠组织TLR9表达和NF-κB活性均显示高于对照组(P<0.05),血清AMS、DAO、D-Lac、TNF-α和IL-6水平也明显高于对照组(P<0.05),胰腺组织和小肠组织病理评分也明显高于对照组(P<0.05)。TLR9与NF-κB有较高的相关性(r=0.619,P<0.05),NF-κB与TNF-α也有较高的相关性(r=0.683,P<0.05)。结论 TLR9信号通路通过调节炎症介质水平,在SAP大鼠的肠黏膜屏障功能障碍发病过程中起着重要作用。

Toll样受体-9在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的明确Toll样受体-9(Tolllike receptor-9,TLR-9)在喉鳞状细胞癌及癌旁正常组织的表达及分布,并探讨其在喉癌发病机制中的作用及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹(Westernblot)及免疫组织化学技术检测TLR-9在喉癌组织和癌旁正常组织中的表达和分布。结果RT-PCR检测表明,TLR-9mRNA在喉癌及喉正常组织内均有表达,TLR-9在喉癌组织中的表达较癌旁正常组织表达明显增多(t=2.743,P=0.017),并且在喉癌组织Ⅰ期+Ⅱ期与Ⅲ期+Ⅳ期表达之间差异具有统计学意义(t=1.787,P=0.040)。蛋白质免疫印迹检测发现,癌旁正常组织无TLR-9表达,在喉癌组织Ⅰ期+Ⅱ期与Ⅲ期+Ⅳ期表达之间差异具有统计学意义(t=1.701,P=0.015),TLR-9的表达位置在180kDa。免疫组化染色发现:TLR-9阳性表达为黄色,主要分布在肿瘤细胞胞浆内。结论TLR-9可能通过免疫机制参与喉癌的发展过程。

牦牛Toll样受体8和9基因克隆及组织表达分析

为了解牦牛Toll样受体8(TLR8)和9(TLR9)蛋白的结构特征及其基因的组织表达规律,丰富牦牛TLRs基因研究的理论数据,应用RT-PCR方法克隆牦牛TLR8、TLR9基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术构建组织表达谱。结果显示,两个基因cDNA全长分别为3 102bp和3 090bp。牦牛TLR8和TLR9基因与野牦牛、黄牛和绵羊之间的同源性都很高,均在95%以上。牦牛TLR8和TLR9蛋白都具有胞外LRRs功能域、胞内区TIR结构域、低复杂度区;另外,TLR8还具有1个C端富集亮氨酸重复序列(LRRCT)和跨膜结构域。两个基因在10个组织中均有不同程度的表达,在肾脏中表达量最高,而在大肠中表达量最低。本研究成功克隆了牦牛TLR8和TLR9基因的完整编码区,并揭示了它们在各组织器官的表达规律,为进一步研究TLRs在牦牛体内的免疫机制奠定了基础。