Toll样受体9基因rs187084和rs352140位点多态性与Hp感染及其相关疾病易患性的关系

目的探讨Toll样受体9（Toll-like receptors 9,TLR9）基因rs187084和rs352140位点多态性与幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染以及相关疾病的关系。方法收集2012年12月到2013年6月在武汉大学人民医院内镜中心进行胃镜活检的患者326例,同时采集患者外周血标本。用胶体金免疫分析法检测患者外周血中抗Hp抗体。用等位基因特异性聚合酶链式反应（allele specific polymerase chain reaction,AS-PCR）方法检测TLR9基因rs352140和rs187084位点基因多态性。结果TLR9基因rs187084位点和rs352140位点CC、TT和CT各基因型在抗Hp抗体阳性组和阴性组中的分布差异均无统计学意义（χ2=3.91,0.90;P=0.14,0.64）;TLR9基因rs187084和rs352140位点各基因型在正常胃黏膜组织组与Hp感染相关疾病组中的分布差异均无统计学意义;在分析rs187084位点时,基因型频率的相对风险分析显示,CC基因型患胃癌的风险是TT和CT基因型的2.46倍（OR=2.46,95%CI：1.01~6.01,P=0.04）。结论 TLR9基因rs187084和rs352140位点多态性与Hp感染可能无相关性;rs187084位点CC基因型可能是胃癌发病的危险因素。

赤眼鳟Toll样受体9基因的cDNA全长克隆及表达特性分析

为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)Toll样受体9基因(toll–like receptor 9,ScTLR9)的结构特性及其参与免疫应答草鱼呼肠弧病毒(grass carp reovirus,GCRV)感染时的表达特性,采用RACE技术克隆Sc TLR9基因c DNA全长序列,采用实时荧光定量PCR技术比较分析ScTLR9免疫应答GCRV的表达特性。结果显示:ScTLR9的cDNA全长为3 687 bp,编码1 059个氨基酸,有17个富含亮氨酸重复序列(leucine rich repeats,LRRs)结构域。ScTLR9在被检测的9个组织中均有表达,在中肾和头肾中的表达量最高;感染GCRV后,基因TLR9在赤眼鳟和草鱼头肾中的表达量均上调,在赤眼鳟头肾中的表达量于感染后12 h达到峰值,推测TLR9参与了赤眼鳟抗GCRV的免疫应答,且在抗GCRV入侵免疫反应中赤眼鳟较草鱼的免疫应答更为迅速。

系统性红斑狼疮患者Toll样受体9基因多态性的初步研究

目的研究Toll样受体9(TLR9)基因在系统性红斑狼疮(SLE)中是否存在多态性。方法提取26例SLE患者mRNA并逆转录为cDNA,扩增产物经3730 DNA自动测序仪测定TLR9基因序列。结果TLR9 mRNA自起始位点起第1783、2269和3222位碱基存在二态性(A或G),这3个位点为单核苷酸多态性(SNP)位点,分别称之为SNP1、SNP2和SNP3,其中SNP1是我们新发现的多态性位点,SNP2和SNP3为美国国立生物技术信息中心(NCBI)SNP数据库中公布的位点,它们均不改变氨基酸编码。SNP2在人群中可表现为AA纯合、GG纯合或AG杂合3种基因型,在SLE患者中以AG型为主(50%),而在正常人中以GG型为主(75%)(P<0.05);SNP1和SNP3只在一名男性SLE患者中发现,表现为AG杂合,其余个体均为GG纯合。结论TLR9基因编码区中的一个单核苷酸多态性与SLE发病相关联。

人Toll样受体9基因启动子区的生物信息学分析

目的:探讨人Toll样受体9(TLR9)基因启动子区序列特征。方法:利用生物信息学技术预测人TLR9基因启动子区域、转录因子结合位点和CpG岛分布。结果:人TLR9基因启动子区有1434个转录因子结合位点,人和小鼠保守区域内存在23个共同的转录因子结合位点,人TLR9基因启动子区包含长572 bp的CpG岛。结论:人TLR9基因启动子区相关生物信息学的研究,提高了针对启动子的研究效率,并为预测基因启动子的功能提供了重要信息。

小鼠Toll样受体9基因的克隆、表达及其活性的初步鉴定

从小鼠巨噬细胞中提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增小鼠Toll样受体9(mTLR9)cDNA,构建真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-mTLR9,转染293T细胞,利用Western Blotting检测蛋白表达,并用双荧光素酶报告基因系统检测mTLR9对其介导的信号通路下游转录因子NF-κB转录活性影响.结果表明,本试验成功克隆到小鼠TLR9cDNA,构建的重组体转染细胞后表达的蛋白分子质量与预计相符,并能激活下游转录因子NF-κB的转录活性.

Toll样受体9基因多态性与口腔扁平苔藓治疗及预后的关系研究

口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）为病因不明的口腔黏膜慢性炎症性疾病,并被世界卫生组织（WHO）列为癌前病变。我国人群总患病率为1.27%,其中男性0.96%,女性1.57%,多发生于更年期妇女。OLP病损多发生于颊黏膜处,舌背部也可发生,多对称分布。临床可分为普通型和糜烂型2种。OLP病程慢性迁延,尤其是糜烂型OLP,患者自觉疼痛和吞咽困难,复发率高,有癌变风险。

Toll样受体9基因多态性与重症肌无力相关性研究

目的探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)基因rs352140和rs187084位点多态性与重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的相关性。方法纳入109例MG患者和162例健康体检者。采用聚合酶链反应-限制性内切酶多态性方法对TLR9基因rs352140和rs187084位点分型,并在MG组与对照组、MG各亚组(性别、发病年龄、胸腺情况、最严重时Osserman分型、Oosterhuis评分和激素近期疗效)与对照组、MG各亚组之间比较两位点等位基因频率和共显性、加性、过显性遗传模型下基因型频率的差异。结果 TLR9基因rs352140和rs187084位点等位基因频率和共显性、加性、过显性遗传模型下的基因型频率在MG组与对照组、MG各亚组与对照组及MG各亚组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR9基因rs352140和rs187084位点多态性与重症肌无力的易感性、严重程度和激素疗效无相关性。

梅花鹿天然Toll样受体9基因克隆与序列分析

Trizol法提取梅花鹿肝脏总RNA，采用ORF两端兼并引物，RT—PCR方法克隆梅花鹿天然Toll样受体9基因（TLR9）并进行系统的生物信息学分析。RT—PCR结果显示，梅花鹿TLR9基因的mRNA长4043bp，含有800bp左右的5’UTR，

寻常型银屑病患者外周血单个核细胞Toll样受体9基因和血清IL-20表达水平的研究

目的:探讨寻常型银屑病患者外周血单个核细胞Tol l样受体9基因表达和血清I L-20表达水平及两者之间的相关性。方法:采集32例寻常型银屑病患者及30例健康正常人外周血,分别采用荧光实时定量PCR法检测外周血单个核细胞TLR9 mRNA表达,双抗体夹心ELISA法检测血清IL-20的表达水平。结果:银屑病组TLR9 mRNA的表达为(1.361±0.041)较正常人对照组(0.857±0.027)明显增高,在统计学上差异有显著性(P<0.01)。银屑病组IL-20表达水平为(30.73±21.84)×10-3g/L,较正常人对照组(13.56±7.17)×10-3g/L明显增高,在统计学上差异有显著性(P<0.01)。且银屑病患者外周血单个核细胞TLR9 mRNA表达与血清IL-20水平呈正相关,r=0.7239。结论:TLR 9及IL-20可能在银屑病发病过程中起重要作用。

克隆人Toll样受体9基因和转染真核细胞对CpG的反应

目的克隆人Toll样受体9(TLR9)基因,重组入真核表达载体,转染真核细胞,检测对CpG的反应。方法利用逆转录PCR从人外周血mRNA扩增TLR9基因;TLR9基因定向重组入真核表达载体pcDNA3.0;利用磷酸钙转染方法导入肝癌细胞系SMMC7721,经G418培养筛选,克隆出携有人TLR9 CDNA的细胞系;用不同的CpG刺激转染的细胞系观察生长率。结果逆转录PCR扩增出3.0 kb的DNA片段,经TA克隆和细胞DNA序列分析为人TLR9基因全序列;利用定向克隆的方法将人TLR9基因成功重组入pcDNA3.0。结论制备的SMMC7wgq-TLR9系可以用于CpG研究。

Toll样受体9基因多态性与湖北汉族系统性红斑狼疮易感性的关系

目的:明确Toll样受体9基因rs187084、rs352140位点单核苷酸多态性与湖北汉族人口中系统性红斑狼疮疾病易感性的关系。方法:PCR扩增80例系统性红斑狼疮患者和84例健康志愿者的外周血目的基因片段,通过SNaP shot法检测rs187084、rs352140这两个位点的基因型及等位基因频率。结果:系统性红斑狼疮实验组及健康对照组中rs187084的AA,GG,AG基因型频率分别为37.50%,18.75%,43.75%和47.62%,13.10%,39.29%,无显著统计学差异(P> 0.05)。rs352140 AA,GG,AG基因型频率在实验组及对照组中分别为18.75%,43.75%,37.50%和11.90%,48.81%,39.29%,无显著统计学差异(P>0.05)。结论:Toll样受体9基因rs187084、rs352140基因位点的单核苷酸多态性可能与系统性红斑狼疮的发病不相关。

基质金属蛋白酶和Toll样受体9在急性白血病患者中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)和Toll样受体9(TLR9)在急性白血病患者中的表达及意义。方法将44例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者纳入ALL组,将30例急性髓细胞白血病(AML)患者纳入AML组,另选取同期在医院体检的44例健康体检者纳入对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测3组血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测3组外周血单核细胞中TLR9 mRNA和TLR9蛋白表达情况,采用Spearman等级相关分析法分析不同临床分型急性白血病恶性程度与MMP、TLR9蛋白表达水平的相关性。结果ALL组、AML组血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平均高于对照组,且AML组高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.01);ALL组、AML组外周血单核细胞中TLR9 mRNA和TLR9蛋白相对表达量均低于对照组,且AML组低于ALL组,差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman等级相关分析结果显示,血清MMP-2、MMP-7、MMP-9水平均分别与ALL、AML恶性程度呈正相关(P<0.05),TLR9蛋白相对表达量均与ALL、AML恶性程度呈负相关(P<0.05)。结论急性白血病患者血清MMP-2、MMP-7和MMP-9水平显著升高,且外周血单核细胞中TLR9表达显著降低。MMP异常高表达可能通过抑制TLR9表达,促进急性白血病细胞的髓外浸润和免疫逃逸,进而加速肿瘤的恶性进展。

血清Toll样受体9与创伤致脓毒症患者预后的关系

目的探讨血清Toll样受体9(TLR9)水平与创伤所致脓毒症患者预后的关系。方法选取2020年8月至2022年8月重庆市急救医疗中心收治的53例创伤后脓毒症患者(脓毒症组)和208例未发生脓毒症患者(无脓毒症组),以及63例体检志愿者(对照组)作为研究对象。记录创伤患者入院1 h(T0)、3 h(T1)、6 h(T2)、12 h(T3)、24 h(T4)、48 h(T5)、72 h(T6)的血清TLR9水平(对照组仅体检日检测)。分析创伤所致脓毒症患者院内死亡的危险因素以及TLR9对院内死亡的预测价值。结果脓毒症组、无脓毒症组T0时血清TLR9水平均高于对照组(P<0.05)。脓毒症组T1~T6血清TLR9水平均高于无脓毒症组(P<0.05)。死亡组T4~T6血清TLR9水平均高于生存组(P<0.05)。基线SOFA评分≥17分、T6时TLR9≥3 pg/mL是创伤所致脓毒症患者院内死亡的危险因素(P<0.05)。T6时TLR9、基线SOFA评分以及两者联合预测创伤所致脓毒症患者院内死亡的曲线下面积分别为0.719、0.754和0.824。结论创伤所致脓毒症患者血清TLR9水平显著增高,且与院内死亡有关,可作为预后评估的辅助指标。

Toll样受体5基因rs2072493与肝癌易感性的关系

目的:探讨Toll样受体5基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism SNP)rs2072493位点与肝癌遗传易感性的关系。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测205例肝癌病例组和238例正常对照组Toll样受体5基因SNP rs2072493的基因型分布。用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%置信区间评估在共显性、显性、隐性、超显性四种遗传模式下rs2072493与肝癌发病风险的关系。结果:在共显性、显性、隐性遗传模式下,Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌的发病风险有关联。其中共显性遗传模式最适合,AIC和BIC最小。与携带AA基因型者相比,携带GA和GG基因型者肝癌的发病风险降低(GA vs AA:OR=0.512,95%CI=0.333-0.787、GG vs AA:OR=0.192,95%CI=0.077-0.477)。结论:Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌发病风险关联。

三七对慢性肾衰竭大鼠Sortilin蛋白、Toll样受体及血管钙化的影响

目的 以Sortilin为切入点,探究慢性肾衰竭(CRF)血管钙化的机制,并探讨三七干预的影响,以期为临床降低CRF心血管事件提供有效的方法。方法 将36只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七低、中、高剂量组、骨化三醇组,每组6只。采用腺嘌呤联合高磷饲料喂养复制CRF血管钙化大鼠模型。检测主动脉钙盐沉积,大鼠血清Scr、BUN、TG、TC、P、Ca,主动脉TLRs、Sortilin蛋白及炎症因子水平。结果 模型组大鼠肾纤维化明显,肾间质许多腺嘌呤结晶;大量钙盐沉积。各治疗组肾纤维化、钙盐沉积均有不同程度的减轻。与正常组比较,模型组大鼠血清BUN、Cr、P、TG、TC、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-17A含量明显升高(P <0.01),Ca含量明显降低(P <0.01)。与模型组比较,三七中、高剂量组和骨化三醇组大鼠血清BUN、Cr、P、TG、TC、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-17A含量明显降低(P <0.01),Ca含量明显升高(P <0.05或P <0.01)。与正常组比较,模型组大鼠主动脉组织BMP2、RUNX2、Sortilin、TLR7、TLR9蛋白的表达显著升高(P <0.01),SM22α蛋白的表达显著下降(P <0.01)。与模型组相比,三七低、中、高剂量组和骨化三醇组BMP2、RUNX2、Sortilin、TLR7、TLR9蛋白表达下降显著(P <0.01),SM22α蛋白表达显著上调(P <0.05或P <0.01),三七高剂量组和骨化三醇组效果更显著。结论 三七可改善CRF血管钙化模型大鼠的肾纤维化、血管钙化,其机制可能与调控Sortilin、TLRs的生物学功能有关。

猪Toll样受体9基因的克隆、序列分析及其结构预测

本研究应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中,克隆了猪Toll样受体9基因(pTLR9)。基因序列分析表明,克隆的pTLR9基因ORF为3 093 bp,编码1 030个氨基酸,含18.5%的亮氨酸,含有24个氨基酸的信号肽序列,属于Ⅰ型跨膜受体,具有富含亮氨酸的重复序列(LRR)和Toll/IL-1R同源区结构域;与GenBank上登载的pTLR9参考序列(AY859728)的同源性为99.3%,与牛、马、羊和人的同源性较高,与家鼠、褐鼠的次之,TLR9的演化关系与亲缘关系密切。

哮喘患儿Toll样受体4基因多态性及其与哮喘发病的关系

目的探讨支气管哮喘患儿外周血Toll样受体4(TLR4)基因多态性及其与哮喘发病的关系。方法172例哮喘患儿(观察组),根据哮喘急性发作严重程度分为轻度34例、中度35例、重度45例和危重58例,另选择136例健康体检儿童为对照组。抽取观察组病情发作期、对照组体检时外周静脉血,采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性法检测TLR4基因,采用二元Logistic回归分析不同TLR4基因位点基因型儿童哮喘发病的危险性。结果观察组患儿TLR4基因Thr399Ile位点CC、CT、TT基因型分别为31、73、68例,等位基因C、T分别为135、209例,对照组分别为42、60、34、144及128例;与对照组比较,观察组TLR4基因Thr399Ile位点T等位基因分布频率高(P<0.05)。与CC基因型比较,TLR4基因Thr399Ile位点TT型人群哮喘发病的危险性高[OR=2.353(95%CI1.575~4.663);P<0.05]。结论哮喘患儿TLR4基因Thr399Ile位点的基因型以TT为主,等位基因T分布频率高。TLR4基因Thr399Ile位点多态性可能与支气管哮喘的发病有关。

Toll样受体9基因启动子单核苷酸多态性与儿童变应性哮喘的相关性

目的 研究Toll样受体9（toll-like receptor 9,TLR9）基因启动子区单核苷酸多态性在浙江汉族儿童中的分布,探讨其与哮喘易感性及其表型之间的相关性.方法 对312例变应性哮喘患儿（哮喘组）和339名健康儿童（对照组）采用DNA直接测序法检测TLR9基因-1486（rs187084）和-1237（rs5743836）单核苷酸多态性;采用ELISA法检测两组不同基因型血清干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）、白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）和白细胞介素4（interleukin-4,IL-4）水平;采用化学发光法检测血清总免疫球蛋白E（immunoglobulin E,IgE）水平;采用酶免疫荧光法检测血清变应原特异IgE.结果 （1）哮喘组和对照组均存在-1486位点T→C突变,哮喘组TT、TC和CC 3种基因型的频率分别是3 8.8%、48.4%和12.8%,对照组分别是41.0%、44.3%和14.7%;未发现-1237位点存在多态性.（2）哮喘组和对照组-1486位点各基因型的频率分布差异无统计学意义（P＞0.05）,年龄分层后比较差异也无统计学意义（P＞0.05）.（3）哮喘组-1486位点3种基因型的血清IFN-γ和IL-4水平差异有统计学意义（P＜0.01）,CC基因型的IFN-γ水平较低而IL-4水平较高;对照组2种细胞因子的差异无统计学意义（P＞0.05）.哮喘组和对照组血清IL-12水平在3种基因型间差异均无统计学意义（P＞0.05）.（4）哮喘组-1486位点不同基因型血清总IgE水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 浙江汉族儿童不存在TLR9基因-1237位点多态性.TLR9基因-1486 C/T位点单核苷酸多态性与浙江汉族儿童哮喘易感性、血清IL-12及总IgE水平无关;-1486 C/T位点多态性与哮喘患儿血清IFN-γ和IL-4水平有关联,CC基因型的IFN-γ水平较低而IL-4水平较高.

非小细胞肺癌患者血清基质金属蛋白酶-9与Toll样受体的表达及临床意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Toll样受体4(TLR4)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达及临床意义。方法:选取2018年9月-2019年1月南昌大学第一附属医院呼吸科收入的体检健康人员70例为对照组,选取同期入院确诊为NSCLC的患者70例作为试验组。两组患者均开展血清MMP-9、TLR4水平检验,对比组间检验结果,对比NSCLC不同临床分期、远处转移与未转移的MMP-9、TLR4检验结果。结果:试验组患者血清MMP-9、TLR4水平高于对照组患者(P<0.05);试验组患者的年龄、性别、吸烟情况、淋巴转移以及病理类型对其MMP-9、TLR4表达均无明显影响(P>0.05),但TNM晚期、远处转移的血清MMP-9、TLR4表达水平高于早期、无远处转移患者(P<0.05)。结论:NSCLC患者血清中的MMP-9、TLR4表达明显高于健康人员,可以作为NSCLC诊断的有效检验指标,同时该两项指标还能为NSCLC病理分期与是否远处转移评估提供有效参考依据,具有较高的临床应用价值。

脂多糖对家蚕幼虫Toll样受体基因BmToll9-2表达的影响

【目的】Toll样受体是昆虫Toll信号传导途径的一个重要组成成员,对激活昆虫机体对入侵病原微生物的先天免疫应答起着至关重要的作用。本研究旨在探究脂多糖对家蚕Bombyx mori幼虫中Toll样受体基因BmToll9-2基因表达的影响。【方法】利用RT-PCR分析BmToll9-2基因在家蚕大造品系4龄和5龄幼虫表皮、脂肪体、马氏管、中肠、神经、丝腺、胸部肌肉共7种组织中的表达特征;将脂多糖和大肠杆菌Escherichia coli注射到5龄幼虫体腔内,诱导其免疫系统响应,采用实时荧光定量PCR分析注射后不同时间BmToll9-2基因在中肠中的表达水平。【结果】RT-PCR结果表明,BmToll9-2基因在家蚕4龄幼虫的脂肪体、马氏管、神经和丝腺中高度表达,在5龄幼虫脂肪体、中肠、马氏管和神经中均有较高表达。实时荧光定量PCR结果显示,注射脂多糖能诱导5龄幼虫中肠中BmToll9-2基因转录,在注射后6 h时的诱导效果最好;注射大肠杆菌也能诱导BmToll9-2基因转录,在注射后3和6 h时的诱导效果最好。【结论】家蚕幼虫BmToll9-2基因在脂多糖和大肠杆菌处理后上调表达,提示BmToll9-2受体可能参与昆虫Toll样受体对脂多糖和细菌的识别过程。