TLR4和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化及与其预后的关系

目的探讨原发性肝癌患者Toll-样受体4(TLR4)与肠道菌群的动态变化及与其预后的关系。方法回顾性分析肝脏疾病患者120例的临床资料,其中40例肝硬化合并乙型肝炎患者纳入肝硬化组,50例慢性乙型肝炎患者纳入肝炎组,30例肝癌患者纳入肝癌组,同期行健康体检的志愿者100例为对照组。分析各组外周血CD14^(+)TLR4^(+)阳性表达率,对比各组肠道菌群分布情况、相关性,以及TLR4表达、肠道菌群分布与肝癌患者预后的关系。结果肝癌组外周血TLR4^(+)单核细胞阳性率最高,与肝炎组、肝硬化组及对照组比较,有统计学差异(P<0.05);肝癌组双歧杆菌、乳酸杆菌菌群分布均少于肝硬化组、肝炎组及对照组,肠球菌及大肠埃希菌菌群分布均多于肝硬化组、肝炎组及对照组,有统计学差异(P<0.05);相关性分析显示,单核细胞表面TLR4表达与双歧杆菌、乳酸杆菌呈负相关(γ=-0.673、-0.644,P=0.022、0.015);单核细胞表面TLR4表达与大肠埃希菌及肠球菌呈正相关(γ=0.742、0.776,P=0.012、0.007);复发患者外周血中单核细胞阳性率为(59.93±8.67)%,高于未复发患者的(55.01±4.03)%,死亡患者外周血中单核细胞阳性率为(61.05±9.47)%,高于存活者的(53.24±7.96)%,有统计学差异(P<0.05);未复发及死亡患者双歧杆菌、乳酸杆菌菌群分布均高于复发者及存活者,肠球菌及大肠埃希菌菌群分布少于复发者及存活者,有统计学差异(P<0.05)。结论TLR4及肠道菌群与原发性肝癌存在密切联系,监测其变化有助于评估患者病情进展状况及预后,为临床进一步诊疗提供参考。

宣肺通窍汤对分泌性中耳炎大鼠的作用及与TLR4/MyD88/NF-κB通路相关机制探讨

目的探讨宣肺通窍汤对分泌性中耳炎(SOM)大鼠的作用及与TLR4/MyD88/NF-κB通路相关机制。方法从50只大鼠中随机选取10只为对照组,其余大鼠建立SOM模型,建模过程中4只大鼠建模失败,其余大鼠随机分为4组,各9只,分别为SOM组,宣肺通窍汤低、高剂量组及头孢克洛组。宣肺通窍汤低、高剂量组给予0.5、1.5 g·mL^(-1)浓度的宣肺通窍汤,10 mL·kg^(-1)·d^(-1),头孢克洛组给予头孢克洛0.1 g·kg^(-1)·d^(-1),对照组与SOM组灌胃给予等量的生理盐水,连续灌胃给药7 d。药物干预后,检测大鼠耳腔灌洗液IL-4、IFN-γ水平,测量大鼠中耳黏膜厚度及中性粒细胞数量,观察大鼠中耳黏膜病理学变化,并检测鼓膜组织TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白表达情况。结果与对照组比较,SOM组IL-4水平升高、IFN-γ水平降低,中耳黏膜厚度及中性粒细胞计数增加,TLR4、MyD88及p-NF-κB/NF-κB表达上调(P<0.05);与SOM组比较,宣肺通窍汤低、高剂量组及头孢克洛组IL-4水平降低、IFN-γ水平升高,中耳黏膜厚度及中性粒细胞计数减少,TLR4、My D88及p-NF-κB/NF-κB表达下调(P<0.05);与宣肺通窍汤低剂量组比较,宣肺通窍汤高剂量组及头孢克洛组IL-4水平降低、IFN-γ水平升高,中耳黏膜厚度及中性粒细胞计数减少,TLR4、My D88及p-NF-κB/NF-κB表达下调(P<0.05);与宣肺通窍汤高剂量组比较,头孢克洛组IL-4水平降低、IFN-γ水平升高,中耳黏膜厚度及中性粒细胞计数减少,TLR4、MyD88及p-NF-κB/NF-κB表达下调(P<0.05)。结论宣肺通窍汤能够改善分泌性中耳炎大鼠中耳黏膜厚度及中性粒细胞数量,降低炎症因子水平,其作用与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路有关。

Toll样受体4和CD_(14)基因多态性与川崎病易感性的相关研究

目的探讨Toll样受体4(TLR4)及脂多糖受体CD14基因多态性与川崎病(KD)易感性的关系。方法应用三色荧光标记流式细胞术检测76例KD患儿和118例健康儿童外周血白细胞TLR4表达水平,采用聚合酶链反应限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)法检测2组儿童TLR4基因(-896A/G),(-1196C/T)位点和CD14基因(-260C/T)位点的基因型频率和等位基因频率及其与KD的关系。结果1.KD组和健康对照组外周血淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞TLR4平均免疫荧光强度(MFI)分别为2.87±0.96,10.55±4.87,23.36±8.28和3.26±0.65,7.55±1.21,25.41±6.97;2.在KD组和健康对照组均未发现TLR4基因(-896A/G)和(-1196C/T)的多态位点;3.KD组和健康对照组CD14基因(-260C/T)位点均有突变,其CC,CT,TT基因型分布分别为35.5%、30.3%、34.2%和38.1%、47.5%、14.4%,差异有统计学意义(χ2=11.62P<0.05);其C,T等位基因频率则分别为50.7%、49.3%和61.9%、38.1%,差异有统计学意义(χ2=4.76P<0.05);其等位基因频率的相对风险分析发现T等位基因携带者发生KD的风险是C等位基因的1.58倍。结论TLR4基因(-896A/G)和(-1196C/T)位点多态性与KD发病无关,CD14基因(-260C/T)多态性T等位基因与KD发病密切相关,其可能是KD发病的遗传学易感因素。

乌司他丁对重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞Toll样受体4表达的影响

目的:研究乌司他丁对重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞Toll-样受体4(TLR4)表达的影响。方法:将58例重症急性胰腺炎患者随机分为乌司他丁组(29例,予以常规治疗+乌司他丁)和常规组(29例,予以常规治疗),同时选择20例健康志愿者作为对照组。入院后第1、3、5、7、14天采集静脉血,对照组仅采血1次。用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4、CD14的表达,用ELISA试剂盒检测血浆TNF-α、IL-6的浓度,并分析与TLR4表达的相关性。结果:与对照组比较,在入院第1天常规组和乌司他丁组患者外周血单核细胞TLR4表达明显增高(P<0.01),两组在入院后第3、5天TLR4表达逐渐降低,但仍高于对照组(P<0.05)。乌司他丁组与常规组相比,入院第1天治疗前,外周血单核细胞TLR4表达差异无统计学意义(P>0.05),而在入院后第3、5、7天乌司他丁组外周血单核细胞TLR4的表达均明显低于常规组(P<0.05)。血浆TNF-a、IL-6浓度的变化与TLR4变化一致。结论:重症急性胰腺炎患者早期外周血单核细胞表面TLR4的表达明显增高,乌司他丁对重症急性胰腺炎引起的全身炎症反应的拮抗和抑制作用与其抑制单核细胞表面Toll样受体4的表达从而抑制炎症反应有关。

“TLR2/4-NF-κB”信号转导通路在痛风性关节炎发病中的作用机制

Toll样受体家族(Toll-like receptors TLRs)是模式识别受体,在细胞膜和细胞质中均有存在,参与炎症反应的发生。已有研究表明,TLR2与TLR4介导的NF-κB信号转导通路调控炎症因子IL-β的产生,其在痛风性关节炎发病过程中发挥关键作用。本文以痛风性关节炎的发病机制为主线,从TLRs的结构与分布,配体与介导的信号通路,以该通路为靶点治疗痛风性关节炎的有效性,该通路与痛风性关节炎的相关性佐证及基于该信号通路为导向的中医药研究进展进行综述。

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的 观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P<0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P<0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P<0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P<0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P<0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P<0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P<0.05)。结论 雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。

乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织Toll样受体4表达的影响

目的研究乌司他丁对急性坏死性胰腺炎肺组织Toll-样受体4(TLR4)表达的影响及其意义。方法56只SD大鼠经逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠(TAC)制作大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤动物模型,大鼠分为对照组(n=8)、急性坏死性胰腺炎组(n=24)和治疗组(n=24)。对照组和急性坏死性胰腺炎组给予尾静脉注射生理盐水,治疗组给予尾静脉注射乌司他丁。分别测定各组血清淀粉酶和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,计算肺组织学评分和肺损伤指数以评价肺损伤程度,荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组不同时间点肺组织TLR4 mRNA表达。结果与对照组比较,急性坏死性胰腺炎组大鼠各时点肺组织TLR4 mRNA表达明显增高(均P<0.01),并在12h达到峰值,同时肺组织MPO活性增高,肺损伤加重(P<0.05或P<0.01)。与急性坏死性胰腺炎组相比,治疗组肺组织TLR4 mRNA表达明显降低,肺损伤减轻,MPO活性降低(均P<0.05)。结论急性坏死性胰腺炎时,肺组织内TLR4 mRNA表达明显上调,肺部炎症反应及肺损伤加重;乌司他丁可以降低急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织TLR4 mRNA表达,减轻肺部炎症和肺损伤。

TLR4和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化及与预后的关系

目的探讨Toll-样受体4(TLR4)和肠道菌群在原发性肝癌进展中动态变化情况,并分析其与预后之间的关系。方法选取100例慢性乙肝患者、80例肝硬化合并乙型肝炎患者和60例肝癌合并乙型肝炎患者作为研究对象,并分别命名为乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组,另选取年龄及性别与其匹配的100名健康体检者作为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血单核细胞表面TLR4表达情况,收集各组新鲜粪便,并检测其肠道菌群的分布,并分析两者之间的关系。比较各组外周血单核细胞表面TLR4表达和肠道菌群分布差异,并分析其与肝癌患者预后之间的关系。结果对照组、乙型肝炎组、肝硬化组和肝癌组外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(34.92±4.79)%、(41.92±7.46)%、(49.21±8.83)%和(57.62±10.58)%,4组比较差异有统计学意义(F=78.624,P<0.01);双歧杆菌含量分别为(10.73±2.91)lg CFU/g、(8.15±2.04)lg CFU/g、(6.33±1.32)lg CFU/g和(5.21±0.87)lg CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=15.932,P<0.01);肠球菌含量分别为(4.91±0.78)log CFU/g、(6.44±1.29)log CFU/g、(8.11±2.08)log CFU/g和(10.21±2.77)log CFU/g,4组比较差异有统计学意义(F=12.372,P<0.01)。经Pearson相关分析得知,单核细胞表面TLR4表达与乳酸杆菌和双歧杆菌呈负相关(P<0.05),其相关系数分别为-0.643和-0.672;与肠球菌和大肠埃希菌呈正相关(P<0.05),其相关系数分别为0.771和0.734。随访1年,60例肝癌患者中,18例复发,15例死亡。复发者和未复发者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(59.32±9.17)%和(55.21±5.23)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.200,P=0.032);死亡者与生存者外周血CD14+TLR4+单核细胞阳性率分别为(61.04±10.23)%和(53.29±8.11)%,两者比较差异有统计学意义(t=2.998,P=0.004)。与未复发者和生存者比较,复发者和死亡者双歧杆菌和乳酸杆菌含量明显减少,但肠球菌和大肠埃希菌含量则明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TLR4可促进HBV进展为肝癌,与肠道菌群变化明显相关,两者在肝癌预后监测中有一定价值。

红景天苷通过TLR4调控DC提高T细胞对肺癌3LL细胞的杀伤力

目的:探讨红景天苷(salidroside,SAL)对树突状细胞(dendritic cell,DC)表型及细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)抗肿瘤能力的影响。方法:选用Lewis肺癌细胞株3LL、野生型C57BL/6和TLR4-/-C57BL/6小鼠,获取小鼠骨髓来源的DC前体细胞,经过培养分化成未成熟DC,收获第6天的DC,经磁珠分选后获得纯度较高的CD11c+DC。将细胞分成PBS组、SAL组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组,培养48 h后用流式细胞术检测SAL体外对DC表面分子、吞噬功能、TLR4通路和对T细胞杀伤能力的影响。结果:与PBS组比较,SAL组DC的表面分子CD80、CD86、MHCⅡ表达水平显著升高(均P<0.05)、吞噬功能显著下降(P<0.05)、TLR4表达水平显著升高(P<0.01);与野生型组比较,TLR4-/-组DC经SAL或LPS处理后,其表面分子CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平显著降低(均P<0.05);与PBS组比较,SAL组刺激活化的CTL对肺癌3LL细胞的杀伤效应显著升高(P<0.05)。结论:SAL可以通过调控TLR4诱导DC成熟,从而提高T细胞的杀伤能力。

血清miR-497联合TLR4及Lp-PLA2在缺血性脑卒中诊断及预后中的相关性研究

目的探究血清微小RNA-497(miR-497)联合Toll-样受体4(TLR4)及脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)在缺血性脑卒中(IS)诊断及预后中的价值。方法收集2016年6月到2017年12月该院确诊的IS患者160例作为IS组,选取出血性脑卒中患者80例作为出血性脑卒中组,同期收集在该院体检健康人群160例作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血清miR-497表达量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清TLR4与Lp-PLA2水平并从患者入院开始对纳入的160例IS患者进行6个月的随访。结果与出血性脑卒中组和健康对照组相比,IS组患者血清miR-497、TLR4及Lp-PLA2水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。IS患者血清miR-497、TLR4及Lp-PLA2水平与IS患者NIHSS评分呈正相关(miR-497:r=0.545,P=0.001;TLR4:r=0.538,P=0.002;Lp-PLA2:r=0.566,P=0.001)。联合血清miR-497,TLR4和Lp-PLA2时,区分IS组与出血性脑卒中组和健康对照组的曲线下面积(AUC)为0.975(95%CI:0.932~0.998,P<0.05),灵敏度为94.2%,特异度为74.3%。生存分析显示,相比低miR-497组,高miR-497组患者的生存时间显著缩短(χ2=8.405,P=0.004);相比低TLR4组,高TLR4组患者的生存时间显著缩短(χ2=5.171,P=0.023);相比低Lp-PLA2组,高Lp-PLA2组患者的生存时间显著缩短(χ2=11.417,P=0.001)。Cox比例回归模型分析结果提示,高miR-497、高TLR4、高Lp-PLA2和高血压等因素均是提高IS患者死亡风险的重要因素。结论血清miR-497、TLR4及Lp-PLA2对IS具有潜在的诊断及预后价值。

与杂交牛乳房炎相关的TLR4基因部分序列的分子特性和表达谱分析

与本地黄牛相比,杂交牛更易患乳腺炎。Toll-样受体4(TLR4)能识别病原体配体,如大肠杆菌脂多糖(LPS)内毒素,通过介导信号在天然免疫和获得性免疫中起作用。TLR4的突变位点可以识别宿主免疫反应的病原体,因此可以作为提高奶牛乳腺炎抗性的候选基因。鉴于此,本试验对牛TLR4基因与乳腺炎抗性的相关性进行了研究,并对其在杂交牛中的表达谱进行了分析。以加利福尼亚乳腺炎测试法(CMT)测定结果和试验场参考数据为依据,将试验动物分为2组:感染乳腺炎组和正常组。PCR-SSCP和序列分析结果发现,在牛TLR4基因辅助受体结合区1(CRBR1)有3种基因型:AA、AB和BB。Logistic回归模型分析发现,突变位点基因型对临床乳腺炎的发生无显著影响;且LPS体外刺激外周血单个核细胞(PBMC)试验结果发现,不同基因型间TLR4基因的表达无显著相关。结果表明,TLR4基因CRBR1片段多态性与杂交牛的乳腺炎易感性无明显的相关性。

TRPV4在高血压小鼠胸主动脉舒张中的作用

目的:研究瞬时受体电位香草素亚型4(transient receptor potential vanilloid type 4,TRPV4)在高血压小鼠胸主动脉舒张中的作用,并探讨其作用机制。方法:分离小鼠胸主动脉,取其离体胸主动脉血管环进行血管张力测试,以1μmol/L盐酸苯肾上腺素预收缩血管,分别观察对照组与TRPV4抑制剂HC067064处理组在乙酰胆碱(ACh)和GSK1016790A介导下血管张力变化,野生型与TRPV4基因敲除(TRPV4-/-)小鼠在ACh和GSK1016790A介导下血管张力变化;对于普通饮食组和高盐饮食组小鼠胸主动脉环进行血管张力测试,检测GSK1016970A舒张血管的张力变化。结果:HC067064组在ACh和GSK1016790A引起的动脉舒张反应明显低于对照组(P<0.05);TRPV4-/-小鼠胸主动脉环在ACh和GSK1016790A引起的动脉舒张反应亦低于野生型小鼠(P<0.05);高盐饮食组GSK1016790A引起的动脉舒张反应低于普通饮食组(P<0.05)。结论:TRPV4参与了小鼠胸主动脉的舒张作用,此作用是通过刺激TRPV4通道开放,促进内皮细胞外钙离子内流进入胞内,经过一系列信号转导,继而舒张血管;但是在病理模型,如高盐饮食下,TRPV4在胸主动脉中的舒张作用会被抑制。

慢性心力衰竭合并肺部感染外周血miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4/NF-κB表达

目的探究慢性心力衰竭合并肺部感染外周血微小核糖核酸(miR)-21、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)mRNA、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Toll-样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路表达意义。方法选取滨州医学院附属医院2021年7月一2023年7月收治的慢性心力衰竭患者121例为研究对象,将发生肺部感染和未发生肺部感染的患者分别纳人感染组35例和非感染组86例。统计感染组病原菌分布,比较两组血清miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4、NF-κB水平,miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4、NF-κB水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析其对慢性心力衰竭合并肺部感染的预测价值。结果感染组分离出48株病原菌,革兰阴性菌占比最高,以大肠埃希菌为主。感染组血清miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4、NF-κB水平高于非感染组(P<0.05)。miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4、NF-κB联合检测诊断慢性心力衰竭患者合并肺部感染的曲线下面积(AUC)比各指标单一检测高(P<0.05),且联合检测敏感度、特异度为94.29%、83.72%。结论革兰阴性菌为慢性心力衰竭合并肺部感染的主要病原菌,慢性心力衰竭合并肺部感染患者血清miR-21、Tim-3及MMP-9水平呈高表达,TLR4/NF-κB信号通路被激活;miR-21、Tim-3、MMP-9、TLR4、NF-κB五指标联合检测可提高慢性心力衰竭患者合并肺部感染预测价值。

诱生型一氧化氮合酶在代谢型谷氨酸受体参与老年性痴呆发病中的作用

目的观察诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric-oxide synthase,iNOS)在Ⅱ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor 2/3,mGluR2/3)参与老年性痴呆(AD)发病过程中的可能作用。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、AD组和AD+α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氮酸(α-methyl-4-tetrazolyl-phenyl,MTPG)组3组,每组16只。AD组与AD+MTPG组经SD大鼠左侧脑室注入凝聚态Aβ25-35制做AD大鼠模型,假手术组以相同操作注射等量蒸馏水。1周后,AD+MTPG组于右侧脑室注射MTPG,AD组和假手术组注射等体积人工脑脊液。5周后取脑组织,应用硫堇染色、免疫组化和原位杂交方法,观察大鼠海马CA1区锥体神经元损伤情况,以及iNOS和iNOS mRNA表达。结果 (1)硫堇染色结果显示:假手术组海马CA1区锥体神经元轮廓清楚,排列整齐;AD组与假手术组相比,锥体神经元数目较少,轮廓欠清,形态不规则;AD+MTPG与AD组相比,神经元形态明显恢复,排列较规则。(2)免疫组化结果显示:假手术组神经元胞质有较弱的iNOS表达;AD组iNOS表达较假手术组明显增强;AD+MTPG iNOS表达较AD组减弱。(3)原位杂交结果显示:3组iNOS mRNA与iNOS表达呈相似的变化趋势。结论 iNOS在mGluR2/3参与AD发病过程中具重要作用。

肠内免疫微生态营养对大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤保护作用的研究

目的探讨肠内免疫微生态营养对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法将大鼠分为空白组、SAP-ALI组,肠内营养组(EN组)和肠内免疫微生态营养组(EIN组),大鼠SAP采用牛磺胆酸钠造模,EN及EIN组于造模成功后行相应肠内营养支持。72 h后处死大鼠后取肺脏,观察肺组织形态学变化、计算肺损伤评分和湿/干重比;免疫组化检测肺组织TLR 4、NF-κB p65的表达;ELISA法测定血清TNF-α、IL-1β含量。结果与空白组相比,SAP-ALI组肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β均明显升高(P<0.05);免疫组化结果发现,与空白组相比,SAP-ALI组TLR 4、NF-κB p65表达显著增强(P<0.05);与SAP-ALI组、EN组相比,EIN组TLR 4、NF-κB p65表达显著降低(P<0.05);并且EIN组血清肺损伤评分、肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β与SAP-ALI组、EN组比较均显著降低(P<0.05)。结论肠内免疫微生态营养有助于降低肠源性内毒素(LPS)的产生,进而降低TLR 4/NF-κB信号通路的激活,从而减轻SAP-ALI的病情。

微生物多糖调控克罗恩病肠道炎症免疫反应的机制研究

目的:研究微生物多糖调控克罗恩病肠道炎症免疫反应的机制。方法:选取60只健康雄性BABL/c小鼠,将小鼠随机分为三组,分别为对照组、模型组及实验组,每组20只。实验组和模型组小鼠建立克罗恩病模型,实验组小鼠给予灌胃已制备好的微生物多糖溶液0.25 mL/次,模型组和对照组小鼠灌胃等量的无菌水,2次/d,连续21 d。检测各组小鼠疾病活动度评分、组织病理学评分及相关通路蛋白。结果:与对照组相比,模型组和实验组小鼠DAI评分明显升高;与模型组相比,实验组小鼠DAI评分明显降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组及实验组小鼠组织病理学评分明显升高;与模型组相比,实验组小鼠组织病理学评分显著降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组和实验组血清促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平升高,IL-10表达水平降低;与模型组相比,实验组血清促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平降低,IL-10表达水平升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组和实验组小鼠结肠组织炎性因子Toll-样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白抗原88(MyD88)、核因子кB p65(NF-κBp65)蛋白表达水平均明显升高;与模型组相比,实验组小鼠结肠炎性因子TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论:微生物多糖通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控克罗恩病肠道炎症免疫反应的机制。

支气管哮喘合并肺炎支原体感染患者血清致炎细胞因子水平及对TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨支气管哮喘合并肺炎支原体感染患者血清致炎细胞因子水平变化及对Toll-样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法 选取2020年3月-2022年9月山东第一医科大学第二附属医院收治的98例支气管哮喘合并肺炎支原体感染的患者为感染组,同期106例支气管哮喘未合并肺炎支原体感染的患者为未感染组,另选113名健康体检者作为对照组。比较三组致炎细胞因子、TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)信使核糖核酸(mRNA)相对表达量、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB)及不同肺炎支原体抗体(MP-IgM)滴度致炎细胞因子水平。结果 感染组血清致炎细胞因子水平高于未感染组、对照组,未感染组高于对照组(P<0.05);高滴度组、中滴度组血清致炎细胞因子水平均高于低滴度组(P<0.05);感染组TLR4、NF-κB mRNA相对表达量、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、p-IκB蛋白均高于未感染组、对照组,未感染组高于对照组,感染组IκB mRNA相对表达量低于未感染组、对照组,未感染组低于对照组(P<0.05)。结论 血清致炎细胞因子在支气管哮喘合并肺炎支原体感染患者MP-IgM抗体中、高滴度中呈高表达,上述因子与TLR4、NF-κB mRNA相对表达量、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、p-IκB蛋白随着支气管哮喘、肺炎支原体感染的发生而升高,IκB mRNA相对表达量随之下降。

腹部外科患者术后肠道菌群分布及血清ADPN、TLR4、sTREM-1水平的变化

目的观察腹部外科患者术后肠道菌群分布及血清脂联素(ADPN)、Toll-样受体4(TLR4)、可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)水平变化,为该类患者的治疗提供参考。方法选择2022年5月至2023年6月本院收治的87例腹部外科患者为研究组,选择同期84名健康体检者作为对照组。比较两组对象肠道菌群数量及研究组手术前后血清ADPN、TLR4、sTREM-1水平,并分析肠道菌群数量和这3项血清指标是否存在相关性。结果研究组患者术前肠道大肠埃希菌、肠球菌数量及血清TLR4、sTREM-1水平均较对照组高,双歧杆菌、乳杆菌数量及血清ADPN水平均较对照组低(均P<0.05);术后1个月,研究组患者肠道大肠埃希菌、肠球菌数量及血清TLR4、sTREM-1水平均高于术前,双歧杆菌、乳杆菌数量及血清ADPN水平均低于术前(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,腹部外科患者术后1个月血清ADPN水平与大肠埃希菌、肠球菌数量均呈负相关(r=-0.564、-0.618,均P<0.001),与双歧杆菌、乳杆菌数量均呈正相关(r=0.561、0.547,均P<0.001);血清TLR4、sTREM-1水平与大肠埃希菌、肠球菌数量均呈正相关(TLR4:r=0.417、0.571,P=0.008、<0.001;sTREM-1:r=0.589、0.634,均P<0.001),与双歧杆菌、乳杆菌数量均呈负相关(ADPN:r=-0.561、0.547,均P<0.001;TLR4:r=-0.394、-0.441,P=0.011、0.006;s TREM-1:r=-0.578、-0.657,均P<0.001)。结论腹部外科患者术后存在显著的肠道菌群变化,表现为大肠埃希菌和肠球菌数量增多,双歧杆菌和乳杆菌数量减少,同时伴有血清ADPN、TLR4、s TREM-1水平异常。且肠道菌群变化与血清ADPN、TLR4、sTREM-1水平均存在相关性。

肺炎支原体感染对慢性心力衰竭TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨肺炎支原体(MP)感染对慢性心力衰竭(CHF)患者Toll-样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路表达的影响。方法选择2015年9月-2020年9月在南阳医学高等专科学校第一附属医院确诊的41例CHF合并MP感染患者为CHF合并MP组,以同期医院收治的41例单纯CHF患者为CHF组。入组第2天,采用彩色多普勒超声仪检测所有患者的心功能;检测血白细胞(WBC)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、氨基N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)水平;荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹(western blot)检测TLR4/NF-κB信号通路表达。结果CHF合并MP组患者的左心室射血分数(LVEF)低于CHF组(P<0.05),血清心功能相关指标CK-MB、LDH、cTnI和NT-proBNP水平高于CHF组(P<0.05),免疫炎症相关指标WBC、IL-6、TNF-α、CRP和PCT水平高于CHF组(P<0.05);TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA高于CHF组(P<0.05),TLR4、NF-κB和p-IκB蛋白水平高于CHF组(P<0.05)。结论MP感染可以激活TLR4/NF-кB信号通路表达,促进炎症因子释放,加重CHF患者的心脏结构和功能损伤。

TLR-4在慢性阻塞性肺病患者肺组织表达的研究

目的:观察COPD患者肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC的表达,并探讨其在气道炎症、气道高分泌中的作用。方法:非COPD、COPD组男性肺癌病人各20例,取其肺叶切除后的外周肺组织,对肺组织标本行HE及AB-PAS染色,用免疫组织化学方法检测肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC的表达并分析其相关性。结果:①COPD患者肺组织中TLR-4,IL-8,MUC5AC表达较对照组增高(P<0.05)。TLR-4主要在气道上皮细胞、肺巨噬细胞及血管内皮细胞表达,IL-8在气道壁、肺泡间隔、血管壁及肺组织内浸润的单核细胞、巨噬细胞、多形核白细胞均有表达,MUC5AC主要在气道上皮杯状细胞中表达。②TLR-4、IL-8表达与气道炎细胞评分成正相关(P<0.05)。TLR-4与IL-8、MUC5AC表达成正相关(P<0.05)。结论:COPD患者肺组织中TLR-4高表达可能参与了COPD的气道炎症及气道高分泌,这可能是通过增加IL-8与MUC5AC的表达来实现的。