桑白皮提取物抑制高迁移率族蛋白/Toll样受体4通路对肺炎支原体肺炎大鼠的保护机制

目的:探究桑白皮提取物对肺炎支原体(MP)肺炎大鼠的药效,以及对高迁移率族蛋白(HMGB-1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路的影响。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为对照组、MP肺炎模型组、阿奇霉素(阳性对照)组及桑白皮提取物低、中、高剂量组[2、4、8 g/(kg·d)],每组各12只。除对照组外,其余大鼠构建MP肺炎大鼠模型,并给予相应剂量的药物处理。显微镜下计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中炎性细胞因子水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;Western blotting法和免疫组化检测肺组织HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:对照组大鼠肺组织细胞排列正常,无病变;MP肺炎模型组大鼠肺组织异常,大量炎性细胞浸润;经桑白皮提取物给药后,大鼠肺组织损伤明显减轻,炎性细胞浸润明显减少。与对照组相比,MP肺炎模型组大鼠肺系数、BALF中炎性细胞计数、血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺组织中HMGB-1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白水平升高,IL-10水平降低(P<0.05)。与模型组相比,桑白皮提取物各剂量组和阿奇霉素组大鼠上述指标趋势相反(P<0.05)。结论:桑白皮提取物可能通过抑制HMGB-1/TLR4信号通路,减轻炎症反应,发挥对MP肺炎大鼠的保护作用。

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

背景:炎症反应是诱发脑缺血再灌注损伤的重要因素之一。研究表明电针可有效降低缺血性脑卒中后炎症反应,改善神经功能缺损症状,但机制尚未明确。目的:观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠Toll样受体4/核因子κB信号通路及炎性因子表达的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组16只,采用大脑中动脉线栓阻断法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型。造模24 h后对电针组大鼠行电针干预,每天1次,每次20 min,共5 d;假手术组和模型组不做任何干预。干预5 d后根据Longa法评定各组大鼠神经功能损伤程度;TTC染色和苏木精-伊红染色分别观察大鼠脑梗死体积及脑组织病理形态,荧光定量PCR和Western blot分别检测大脑皮质中Toll样受体4、核因子κB mRNA和蛋白表达;酶联免疫法检测血清中炎性因子白细胞介素6、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:①与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α水平、大脑皮质Toll样受体4、核因子κB mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分、大脑皮质Toll样受体4、核因子κB mRNA及蛋白表达,血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α水平明显降低(P<0.05,P<0.01);②与假手术组比较,模型组大鼠脑梗死体积明显增加(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠脑梗死体积减小(P<0.05);③模型组神经元排列紊乱,部分神经细胞消失,胞核固缩,结构不完整;电针组大脑皮质神经元变性及神经细胞数量丢失程度均有不同程度减轻;④结果表明,电针能明显改善脑缺血再灌注损伤模型大鼠的神经行为学,减轻脑组织损伤,有效降低血清炎性因子水平,其机制可能与抑制Toll样受体4/核因子κB信号通路有关。

铁皮石斛多糖与Toll样受体4互作机制的计算模拟

为研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)具有免疫活性片段的结构特征及与Toll样受体4(Toll⁃like receptor 4,TLR4)的相互作用机制,基于对TLR4结合腔的亲疏水性分析,将DOP寡糖的分为疏水片段筛选和亲水片段筛选,通过分子对接和分子动力学模拟,分析作用最强的DOP片段的结构特征及与TLR4的相互作用机制。结果表明,找到作用最强的DOP七糖片段,具有与经典底物脂多糖相似的结合模式,其中疏水性四糖片段结合在疏水结合腔,亲水性三糖片段结合在电正性区域。具有潜在免疫活性的铁皮石斛多糖可以由乙酰基修饰的疏水四糖片段和没有乙酰基修饰的亲水三糖片段组成,主要通过氢键和疏水作用与TLR4进行相互作用,发挥免疫活性。

Toll样受体4/核因子-κB p65通路对轮状病毒肠炎患儿肝损害的影响

目的探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p56通路对肝损害的影响。方法选取50例RV肠炎患儿为RV组,另选取同期50例RV感染阴性的肠炎患儿为对照组。采用全自动生化分析仪检测患儿肝功能指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。采用聚合酶链式反应(PCR)检测外周血单核细胞(PMBC)的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65蛋白表达水平。比较2组患儿血清AST、ALT水平和肝损害发生率。比较2组患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达。比较RV组中伴肝损害患儿和无肝损害患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析RV肠炎患儿肝功能与TLR4/NF-κB p65通路的相关性。结果RV组患儿血清AST、ALT水平及肝损伤发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组中,伴肝损害患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于无肝损害患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。RV肠炎患儿血清AST、ALT与TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论RV肠炎患儿肝损害发生率较高,且与TLR4/NF-κB p65通路相关。TLR4/NF-κB p65通路过度激活可能是RV肠炎患儿发生肝损害的原因之一。

Toll样受体4激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及其作用机制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制。方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只。构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次。然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理。处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关。

C-X-C趋化因子受体4增强Toll样受体2在肺炎衣原体感染促进动脉粥样硬化病变形成中的作用

[目的]探究C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)在肺炎衣原体(C.pn)感染促进动脉粥样硬化(As)病变形成中的作用。[方法]以高脂饮食为基础,建立C.pn感染诱导ApoE^(-/-)、ApoE^(-/-)+Toll样受体2(TLR2)^(-/-)、ApoE^(-/-)+TLR2^(-/-)+AMD3100小鼠As模型,ELISA检测ApoE^(-/-)小鼠血清C.pn IgG、IgM抗体水平,PCR检测肺组织C.pn特异性DNA,油红O染色和HE染色观察主动脉及主动脉根部脂质沉积和As病变面积,比色法测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平,ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)含量。[结果]ApoE^(-/-)小鼠C.pn感染模型成功建立。与对照组相比,C.pn感染后ApoE^(-/-)小鼠主动脉及主动脉根部脂质沉积量增加89.08%和71.83%,As病变面积增加34.12%(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少46.16%和75.73%,As病变面积减少63.37%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组主动脉及主动脉根部脂质沉积量减少26.19%和56.94%,As病变面积则减少22.24%(均P<0.05)。与对照组相比,C.pn感染后血清TC、TG和LDLC水平分别升高0.62倍、1.43倍和1.34倍,血清IL-1β和IL-6含量分别增加4.10倍和6.00倍(均P<0.05);与C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低56.96%、50.41%和66.64%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少66.72%和69.54%(均P<0.05);与TLR2^(-/-)+C.pn感染组相比,TLR2^(-/-)+AMD3100+C.pn感染组血清TC、TG和LDLC水平分别降低52.18%、58.56%和60.61%,血清IL-1β和IL-6含量分别减少28.84%和43.18%(均P<0.05)。[结论]CXCR4可增强TLR2在升高血脂水平及炎症因子含量中的作用,进而参与C.pn感染诱导的As病变形成。

微小RNA-145-5p靶向Toll样受体4参与动脉粥样硬化泡沫细胞炎症和氧化应激反应

目的 探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)对动脉粥样硬化细胞模型中炎性反应和氧化应激过程的调控作用。方法 体外构建人单核细胞白血病细胞源性泡沫细胞,分为模型组和对照组,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞内miR-145-5p相对表达。采用TargetScan数据库预测miR-145-5p与Toll样受体4(TLR4)的靶向关系。将293T细胞分为野生型+模拟物(mimic)组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物)、野生型+mimic NC组(转染TLR4野生型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照)、突变型+mimic组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物)、突变型+mimic NC组(转染TLR4突变型质粒+miR-145-5p模拟物阴性对照),采用双荧光素酶实验验证miR-145-5p与TLR4的靶向关系。体外诱导泡沫细胞,分为mimic组(转染miR-145-5p模拟物)、mimic NC组(转染模拟物阴性对照)、抑制物(inhibitor)组(转染miR-145-5p抑制物)、inhibitor NC组(转染抑制物阴性对照),采用qRT-PCR、Western blot检测TLR4 mRNA及蛋白表达,酶联免疫吸附检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β和IL-6表达,生化相关试剂盒测定活性氧、丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 与对照组比较,模型组miR-145-5p表达明显降低(0.29±0.01 vs 1.00±0.08,t=11.180,P<0.01)。双荧光素酶实验显示,miR-145-5p mimic组荧光素酶活性较mimic NC组显著降低,差异有统计学意义(t=8.612,P<0.01)。与mimic NC组比较,mimic组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显降低,miR-145-5p表达、SOD活性明显升高(P<0.05,P<0.01)。与inhibitor NC组比较,inhibitor组TLR4 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、活性氧、丙二醛含量明显升高,miR-145-5p表达、SOD活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 miR-145-5p通过靶向TLR4抑制动脉粥样硬化细胞模型中的炎症和氧化应激反应。

Toll样受体4基因单核苷酸多态性与白内障发病的相关性研究

目的研究Toll样受体4(TLR4)基因单核苷酸多态性(SNPs)与白内障发病的相关性。方法收集皖南医学院第二附属医院2021年1—12月100例年龄相关性白内障(ARC)病例为观察组,86例年龄、性别相匹配的无亲属关系的健康志愿者为对照组,采用单碱基延伸法(SNaPshot)对TLR4两个SNPs位点rs4986790及rs4986791进行基因分型,检验两组2个SNPs基因型与等位基因频率,分离被研究对象外周血单个核细胞(PBMC),酶联免疫吸附法(ELISA)检测其PBMC上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平,分析其与ARC病人TLR4基因SNPs之间的关系。结果Hardy-Weinberg平衡试验结果提示,两组病人TLR4基因rs7986790位点及rs4986791位点的基因型频率分布实际值与理论值符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05);观察组与对照组TLR4基因rs7986790位点基因型及其等位基因占比比较,差异有统计学意义(P<0.05)。rs7986790基因分型为GA及GG者PBMC上清液中TNF-α及IL-6水平[(22.36±4.15)μg/L、(846.69±179.68)ng/L]均高于基因型为AA者[(17.02±2.36)μg/L、(613.45±163.59)ng/L](P<0.05)。结论ARC病人TLR4基因rs7986790位点基因型分布与正常者间存在差异,rs7986790位点等位基因G可能通过促进炎症反应,增加ARC患病风险。

加味芍药甘草汤基于Toll样受体4/核因子κB信号通路对多囊卵巢综合征大鼠妊娠结局及免疫机制的影响

目的观察加味芍药甘草汤基于Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠妊娠结局及免疫机制的影响。方法将80只大鼠按照随机数字表法分为2组,空白组10只和造模组70只。造模组制备PCOS大鼠模型,将造模成功的70只大鼠按照随机数字表法分为7组,模型组10只予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,加味芍药甘草汤低、中、高剂量组各10只,分别予加味芍药甘草汤12.5、25.0、50.0 g/kg灌胃,炔雌醇环丙孕酮片组10只予炔雌醇环丙孕酮片0.2035 g/kg灌胃,抑制剂组10只经尾静脉注射TAK-24210 mg/kg,联合组10只予加味芍药甘草汤50 g/kg灌胃同时尾静脉注射TAK-24210 mg/kg。空白组大鼠予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。检测各组大鼠体质量和卵巢质量;检测各组大鼠T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+);观察各组大鼠卵巢组织中TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;比较各组大鼠妊娠率和各组孕鼠胚泡着床数。结果与空白组比较,模型组体质量和卵巢质量均升高(P<0.05),CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低(P<0.05),CD8^(+)升高(P<0.05),TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数均降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠体质量和卵巢质量均降低(P<0.05),各给药组大鼠CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,CD8^(+)均降低(P<0.05),卵巢组织中TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数均升高(P<0.05);加味芍药甘草汤低、中、高剂量组体质量和卵巢质量、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达、妊娠率和胚泡着床数组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);加味芍药甘草汤高剂量组、炔雌醇环丙孕酮片组和抑制剂组大鼠体质量和卵巢质量、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达、妊娠率和胚泡着床数比较差异均无统计学意义(P>0.05);与加味芍药甘草汤高剂量组比较,联合组大鼠体质量和卵巢质量均降低(P<0.05),CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高(P<0.05),CD8^(+)降低(P<0.05),TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05),妊娠率和胚泡着床数升高(P<0.05)。结论加味芍药甘草汤可调节PCOS大鼠免疫功能,增加PCOS大鼠妊娠率和胚泡着床率,抑制卵巢组织中TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达。

输尿管镜碎石术后发热性尿路感染危险因素及血清β防御素2高迁移率族蛋白B1 Toll样受体4早期预测价值

目的 探讨泌尿结石疾病采取输尿管镜碎石术治疗术后发生发热性尿路感染的相关危险因素,观察血清β防御素2、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)以及Toll样受体4(TLR4)对早期预测尿路感染的价值。方法 回顾性分析122例行输尿管镜碎石术治疗者的临床资料,根据术后是否发生发热性尿路感染分成感染组与未感染组,记录患者资料,分析危险因素,此外采集2组血液分离血清,测定血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平。结果 术后35例(28.7%)发生发热性尿路感染,多因素分析显示年龄≥60岁、手术时间≥60 min、泌尿道手术史、合并糖尿病、导尿管留置时间≥72 h、住院时间≥7 d均是输尿管镜碎石术患者术后发热性尿路感染独立危险因素(P=0.023、0.014、0.016、0.019、0.008、0.011,OR值=2.154、3.021、2.451、2.331、2.025、2.415);感染组血清β防御素2、HMGB1、TLR4检测水平高于未感染组(t=10.48、28.47、22.86,P<0.05)。结论 输尿管镜碎石术,年龄、手术时间、泌尿手术室、合并糖尿管、导尿管留置与住院时间为术后发热性尿路感染的相关危险因素,需加强防范,术后通过检测血清β防御素2、HMGB1、TLR4水平对早期预测感染价值突出,值得推广。

Toll样受体4、降钙素原、高迁移率族蛋白B1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、降钙素原(PCT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。方法根据颅内肿瘤切除术后是否并发重症肺炎将65例颅内肿瘤患儿分为观察组(n=30,并发重症肺炎)和对照组(n=35,未并发重症肺炎)。收集两组患儿的临床资料,采用Logistic回归模型分析颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),分析TLR4、PCT、HMGB1对颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的预测价值。结果单因素分析结果显示,观察组中术前格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、重症监护室(ICU)住院时间≥7天的患儿比例及TLR4、PCT、HMGB1水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,术前GCS评分﹤8分、引流管留置时间≥3天、ICU住院时间≥7天及TLR4、PCT、HMGB1升高均是颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,TLR4、PCT、HMGB1预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的AUC分别为0.838、0.955、0.827。结论TLR4、PCT、HMGB1可作为预测颅内肿瘤患儿术后并发重症肺炎的重要指标。

miR-93靶向TLR4/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠血管内皮炎症反应的影响

目的 探究微小核RNA(miR)-93对Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB的调控作用及对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管内皮炎症反应的影响。方法 大鼠经高脂饲料喂养+腹腔注射维生素D3复制AS模型,随机分为正常对照组、模型组、miR-93模拟物(miR-93 agomir)组、agomir-NC组、RS09(TLR4激活剂)组、miR-93 agomir+RS09组,每组15只,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、C反应蛋白(CRP)]水平;流式细胞术检测循环内皮细胞比例以评价血管内皮损伤状况;Movat染色观察动脉血管泡沫细胞聚集状况;油红O染色检测斑块面积;免疫组化法检测M1型巨噬细胞标记抗体(CD11)阳性表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-93表达;Western印迹法检测TLR4/核因子(NF)-κB通路蛋白、脂质沉积相关蛋白如三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体(ABC)A1、载脂蛋白(Apo)A1、巨噬细胞清道夫受体(ScR)-A、凝集素型氧化低密度脂蛋白受体(Lox)-1、M1型巨噬细胞极化相关蛋白[IL-1β、诱导型一氧化氮(iNOS)]、M2巨噬细胞极化相关蛋白[IL-10,几丁质酶-3样蛋白3(YM1)]表达。结果 与正常对照组相比,模型组动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积严重,斑块面积比例、IL-6、CRP、循环内皮细胞比例、TG、TC、LDL-C水平、TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化、炎症应答活性均明显升高,HDL-C、miR-93表达明显降低(P<0.05)。外源性上调miR-93,可明显促进脂质转运相关蛋白ABCA1及ApoA1表达,明显抑制TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,缓解大鼠动脉血管内膜增厚、泡沫细胞聚集及脂质沉积,明显降低斑块面积及循环内皮细胞比例(P<0.05)。RS09可明显促进TLR4/NF-κB通路活化介导的M1型巨噬细胞极化和炎症应答,并可拮抗miR-93 agomir发挥的上述作用(P<0.05)。结论 外源性上调miR-93表达可能通过靶向抑制TLR4/NF-κB通路活化,发挥抗炎、抗M1型巨噬细胞极化、抗泡沫细胞聚集及抗脂质沉积作用,改善AS大鼠血管内皮损伤。

高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

活心丸(浓缩丸)下调TLR4/TNF-α表达减轻ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探讨活心丸(浓缩丸)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)的影响及机制。方法选取ApoE^(-/-)小鼠,饲以高脂饮食复制As模型,采用不同浓度活心丸和(或)Toll样受体4(TLR4)抑制剂处理,随机分为对照组、活心丸处理组、TLR4抑制剂处理组、活心丸和TLR4抑制剂共处理组。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察As模型鼠主动脉窦病变情况;油红O(ORO)染色观察As模型鼠主动脉窦及主动脉脂质蓄积情况;免疫组织化学法(IHC)检测As模型鼠主动脉窦TLR4、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达情况。结果与对照组比较,活心丸减轻As模型鼠主动脉窦病变,减少主动脉病变处脂质蓄积,降低主动脉窦狭窄程度,差异均有统计学意义(P<0.05);活心丸还下调As模型鼠主动脉窦TLR4和TNF-α表达(P<0.05),TLR4抑制剂与活心丸作用具有协同性。结论活心丸可以减轻ApoE^(-/-)小鼠As病变,其机制可能与下调TLR4、TNF-α表达以及调控炎症反应相关。

樱黄素抑制TLR4/MyD88通路减轻肠上皮炎症反应改善小鼠克罗恩病样结肠炎

目的探讨天然植物化合物樱黄素(PRU)对肠上皮细胞炎症和屏障结构的作用及其对小鼠克罗恩病样结肠炎的影响。方法建立脂多糖(LPS)诱导的结肠类器官炎症损伤模型和2,4,6-三硝基苯磺酸溶液(TNBS)诱导的小鼠结肠炎模型,用于评估PRU对肠上皮炎症反应和肠屏障的影响。另外,使用网络药理学结合体内外研究分析PRU调控肠上皮炎症影响肠炎的分子机制。结果PRU干预可抑制LPS诱导的结肠类器官中促炎介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的释放以及改善TNBS诱导的小鼠结肠炎症状(体质量下降、疾病活动指数和炎症评分升高);同时,PRU促进LPS诱导的小鼠结肠类器官TNBS小鼠肠上皮细胞间紧密连接蛋白闭锁小带蛋白1(ZO-1),密封蛋白1(claudin-1)的表达和改善移位,同时保护肠屏障结构。PRU可靶向结合Toll样受体4(TLR4)并抑制TLR4/髓样分化因子88(MyD88)信号通路活化。结论PRU可通过靶向拮抗TLR4/MyD88信号的激活,抑制肠上皮细胞炎症和保护肠屏障损伤从而改善克罗病样肠炎。

尖锐湿疣患者皮损组织中Toll样受体4、核因子κB p65蛋白表达及临床意义

目的探讨尖锐湿疣患者皮损组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达及临床意义。方法选取2020年1月至2022年8月在江苏省南通市第三人民医院(以下简称“我院”)治疗的尖锐湿疣患者92例作为观察组,另选取同期于我院行包皮环切术的成年男性55例及外阴整形术的成年女性37例作为对照组,采用免疫组织化学染色检测观察组的皮损组织及对照组的皮肤组织中TLR4、NF-κB p65蛋白表达,比较两组TLR4、NF-κB p65蛋白表达的差异,并进一步分析观察组不同临床特征患者TLR4、NF-κB p65蛋白表达的差异。结果观察组TLR4、NF-κB p65蛋白表达阳性率高于对照组(P<0.05)。病程≥3个月、疣体数目≥10个、疣体最大直径≥10 mm患者的TLR4蛋白表达阳性率高于病程<3个月、疣体数目<10个、疣体最大直径<10 mm患者(P<0.05)。疣体数目≥10个、疣体最大直径≥10 mm患者NF-κB p65蛋白表达阳性率高于疣体数目<10个、疣体最大直径<10 mm患者(P<0.05)。结论尖锐湿疣患者皮损组织中TLR4、NF-B p65蛋白呈高表达,可能与疣体数目、疣体最大直径及病程有关。

粉防己碱调节Toll样受体4/核因子-kB通路在子痫前期大鼠模型中的影响

目的探究粉防己碱(Tet)调节Toll样受体4(TLR4)/核因子(NF)-κB通路对子痫前期(PE)大鼠模型的影响。方法20只SPF级Wistar雄性大鼠,40只雌性大鼠,进行PE大鼠建模,将20只妊娠大鼠随机分为两组,即A组与B组,每组10只;A组分为PE-1组与PE+Tet-1组,每组5只;B组分为PE-2组与PE+Tet-2组,每组5只。比较PE+Tet-1组与PE-1组、PE+Tet-2组与PE-2组妊娠各时间点血压、尿蛋白及胎盘重量、胎鼠重量、炎症因子、TLR4和NF-κB蛋白表达。结果妊娠第10天,PE+Tet-1组与PE-1组血压比较差异无统计学意义;妊娠第15、20天,PE+Tet-1组血压均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10、15天,PE+Tet-2组与PE-2组血压比较差异无统计学意义;妊娠第20天,PE+Tet-2组血压低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10天,PE+Tet-1组与PE-1组24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义;妊娠第15、20天,PE+Tet-1组24 h尿蛋白水平均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠第10、15、20天,PE+Tet-2组与PE-2组24 h尿蛋白水平比较差异无统计学意义。PE+Tet-1组胎盘和胎鼠重量均大于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组胎盘和胎鼠重量均大于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。PE+Tet-1组IL-6、TNF-α水平均低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组IL-6和TNF-α水平均低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。PE+Tet-1组TLR4和NF-κB蛋白水平均明显低于PE-1组,差异有统计学意义(P<0.05);PE+Tet-2组TLR4和NF-κB蛋白水平均明显低于PE-2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Tet调节TLR4/NF-κB通路对PE大鼠模型,可降低PE模型大鼠的血压,减少24 h尿蛋白,增加胎盘和胎鼠质量,促进胎鼠发育,抑制炎症因子的表达。

白术内酯Ⅰ对病毒性心肌炎小鼠Toll样受体4的调控作用

目的:探讨白术内酯Ⅰ(ATR-Ⅰ)对病毒性心肌炎(VM)小鼠的治疗作用及其对Toll样受体4(TLR4)的影响。方法:通过对C57BL/6小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导VM小鼠模型,并随机分为5组:Control组、VM组、VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组,每组12只。Control组小鼠为正常饲养的小鼠,其他组小鼠为VM建模小鼠。VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组小鼠分别灌胃0.5 ml 60、120和240 mg/kg的ATR-Ⅰ溶液;Control组和VM组小鼠分别灌胃0.5 ml 0.5%羧甲基纤维素钠溶液。各组小鼠均灌胃7 d。使用超声仪器检测各组小鼠的舒张期内径(LVIDd)、左心室收缩期内径(LVIDs)、左心室短轴缩短率(FS)和左心室射血分数(LVEF)。ELISA和qRT-PCR检测血清和心肌组织中IL-1β、IL-6及TNF-α水平。然后对小鼠心肌组织进行HE染色和Masson三色染色。qRT-PCR或Western blot检测心肌组织中TLR4、NF-κB p65及p-NF-κB p65的mRNA或蛋白水平。结果:与VM组相比,VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组中LVIDd和LVIDs降低,FS和LVEF升高(P<0.05);与VM组相比,VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组血清和心肌组织IL-1β、IL-6及TNF-α水平降低(P<0.05)。心肌损伤程度均呈剂量依赖性减轻。各组小鼠心肌组织中NF-κB p65蛋白水平差异无统计学意义(F=0.219,P=0.927)。与VM组相比,VM+L-ATR-Ⅰ组、VM+M-ATR-Ⅰ组和VM+H-ATR-Ⅰ组心肌组织TLR4mRNA和蛋白水平及p-NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论:在CVB3诱导的VM小鼠模型中,ATR-Ⅰ可剂量依赖性地抑制心肌炎症,减轻心肌损伤并改善心功能,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44和TLR4表达与腺样体肥大的相关性

目的检测小儿分泌性中耳炎患儿耳积液中分化簇44(CD44)和Toll样受体4(TLR4)表达水平,并分析二者与腺样体肥大的相关性。方法选取纳入80例小儿分泌性中耳炎患儿为观察组,选取同期接受健康体检的100例健康儿童为对照组。检测观察组患儿及对照组儿童耳积液中CD44和TLR4表达水平,并分析二者与腺样体肥大的相关性。采用Pearson法分析耳积液中CD44与TLR4表达水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CD44、TLR4对腺样体肥大的诊断价值。结果CD44、TLR4在观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平相较于对照组儿童外周血中的表达水平显著升高(P<0.05);CD44、TLR4在观察组患儿耳积液中的表达水平相较于观察组患儿外周血中的表达水平显著升高(P<0.05);CD44、TLR4在观察组浆液性耳积液中的表达水平相较于黏液性耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05);CD44、TLR4在观察组慢性中耳炎患儿耳积液中的表达水平相较于急性中耳炎耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05);CD44、TLR4在腺样体肥大中耳炎患儿耳积液中的表达水平相较于腺样体正常中耳炎耳积液中的表达水平显著升高(P<0.05);小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44和TLR4表达呈正相关(r=0.516,P=0.000)。CD44、TLR4二者联合诊断腺样体肥大的诊断价值显著高于二者单独诊断。结论CD44、TLR4均在小儿分泌性中耳炎耳积液中的表达水平上调,且相较于腺样体正常的患儿,腺样体肥大的患儿耳积液中CD44、TLR4表达水平显著升高,与腺样体肥大密切相关。

哮喘患儿Toll样受体4基因多态性及其与哮喘发病的关系

目的探讨支气管哮喘患儿外周血Toll样受体4(TLR4)基因多态性及其与哮喘发病的关系。方法172例哮喘患儿(观察组),根据哮喘急性发作严重程度分为轻度34例、中度35例、重度45例和危重58例,另选择136例健康体检儿童为对照组。抽取观察组病情发作期、对照组体检时外周静脉血,采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性法检测TLR4基因,采用二元Logistic回归分析不同TLR4基因位点基因型儿童哮喘发病的危险性。结果观察组患儿TLR4基因Thr399Ile位点CC、CT、TT基因型分别为31、73、68例,等位基因C、T分别为135、209例,对照组分别为42、60、34、144及128例;与对照组比较,观察组TLR4基因Thr399Ile位点T等位基因分布频率高(P<0.05)。与CC基因型比较,TLR4基因Thr399Ile位点TT型人群哮喘发病的危险性高[OR=2.353(95%CI1.575~4.663);P<0.05]。结论哮喘患儿TLR4基因Thr399Ile位点的基因型以TT为主,等位基因T分布频率高。TLR4基因Thr399Ile位点多态性可能与支气管哮喘的发病有关。