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Integrative analysis of the transcriptome and metabolome reveals the response mechanism to tomato spotted wilt virus 被引量:1
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作者 Junheng Lv Minghua Deng +9 位作者 Zuosen Li Haishan Zhu Ziran Wang Yanling Yue Zhengan Yang Junqiang Xu Shurui Jiang Wei Zhao Jing Li Kai Zhao 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CAS CSCD 2023年第5期958-970,共13页
Tomato spotted wilt virus(TSWV)is an important virus that has rapidly spread throughout the world.TSWV seriously hinders the production of tomato(Solanum lycopersicum)and other plants.In order to discover more new gen... Tomato spotted wilt virus(TSWV)is an important virus that has rapidly spread throughout the world.TSWV seriously hinders the production of tomato(Solanum lycopersicum)and other plants.In order to discover more new genes and metabolites related to TSWV resistance in tomato plants,the genes and metabolites related to the resistance of tomato plants inoculated with TSWV were identified and studied herein.The tomato TSWV-resistance line YNAU335(335)and TSWV-susceptible lines NO5 and 96172I(961)were used as the transcriptome and metabolome research materials.Transcriptomic and metabolomic techniques were used to analyze the gene and metabolite response mechanisms to TSWV inoculation.A total of 3566,2951,and 2674 differentially expressed genes(DEGs)were identified in lines 335,NO5,and961,respectively.Meanwhile,208,228,and 273 differentially accumulated metabolites(DAMs)were identified in lines 335,NO5,and 961,respectively.In line 335,the number of DEGs was the highest,but the number of DAMs was lowest.Furthermore,903 DEGs and 94 DAMs were common to the response to TSWV in the three inbred lines.The 903 DEGs and 94 DAMs were mainly enriched in the plant hormone signal transduction and flavonoid synthesis pathways.In addition,many nucleotide-binding site-leucine-rich repeat genes and transcription factors were found that might be involved in the TSWV response.These results provide new insights into TSWV resistance mechanisms. 展开更多
关键词 tomato plant tomato spotted wilt virus(TSWV) Flavonoid synthesis Plant hormone signal transduction Transcriptome and metabolome
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Population structure and association mapping to detect QTL controlling tomato spotted wilt virus resistance in cultivated peanuts 被引量:1
2
作者 Jing Li Yueyi Tang +5 位作者 Alana L.Jacobson Phat M.Dang Xiao Li Ming Li Wang Austin Hagan Charles Y.Chen 《The Crop Journal》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期516-526,共11页
Tomato spotted wilt(TSW)is a serious virus disease of peanut in the United States.Breeding for TSWV resistance would be facilitated by the implementation of marker-assisted selection in breeding programs;however,genes... Tomato spotted wilt(TSW)is a serious virus disease of peanut in the United States.Breeding for TSWV resistance would be facilitated by the implementation of marker-assisted selection in breeding programs;however,genes associated with resistance have not been identified.Association mapping is a type of genetic mapping that can exploit relationships between markers and traits in many lineages.The objectives of this study were to examine genetic diversity and population structure in the U.S.peanut mini-core collection using simple sequence repeat(SSR)markers,and to conduct association mapping between SSR markers and TSWV resistance in cultivated peanuts.One hundred and thirty-three SSR markers were used for genotyping 104 accessions.Four subpopulations,generally corresponding to botanical varieties,were classified by population structure analysis.Association mapping analysis indicated that five markers:pP GPseq5D5,GM1135,GM1991,TC23C08,and TC24C06,were consistently associated with TSW resistance by the Q,PCA,Q+K,and PCA+K models.These markers together explained 36.4%of the phenotypic variance.Moreover,pP GPseq5D5 and GM1991 were associated with both visual symptoms of TSWV and ELISA values with a high R^2.The potential of these markers for use in a marker-assisted selection program to breed peanut for resistance to TSWV is discussed. 展开更多
关键词 simple SEQUENCE repeat(SSR) BREEDING for TSWV
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Obstructor,a Frankliniella occidentalis protein,promotes transmission of tomato spotted wilt orthotospovirus
3
作者 Xiaobin Zheng Yanran Wan +6 位作者 Min Tao Jiangjiang Yuan Kun Zhang Jing Wang Youjun Zhang Pei Liang Qingjun Wu 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2023年第3期741-757,共17页
Tomato spotted wilt orthotospovirus(TSWV)causes substantial economic losses to vegetables and other crops.TSWV is mainly transmitted by thrips in a persistent and proliferative manner,and its most efficient vector is ... Tomato spotted wilt orthotospovirus(TSWV)causes substantial economic losses to vegetables and other crops.TSWV is mainly transmitted by thrips in a persistent and proliferative manner,and its most efficient vector is the western flower thrips,Frankliniella occidentalis(Pergande).In moving from the thrips midgut to the salivary glands in preparation for transmission,the virions must overcome multiple barriers.Although several proteins that interact with TSWV in thrips have been characterized,we hypothesized that additional thrips proteins interact with TSWV and facilitate its transmission.In the current study,67 F occidentalis proteins that interact with GN(a structural glycoprotein)were identified using a split-ubiquitin membrane-based yeast 2-hybrid(MbY2H)system.Three proteins,apolipoprotein-D(ApoD),orai-2-like(Orai),and obstructor-E-like isoform X2(Obst),were selected for further study based on their high abundance and interaction strength;their interactions with Gn were confirmed by MbY2H,yeastβ-galactosidase and luciferase complementation assays.The relative expressions of ApoD and Orai were significantly down-regulated but that of Obst was significantly up-regulated in viruliferous thrips.When interfering with Obst in larval stage,the TSWV acquisition rate in 3 independent experiments was significantly decreased by 26%,40%,and 35%,respectively.In addition,when Obst was silenced in adults,the virus titer was significantly decreased,and the TSWV transmission rate decreased from 66.7%to 31.9%using the leaf disk method and from 86.67%to 43.33%using the living plant method.However,the TSWV acquisition and transmission rates were not affected by interference with the ApoD or Orai gene.The results indicate that Obst may play an important role in TSWV acquisition and transmission in Frankliniella occidentalis. 展开更多
关键词 Frankliniella occidentalis obstructor tomato spotted wilt orthotospovirus TRANSMISSION virus-vector interaction
原文传递
青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析
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作者 钟静 李婷婷 +5 位作者 韩天华 李学卫 尹跃艳 陈越 马文广 丁铭 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期244-255,共12页
番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒,对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年,在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩... 番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒,对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年,在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份,利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示,在所检样品中有9份样品检测出TSWV,检出率为64.28%,有3份样品检测出TMV,检出率为21.43%,2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测,结果显示,在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高,为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高,均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 烟草花叶病毒 青蒿 复合侵染
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宁夏地区不同品种番茄主要病毒病的分子鉴定及抗性评价
5
作者 郜雅欣 高艳明 +1 位作者 李建设 王涵 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期726-735,共10页
为明确宁夏地区番茄上的病毒种类并分析复合侵染状况以及评价不同品种番茄的抗病性,于宁夏贺兰园艺产业园采集139份番茄疑似病毒样品(共22个品种),利用主要的8种番茄病毒特异性引物对病样进行RT-PCR分子检测与鉴定。结果显示:在疑似病样... 为明确宁夏地区番茄上的病毒种类并分析复合侵染状况以及评价不同品种番茄的抗病性,于宁夏贺兰园艺产业园采集139份番茄疑似病毒样品(共22个品种),利用主要的8种番茄病毒特异性引物对病样进行RT-PCR分子检测与鉴定。结果显示:在疑似病样中,病毒检出率为98.56%,其中,ToMMV首次在银川市检出,检出率显著高于其他病毒,达92.05%,为当地优势毒源;其次为TSWV和STV检出率分别为76.04%和73.35%;TYLCV、ToCV、ToMV、CMV和TMV检出率较低。通过对番茄病毒的复合侵染现象分析发现,复合侵染的样本占阳性样本数的94.89%,其中3种病毒的复合侵染率占复合侵染总比的53.08%,且3种和4种复合侵染类型繁多。此外,对22个品种感病情况分析,‘冠蔬106’感染的病毒种类最多,为6种,而‘黑小哥’未检测出以上8种番茄病毒。进而对番茄病毒病抗性品种进行初步评估,‘黑小哥’‘千禧’‘香妃9号’‘152’‘冠疏103’‘193’和‘赛硒柿2号’这7个品种为抗病毒品种。综上,面对外来病毒的侵入,复合侵染的暴发,应当引起高度重视和警惕。 展开更多
关键词 番茄病毒病 南方番茄病毒 番茄斑萎病毒 番茄斑驳花叶病毒 复合侵染
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贵州辣椒番茄斑萎病毒的分子鉴定
6
作者 田雨 李淳 +1 位作者 李岩 王莉爽 《中国蔬菜》 北大核心 2024年第2期51-57,共7页
用RT-PCR法对采自贵州6个地区的疑似辣椒病毒病样品进行了番茄斑萎病毒(TSWV)的鉴定,并用分子克隆方法扩增不同地区的感染TSWV的N基因序列。结果表明:贵州贵阳、安顺、瓮安、福泉、长顺和惠水的辣椒上均存在TSWV,经序列比对,贵州辣椒TSW... 用RT-PCR法对采自贵州6个地区的疑似辣椒病毒病样品进行了番茄斑萎病毒(TSWV)的鉴定,并用分子克隆方法扩增不同地区的感染TSWV的N基因序列。结果表明:贵州贵阳、安顺、瓮安、福泉、长顺和惠水的辣椒上均存在TSWV,经序列比对,贵州辣椒TSWV分离物核苷酸一致性为95.6%~99.7%,氨基酸一致性为97.1%~100.0%;通过系统进化树分析,福泉、惠水和长顺辣椒TSWV分离物与云南、山东的番茄TSWV分离物亲缘关系较近,安顺、贵阳和瓮安辣椒TSWV分离物与云南的番茄、辣椒、烟草、芹菜和鬼针草TSWV分离物,以及江苏的莴苣TSWV分离物亲缘关系较近。表明贵州辣椒TSWV分离物有2种株系,与国内不同地区不同寄主的TSWV分离物具有一定的相关性。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 N基因 病毒鉴定 序列分析
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北京地区侵染茄子的番茄斑萎病毒分子鉴定与分析
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作者 田文 邱艳红 +5 位作者 秦文韬 张海军 王德欣 李龙飞 贾志杨 徐秀兰 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期246-251,共6页
调查发现北京地区一温室栽培茄子Solanum melongena L.出现严重病毒病。利用基于小RNA的高通量测序技术和RT-PCR方法,明确了引起茄子病害的病毒种类为番茄斑萎病毒,将其命名为TSWV-eggplant分离物。进一步克隆了该病毒的基因组全长(S RN... 调查发现北京地区一温室栽培茄子Solanum melongena L.出现严重病毒病。利用基于小RNA的高通量测序技术和RT-PCR方法,明确了引起茄子病害的病毒种类为番茄斑萎病毒,将其命名为TSWV-eggplant分离物。进一步克隆了该病毒的基因组全长(S RNA、M RNA、L RNA),并构建其系统发育树。结果表明,该分离物的S RNA与美国分离物亲缘关系较近,M RNA与中国分离物亲缘关系较近,而L RNA与韩国分离物亲缘关系较近。因此,本研究发现的TSWV分离物与国内已发生报道的分离物不同,该分离物是否存在不同分离物之间基因组的重组需要进一步研究。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 茄子 高通量测序
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甘肃省辣椒斑萎病毒的检测 被引量:2
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作者 陈灵芝 王兰兰 +2 位作者 张茹 张玉鑫 高彦萍 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第3期73-77,共5页
在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样,采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明:通过RT-PCR法共检测出了6种病毒:辣椒环斑病毒(ChiRSV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、辣椒斑驳病毒... 在甘肃省兰州、白银、庆阳采集发病症状表现为植株矮化、叶片黄化、生长点坏死的辣椒病样,采用RT-PCR法和简易试纸条进行病毒检测。结果表明:通过RT-PCR法共检测出了6种病毒:辣椒环斑病毒(ChiRSV)、辣椒轻斑驳病毒(PMMoV)、辣椒斑驳病毒(PepMoV)、辣椒叶脉黄化病毒(PeVYV)、烟草轻绿花叶病毒(TMGMV)、番茄斑萎病毒(TSWV);且在同一个病样上,存在多种病毒复合侵染的状况。利用简易试纸条进行检测,只检测出了TSWV,但检出率较高。表明,甘肃地区辣椒生产上侵染的病毒种类多,TSWV的发生越来越普遍和严重。 展开更多
关键词 辣椒 番茄斑萎病毒 RT-PCR检测 简易试纸条检测
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西藏昌都市卡若区蔬菜主要病毒检测及番茄斑萎病毒鉴定
9
作者 郑宽瑜 熊智琦 +7 位作者 魏治镭 吴阔 王茂森 苏晓霞 巴宗 次仁措姆 王田田 张仲凯 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期63-69,共7页
为明确西藏昌都市卡若区高原条件下的蔬菜主要病毒种类,对温室、大棚和露地栽培的主要蔬菜进行了病毒病调查,采集典型病毒病症状样品进行ELISA检测,明确病毒种类;并利用电子显微镜观察,RT-PCR扩增克隆与测序分析对主要病毒进行鉴定分析... 为明确西藏昌都市卡若区高原条件下的蔬菜主要病毒种类,对温室、大棚和露地栽培的主要蔬菜进行了病毒病调查,采集典型病毒病症状样品进行ELISA检测,明确病毒种类;并利用电子显微镜观察,RT-PCR扩增克隆与测序分析对主要病毒进行鉴定分析。ELISA检测结果表明,西藏昌都市卡若区温室及大棚栽培的番茄、辣椒和莴苣上的主要病毒有番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)及凤果花叶病毒(pepino mosaic virus,PepMV)。其中TSWV检出率最高,为45%。进一步对检出TSWV的蔬菜样品进行电子显微镜观察,发现其中含有典型的正番茄斑萎病毒属Orthotospovirus病毒粒体,应用TSWV-N基因特异性引物进行RT-PCR扩增克隆和序列分析,发现西藏昌都市卡若区蔬菜感染的TSWV与云南TSWV分离株亲缘关系最近。本研究结果明确了西藏昌都市卡若区蔬菜的主要病毒种类。综合抗体检测、病毒粒体形态观察与分类相关基因的克隆测序结果,明确了西藏昌都市卡若区蔬菜感染的主要病毒为TSWV。这也是TSWV在西藏的首次报道,为了解TSWV的发生分布及其防控提供了依据。 展开更多
关键词 高原 番茄 辣椒 莴苣 番茄斑萎病毒
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莴笋感染番茄斑萎病毒(TSWV)--病毒粒子分布与亚细胞病变特征 被引量:1
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作者 王田田 魏治镭 +6 位作者 熊智琦 吴阔 周凤 童金金 贾强强 朱若萌 张仲凯 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期53-61,共9页
莴笋是西藏昌都市露地栽培的主要蔬菜种类之一,近年来斑萎病发生普遍,发病率达到了80%以上,引起严重的经济损失,前期研究表明发病植株受到番茄斑萎病毒(TSWV)侵染。为明确该区域莴笋感染TSWV不同时期病毒粒体分布与亚细胞病变的特征,为... 莴笋是西藏昌都市露地栽培的主要蔬菜种类之一,近年来斑萎病发生普遍,发病率达到了80%以上,引起严重的经济损失,前期研究表明发病植株受到番茄斑萎病毒(TSWV)侵染。为明确该区域莴笋感染TSWV不同时期病毒粒体分布与亚细胞病变的特征,为病毒病的精准诊断与绿色防控提供依据,本研究采集了西藏昌都市卡若区莴笋不同发病时期的样品,应用TSWV-N基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增克隆与测序分析,根据N基因序列推导N蛋白氨基酸序列比对,明确采集样品受到TSWV侵染。采集不同发病时期的样品进行负染色和超薄切片制样透射电子显微镜观察,发现早期感病叶片(症状为轻微褪绿)中病毒粒体相对含量较少,TSWV粒体分布于细胞质中,叶绿体噬锇颗粒明显增加,线粒体嵴膜部分降解,少部分细胞的液泡内有较多TSWV粒体聚集于细胞质内的囊泡中;中期感病叶片(褪绿或黄化斑)中,病毒粒体相对含量较高,较多TSWV粒体聚集于细胞质内质网池中,叶绿体膜系统降解,噬锇颗粒增加,线粒体增多;后期感病叶片(坏死斑)中,病毒粒体相对含量高,叶绿体、线粒体等细胞器降解,有大量TSWV病毒粒体聚集于残存的细胞质内囊泡中。TSWV粒体相对含量和亚细胞病变程度与植株症状严重度呈正相关,发病早期和后期TSWV粒体在细胞质内囊泡中的聚集为首次发现。上述结果为莴笋感染TSWV的早期诊断和确诊提供了新的依据,可为高原地区TSWV引起的莴笋病毒病的早期预防提供指导。 展开更多
关键词 莴笋 番茄斑萎病毒 病毒粒体分布 亚细胞病变
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烟草番茄斑萎病防治药剂筛选
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作者 曹旎 苏家恩 +7 位作者 周彦夷 张亚斌 李建军 田露 姜艳坤 钟杰 陈锦 杨志娟 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2023年第4期47-52,共6页
烟草番茄斑萎病毒病(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是烟草生产上的主要病毒病,为筛选出有效药剂防控烟草番茄斑萎病毒病,选用1%香菇多糖、20%吗呱·乙酸铜、5%氨基寡糖素、6%寡糖·链蛋白、20%丁子香酚和8%宁南霉素6种病毒... 烟草番茄斑萎病毒病(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是烟草生产上的主要病毒病,为筛选出有效药剂防控烟草番茄斑萎病毒病,选用1%香菇多糖、20%吗呱·乙酸铜、5%氨基寡糖素、6%寡糖·链蛋白、20%丁子香酚和8%宁南霉素6种病毒病抑制剂,对烟草番茄斑萎病进行了防治试验。结果表明:1%香菇多糖和20%吗呱·乙酸铜对烟草番茄斑萎病的防治效果最佳,分别为37.83%–66.70%和31.06%–52.35%;其次是5%氨基寡糖素和6%寡糖·链蛋白,防治效果分别为25.89%–43.40%和25.27%–46.32%;20%丁子香酚和8%宁南霉素防效较差,分别为20.94%–37.45%和21.75%-35.30%。 展开更多
关键词 烟草 番茄斑萎病毒病 香菇多糖 防治效果
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云南省马铃薯番茄斑萎病毒N蛋白自身互作功能域鉴定
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作者 苗淑月 叶倩 +7 位作者 张宇 赵星月 王鑫 卢冰心 史晓斌 张志代 郑立敏 陈建斌 《作物研究》 2023年第4期415-421,共7页
为了探究番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N在马铃薯上的致病性,采用酵母双杂交和双分子荧光互补技术研究了病毒N蛋白的自身互作及其关键功能域。通过RT-PCR扩增了N基因全长及其截断突变体,并构建了酵母表达载体对其自身互作的功能区域进行鉴定... 为了探究番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N在马铃薯上的致病性,采用酵母双杂交和双分子荧光互补技术研究了病毒N蛋白的自身互作及其关键功能域。通过RT-PCR扩增了N基因全长及其截断突变体,并构建了酵母表达载体对其自身互作的功能区域进行鉴定。结果显示,在酵母细胞中N蛋白自身互作的关键功能域位于186位至193位氨基酸之间,且N蛋白在植物体内的互作主要发生在细胞核和细胞质中。研究结果可为番茄斑萎病毒的防控提供理论依据。 展开更多
关键词 马铃薯 番茄斑萎病毒 N蛋白 互作 功能域鉴定
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辣椒番茄斑萎病毒(TSWV)分子鉴定及环介导等温扩增(LAMP)检测技术 被引量:2
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作者 韦建明 黄鑫 +3 位作者 耿坤 李文彪 冯文卓 李云洲 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第8期69-78,共10页
为明确侵染贵州辣椒的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)株系,并建立TSWV环介导等温扩增(LAMP)等快速检测技术,从贵州省辣椒主产区采集疑似感染TSWV的辣椒样本12份和西花蓟马样本10份,并应用RT-PCR、LAMP检测技术,以及基于T... 为明确侵染贵州辣椒的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)株系,并建立TSWV环介导等温扩增(LAMP)等快速检测技术,从贵州省辣椒主产区采集疑似感染TSWV的辣椒样本12份和西花蓟马样本10份,并应用RT-PCR、LAMP检测技术,以及基于TSWV-N基因系统发育树构建进行研究。通过分子诊断和测序结果分析,确认疑似感染辣椒样本被TSWV侵染。此外,贵州息烽地区辣椒TSWV病毒病原分离物与贵州番茄TSWV-N分离物相似度最高,为99%。基于这些发现,成功建立了针对辣椒作物和传播媒介西花蓟马的TSWV快速检测系统,为贵州辣椒病毒病害的监测和防控提供有力支持。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 西花蓟马 LAMP检测 分子诊断
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番茄环纹斑点病毒N和NSm基因的VIGS载体构建
14
作者 崔玥 赵立华 +4 位作者 陈思 文俊元 邱润霜 张仲凯 赵明富 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期98-104,共7页
【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZS... 【目的】番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)由传毒介体蓟马以持久增殖型方式传播,且能与其他病毒复合侵染作物,对中国西南地区重要蔬菜的产量和观赏作物的品质造成严重影响,给当地农业生产带来了严重危害。TZSV的N和NSm基因与病毒分类、运动和系统侵染密切相关。本研究通过构建N和NSm基因沉默载体,以期为进一步研究TZSV N和NSm基因在病毒侵染方面的功能提供材料,为抗病育种以及田间绿色防控提供一些依据。【方法】根据TZSV N和NSm基因序列设计特异性引物,利用RT-RCR技术扩增得到TZSV N和NSm基因片段,将扩增得到的目的基因连接到pEASY-Blunt-Zero载体上,含有N和NSm基因序列的pEASY-Blunt-Zero载体和pTRV-pTV00载体用Bam HI和Hind III限制性内切酶进行双酶切,并将酶切产物进行纯化回收,纯化后产物与pTRV-pTV00载体使用T4 DNA连接酶连接,获得pTRV-PTV00-N和pTRV-PTV00-NSm重组载体,将其转入根癌农杆菌GV3101中,并注射到本氏烟和栽培烟K326中,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测病毒N和NSm基因的沉默效率,间接酶联免疫吸附试验(ID-ELISA)检测N和NSm蛋白的含量。【结果】RT-qPCR分析表明,本生烟和栽培烟K326中N和NSm基因在接种TZSV后5 d沉默效率均大于90%。ID-ELISA结果显示,2个蛋白含量在不同时间内均显著下降,其中NSm蛋白含量连续9 d显著下降。【结论】TZSV N和NSm基因沉默载体构建成功,并成功试验于本氏烟和栽培烟K326。通过构建TZSV N和NSm基因沉默载体,为研究TZSV致病机理提供了材料,为田间抗TZSV育种和防控提供了理论依据。 展开更多
关键词 番茄环纹斑点病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒
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番茄NAC转录因子SlNAP2的克隆、表达及功能分析 被引量:3
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作者 陈娜 邵勤 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期251-261,共11页
为了探究NAC转录因子在番茄生物胁迫响应中的功能,本试验通过逆转录PCR(RT-PCR)技术从番茄中克隆得到一个NAC转录因子基因SlNAP2,其cDNA全长(ORT)1227 bp,包含142 bp的5′非编码区和257 bp的3′非编码区以及一个长度为828 bp编码275个... 为了探究NAC转录因子在番茄生物胁迫响应中的功能,本试验通过逆转录PCR(RT-PCR)技术从番茄中克隆得到一个NAC转录因子基因SlNAP2,其cDNA全长(ORT)1227 bp,包含142 bp的5′非编码区和257 bp的3′非编码区以及一个长度为828 bp编码275个氨基酸的开放阅读框(ORF),含1个NAM结构域。同源序列比对及系统进化树分析结果表明,SlNAP2与潘那利番茄SpNAP2亲缘关系最近,并与其他茄科NAC聚为一组,而与菊科、葫芦科、葡萄科、大戟科、杨柳科NAC的亲缘关系较远,在系统发育树上处于不同的分支。生物信息学分析结果显示,SlNAP2相对分子质量为31877.23 Da,理论等电点pI为8.56,该基因编码的蛋白不存在跨膜结构。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,SlNAP2基因表达具有组织特异性,在番茄茎中的表达量最高,并参与了番茄对青枯菌胁迫及水杨酸和茉莉酸刺激的响应。利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术发现,沉默SlNAP2后降低了植株对青枯病的抗性,表明SlNAP2在番茄抗青枯病过程中起正调控作用。本研究为深入探讨SlNAP2基因在番茄抗青枯病响应过程中的作用提供了参考依据。 展开更多
关键词 番茄青枯病 NAC转录因子 基因克隆 表达分析 病毒诱导的基因沉默(VIGS)
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番茄环纹斑点病毒核衣壳蛋白N的RT-LAMP检测方法的建立
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作者 罗海燕 李恒 +3 位作者 陆承聪 魏辉 郑雪 陈勇 《山东农业科学》 北大核心 2023年第11期176-180,共5页
番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)属正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus),严重影响番茄、辣椒等作物的产量及经济价值。本研究根据TZSV的核衣壳蛋白N的基因序列设计逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-med... 番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)属正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus),严重影响番茄、辣椒等作物的产量及经济价值。本研究根据TZSV的核衣壳蛋白N的基因序列设计逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)反应引物,建立了TZSV的RT-LAMP检测方法。结果显示,该方法能够特异扩增TZSV,与侵染辣椒的番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒不发生反应;RNA最低检测限为0.01 pg/μL,灵敏度为普通逆转录PCR(RT-PCR)的10倍;田间样品检测应用结果表明,RT-LAMP扩增和可视化检测结果与RT-PCR一致。综上,本研究建立的RT-LAMP快速检测方法可有效应用于TZSV的田间检测。 展开更多
关键词 番茄环纹斑点病毒 核衣壳蛋白N 逆转录环介导等温扩增技术 检测
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番茄WRKY转录因子SlWRKY75的克隆、表达及功能分析
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作者 陈娜 詹文文 +4 位作者 刘兴雨 石磊鑫 李若楠 谢镕 却志群 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1-10,共10页
WRKY转录因子是植物中特有的转录因子家族之一,研究证实WRKY转录因子在植物的生长发育及对生物与非生物胁迫响应中具有重要的调控作用。为揭示番茄WRKY基因的功能,基于前期转录组数据,以番茄高抗青枯病Hm 2-2(R)与高感青枯病BY 1-2(S)2... WRKY转录因子是植物中特有的转录因子家族之一,研究证实WRKY转录因子在植物的生长发育及对生物与非生物胁迫响应中具有重要的调控作用。为揭示番茄WRKY基因的功能,基于前期转录组数据,以番茄高抗青枯病Hm 2-2(R)与高感青枯病BY 1-2(S)2个自交系株系为试验材料,克隆得到1个番茄WRKY转录因子SlWRKY75基因(Solyc05g015850.3)。通过生物信息学分析、氨基酸序列多重比对、系统发育树构建、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和病毒诱导的基因沉默(VIGS)等技术方法对其基因及编码蛋白的结构、表达模式与功能进行分析。结果表明,该基因的cDNA全长为653 bp,其最大开放阅读框为519 bp,编码172个氨基酸,其蛋白相对分子量为19.87851 ku,理论等电点为9.32,属于亲水性非分泌蛋白,且不存在跨膜结构,同时,该蛋白具有1个高度保守的WRKY结构域和一个CX_(4)CX_(23)HXH锌指基序,且同属于第Ⅱ类家族。系统发育树分析表明,SlWRKY75与潘那利番茄SpWRKY75亲缘关系最近,并与其他茄科聚为1组,而与橡胶树HbWRKY75、陆地棉GhWRKY75等的亲缘关系较远,在系统发育树上处于不同的分支。qRT-PCR结果表明,SlWRKY75基因的表达具有组织特异性,并可被青枯菌、水杨酸和茉莉酸所诱导。利用VIGS技术得出,沉默SlWRKY75降低了植株对青枯病的抗性,表明SlWRKY75正调控番茄对青枯病的抗性。通过以上研究结果得出,SlWRKY75基因在番茄调控青枯病抗性响应过程中扮演着重要的角色。 展开更多
关键词 番茄青枯病 WRKY转录因子 基因克隆 表达分析 病毒诱导的基因沉默(VIGS)
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养分运筹对烤烟农艺性状·番茄斑萎病的影响
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作者 罗优 贺彪 +6 位作者 韩天华 杨文奎 和翌辉 张文先 官峰 张雯清 李佛琳 《安徽农业科学》 CAS 2023年第24期153-156,共4页
为明确丽江市金沙江流域烟区烟蒜轮作后养分运筹对烟草农艺性状及番茄斑萎病毒病(TSWV)、蓟马发生流行的影响。烟蒜轮作后随机设置养分运筹小区试验,测定烟草生长期的农艺性状,并调查番茄斑萎病、蓟马发生情况。结果表明,烟蒜轮作后常... 为明确丽江市金沙江流域烟区烟蒜轮作后养分运筹对烟草农艺性状及番茄斑萎病毒病(TSWV)、蓟马发生流行的影响。烟蒜轮作后随机设置养分运筹小区试验,测定烟草生长期的农艺性状,并调查番茄斑萎病、蓟马发生情况。结果表明,烟蒜轮作后常规施肥(T_(1))比不施氮磷钾肥(CK)的烟草团棵期株高、茎围、节距、最大叶宽依次提高了61.97%、32.22%、38.31%、42.21%;旺长期T_(1)比CK处理的茎围、节距、叶数、最大叶宽、最大叶面积依次提高了14.14%、19.75%、17.05%、14.87%、17.17%;成熟期T_(1)比CK处理的株高、最大叶宽、叶面积依次提高了9.74%、11.34%、12.03%;T_(1)和CK处理在烟草团棵期的病情指数分别为0和8,旺长期为5和14;成熟期为15和38,T_(1)处理病情指数显著低于CK处理。番茄斑萎病发病率、病情指数、百株累计蓟马虫数均随调查时间推移呈上升趋势。烟蒜轮作后合理施肥可提高烟叶农艺性状、降低番茄斑萎病病情指数和危害程度,可为改良植烟土壤、减轻连作障碍提供参考依据。 展开更多
关键词 烤烟 养分运筹 轮作 农艺性状 番茄斑萎病
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番茄斑萎病毒对云南莴苣类蔬菜的侵染危害 被引量:25
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作者 郑宽瑜 吴阔 +2 位作者 董家红 方琦 张仲凯 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期174-178,共5页
莴苣类蔬菜是常见的食用蔬菜。近年在云南发现生菜、莴笋、油麦菜有症状表现为叶片黄化、褪绿、坏死斑的病害流行危害,为确定其病原,通过电子显微镜观察、回接试验、ELISA 检测、病毒基因分析,在典型症状病样组织粗汁液和超薄切片中... 莴苣类蔬菜是常见的食用蔬菜。近年在云南发现生菜、莴笋、油麦菜有症状表现为叶片黄化、褪绿、坏死斑的病害流行危害,为确定其病原,通过电子显微镜观察、回接试验、ELISA 检测、病毒基因分析,在典型症状病样组织粗汁液和超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属病毒的粒体,该病毒粒体为球形,直径80-100 nm;ELISA 检测和病毒基因分析显示,侵染莴苣类蔬菜的病毒为番茄斑萎病毒。 展开更多
关键词 莴苣 番茄斑萎病毒 N 基因
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北京地区发现番茄斑萎病毒 被引量:38
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作者 李飞 吴青君 +3 位作者 徐宝云 谢文 王少丽 张友军 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期186-188,191,共4页
通过采用特异快速试纸条以及进一步的RT-PCR和序列测定证实,在北京局部地区的辣椒和茄子上已发生番茄斑萎病毒,这两种作物上同时发生的蓟马种类主要为西花蓟马,并且携带该病毒。番茄斑萎病毒病是极其危险的一种病害,可对作物造成毁灭性... 通过采用特异快速试纸条以及进一步的RT-PCR和序列测定证实,在北京局部地区的辣椒和茄子上已发生番茄斑萎病毒,这两种作物上同时发生的蓟马种类主要为西花蓟马,并且携带该病毒。番茄斑萎病毒病是极其危险的一种病害,可对作物造成毁灭性灾害。建议有关部门立即采取相应的预防与管理措施,防止其扩散蔓延。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 西花蓟马 北京
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