警惕新发病毒番茄褐色皱果病毒Tomato brown rugose fruit virus对我国番茄产业的危害

番茄褐色皱果病毒Tomato brown rugose fruit virus(ToBRFV)于2014年首次在以色列发现,随后传播到欧洲、美洲以及亚洲等地。ToBRFV在番茄叶片上引起花叶,更重要的是在番茄果实上引起褐色皱缩斑,导致番茄完全失去商品价值,是番茄安全生产的重大威胁。为遏制ToBRFV的传播,多个国家已经将该病毒列入检疫对象。2019年,我们在山东番茄上检测到该病毒。本文综述了ToBRFV发生与危害、寄主范围和症状、传播方式、基因组结构、检测方法,并提出了防治建议,希望有助于防范该病毒在我国的扩散。

Biological and molecular characterization of tomato brown rugose fruit virus and development of quadruplex RT-PCR detection

Tomato brown rugose fruit virus(ToBRFV) is a novel tobamovirus firstly reported in 2015 and poses a severe threat to the tomato industry. So far, it has spread to 10 countries in America, Asia, and Europe. In 2019, ToBRFV was identified in Shandong Province(ToBRFV-SD), China. In this study, it was shown that ToBRFV-SD induced mild to severe mosaic and blistering on leaves, necrosis on sepals and pedicles, and deformation, yellow spots, and brown rugose necrotic lesions on fruits. ToBRFV-SD induced distinct symptoms on plants of tomato, Capsicum annumm, and Nicotiana benthamiana, and caused latent infection on plants of Solanum tuberosum, Solanum melongena, and N. tabacum cv. Zhongyan 102. All the 50 tomato cultivars tested were highly sensitive to ToBRFV-SD. The complete genomic sequence of ToBRFV-SD shared the highest nucleotide and amino acid identities with isolate IL from Israel. In the phylogenetic tree constructed with the complete genomic sequence, all the ToBRFV isolates were clustered together and formed a sister branch with tobacco mosaic virus(TMV). Furthermore, a quadruplex RT-PCR system was developed that could differentiate ToBRFV from other economically important viruses affecting tomatoes, such as TMV, tomato mosaic virus, and tomato spotted wilt virus. The findings of this study enhance our understanding of the biological and molecular characteristics of ToBRFV and provide an efficient and effective detection method for multiple infections, which is helpful in the management of ToBRFV.

番茄褐色皱纹果病毒分子检测与基因组部分序列分析

为了确定张家口及银川番茄产区是否发生番茄褐色皱纹果病毒病(ToBRFV),探究番茄ToBRFV的遗传信息和演化,为番茄褐色皱纹果病毒的诊断和防治及番茄抗病毒病基因工程提供重要的科学依据,采用张家口和银川两地区疑似病果进行分子检测,并利用相关分子生物学软件对该病毒基因进行序列分析及全基因组的系统进化分析。结果表明,张家口及银川果实病毒分离物与GenBank中大部分ToBRFV分离物的基因组结构相似性在99%以上,确定两地区番茄果实病毒为番茄褐色皱纹果病毒。ToBRFV分离物的地域性很强,中国不同地区的ToBRFV病毒,与来自欧洲和亚洲的多个国家地区都有关联,张家口分离物与中国分离物(MT018320.1)亲缘关系最近,银川分离物与秘鲁分离物聚类到一起,说明银川分离物可能来自南美洲。张家口分离物与中国分离物(MT018320.1)的4个ORF氨基酸相似性最高,而银川分离物与张家口分离物相似性较低。另外,研究结果首次发现,银川分离物CP蛋白的第444位碱基由A突变成G,从而导致CP蛋白的氨基酸第131位由V(缬氨酸)突变为A(丙氨酸),CP蛋白发生了有义突变。综上所述,张家口及银川番茄产区发生了番茄褐色皱纹果病毒病,且两地区的病毒来自不同的地方。

番茄褐色皱纹果病毒分子检测与鉴定

利用3对番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)特异性引物对云南红河、宁夏银川、北京顺义疑似病毒病样本进行RT-PCR检测,分别扩增出大小为812、842、1053 bp的特异性条带。对扩增产物进行测序及系统进化分析,发现云南、宁夏、北京的ToBRFV分离物与约旦、意大利、荷兰的ToBRFV分离物聚在同一分支上,亲缘关系较近。致病性结果显示,接种后的番茄植株表现出与田间相同的症状,且在发病组织中检测到病毒ToBRFV。表明来自云南红河、宁夏银川、北京顺义的番茄植株均被ToBRFV侵染。

番茄褐色皱纹果病毒(ToBRFV)研究进展

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)为帚状病毒科(Virgaviridae)烟草花叶病毒属(Tobamovirus)RNA病毒,可侵染包括番茄在内的多个科属植物,严重威胁安全生产。ToBRFV于2014年首次在以色列发现,随后蔓延至多个国家和地区。2021年4月中国将该病毒列为检疫性病毒。本文中对该病毒的基因组结构、寄主范围、发病症状、传播方式、检测方法、寄主抗性以及防御措施等的研究进展进行了归纳总结,以期为防控和抗ToBRFV育种提供参考和借鉴。

番茄褐色皱果病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)Taq Man荧光定量RT-PCR方法,本研究针对ToBRFV RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)基因序列设计了4组特异性引物和Taq Man探针,构建了标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度和实际样品的检测效率进行评估。结果显示,该方法特异性强,与番茄花叶病毒、番茄斑驳花叶病毒、烟草花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、番茄环斑病毒、番茄黑环病毒、辣椒轻斑驳病毒、烟草环斑病毒和凤果花叶病毒等9种病毒均无交叉反应。建立的标准曲线的R^(2)为0.999,扩增效率为102.096%,检测灵敏度为10 fg/μL,与EPPO PM 7/146(1)推荐的CaTa28、CSP1325方法相当,是常规RT-PCR的100倍;采用该方法成功从60份番茄和辣椒叶片、种子样品中检出10份阳性样品。建立的Taq Man荧光定量RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,适用于实际样品中ToBRFV的快速精准检测。

云南红河州番茄褐色皱纹果病毒检测

【目的】建立云南红河州番茄褐色果病的检测技术,为控制其传播和治疗提供支撑。【方法】采用电子显微镜负染色观察、ELISA检测以及外壳蛋白基因序列RT-PCR检测及序列分析,明确云南红河州番茄褐色皱果病的病原。【结果】电子显微镜观察到病毒粒子为长300 nm、直径18 nm的杆状病毒,ELISA检测发现与烟草花叶病毒属的烟草花叶病毒(TMV)和番茄花叶病毒(ToMV)有血清学反应;RT-PCR扩增获得的目的片段与番茄褐色皱纹果病毒的病毒基因相似性达99.81%。【结论】引起云南红河番茄褐色皱纹果病的病原是烟草花叶病毒属的番茄褐色皱果病毒。

番茄褐色皱纹果病毒的发生分布及防控对策

番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是烟草花叶病毒属(Tobamovirus)的新成员,主要危害番茄、辣椒等茄科作物。2014年在以色列番茄上首次发现该病毒,随后快速扩展至欧洲、美洲的茄科作物主产区。2019年我国山东发现ToBRFV侵染番茄,要警惕该病毒在我国暴发危害。本文综述了国内外ToBRFV的分布、为害症状、传播途径、鉴定方法以及致病性等方面的研究进展,并结合烟草花叶病毒属病毒的侵染循环特征,提出防控对策;此外,对未来的研究重点、防控技术研发等进行了展望。

北京、山东、陕西部分地区番茄褐色皱纹果病毒的检测及同源性分析

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)于2015年在约旦被首次报道,随即迅速在全世界蔓延。本试验对北京南口、山东寿光及陕西白水出现的疑似ToBRFV典型症状的感病植株的保守结构域进行RT-PCR扩增检测,结果表明ToBRFV已经在北京、山东和陕西发生。对ToBRFV保守基因RdRP测序发现,北京、山东、陕西感病材料的ToBRFV RdRP基因遗传距离较近,与其他国家的ToBRFV RdRP基因遗传距离较远。

警惕番茄褐色皱纹果病毒在我国的传播和危害

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是烟草花叶病毒属的一个新种,在自然界中主要危害番茄、辣椒等茄科作物。自2014年首次在以色列发现以来,ToBRFV迅速蔓延至全球4个洲的35个国家,严重影响番茄和辣椒的产量和品质。本文综述了ToBRFV的发现与分布、基因组结构、传播方式、寄主范围和检测方法,并提出了相应的防控建议,以防范ToBRFV在我国的进一步传播和危害。

番茄褐色皱纹果病毒对中国番茄产业的潜在威胁及预防措施

番茄褐色皱纹果病毒(ToBRFV)2014年在以色列第一次被发现,2019年传入中国山东。该病毒具有危害性大,传播性强的特点,对番茄种植业的威胁极大。为避免番茄褐色皱纹果病毒在中国大暴发,需要做好防控措施,将潜在风险降到最低。针对番茄褐色皱纹果病毒的相关问题进行探究,分析对中国番茄产业的潜在为害,给出了相应的防控措施与建议。

世界各国应对番茄褐色皱果病毒跨境传播采取的植物检疫措施分析及启示

【目的】为了防范番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)跨境传入我国,本文对世界各国应对ToBRFV跨境传播采取的植物检疫措施进行分析,以期为我国应对ToBRFV提供参考。【方法】通过查阅各国政府和国际组织官网、文献等资料,收集世界各国应对ToBRFV的相关信息,对其开展的早期预警、出台的植物检疫政策和防控措施等进行梳理和分析。【结果】为防范ToBRFV的快速蔓延风险,各国和组织通过将其列入警示名单、向WTO提交相关通报、发表相关文章等手段开展早期预警。为防止ToBRFV的传入和扩散,各国和组织快速出台将其列为官方管制对象、制修订相关进境检疫法律法规等植物检疫政策;从产地、出口前、进口后等方面制定了严格的防控措施。【结论】早识别、早应对是国际上应对ToBRFV跨境传播的关键举措,各国的检疫措施整体严格。建议我国继续关注ToBRFV发生动态、适时调整检疫措施、提高口岸检疫能力、开展调查监测。

RT-RAA-CRISPR/Cas12a可视化检测番茄褐色皱纹果病毒

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)严重威胁番茄等茄科园艺作物的生产安全。本研究根据其外壳蛋白(coat protein,CP)基因及其同属病毒的差异序列,设计了特异性重组酶介导等温核酸扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)引物,并基于CRISPR/Cas12a的设计原则,设计了靶向RT-RAA扩增产物的CRISPR RNA(crRNA)。通过优化获得了检测信号最强的反应体系,其中报告基因FQ终浓度为600nmol/L、Cas12a和crRNA终浓度分别为200nmol/L和1000nmol/L,最终总反应时间仅为30 min。该方法可特异性检测ToBRFV,对携带ToBRFV的番茄样品RNA检测灵敏度为RT-PCR和RT-qPCR的10000和100倍,检测限为3.46fg/μL。阳性样品验证结果显示,本研究建立的RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测技术可以在不同来源的辣椒、番茄侵染的植物叶片、果实及种子中检测到ToBRFV,表明该技术可用于番茄褐色皱纹果病毒的快速、灵敏的可视化检测。

警惕番茄褐色皱果病毒传入我国

番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)属烟草花叶病毒属,是近年来新发现的一种为害番茄、辣椒等作物的病原物。鉴于其为害的严重性和随番茄、辣椒等植物种子贸易传播的高风险性,已有国家和组织发出警示通报或采取具有针对性的紧急植物检疫措施。在收集相关资料的基础上,概述了该病毒的发生分布、生物学特性、分子特征、检测技术及国际检疫监管状况等,浅析其传入我国的风险,提出了预警建议。

番茄褐色皱果病毒胶体金免疫试纸条的研制

番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是一种新发病毒,严重威胁番茄的安全生产。为了快速、简便地检测该病毒,我们制备了ToBRFV胶体金免疫试纸条。本研究以ToBRFV粒子为免疫原,通过杂交瘤技术制备了17个抗ToBRFV的单克隆抗体。将不同单抗两两组合分别作为胶体金标记抗体和硝酸纤维素膜检测线上的捕获抗体,共获得272个配对组合的胶体金试纸条。通过特异性测定筛选到一组配对抗体制备的试纸条能够在5 min内特异识别ToBRFV,而与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、辣椒轻斑驳病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、番茄褪绿病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒等无交叉反应。灵敏度分析表明,该试纸条可从稀释12800倍的番茄叶片病汁液中检测到ToBRFV,也可检测到50 ng ToBRFV粒子。本研究制备的胶体金试纸条使用方便,灵敏度高,特异性强,适合田间大批量样品检测,可用于ToBRFV的精准监测及早期预警。

进境番茄种子中番茄褐色皱纹果病毒的检测鉴定

番茄褐色皱纹果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)是烟草花叶病毒属新成员,番茄和辣椒是其主要寄主,被中国、欧盟、美国、澳大利亚、土耳其、新西兰、智利、阿根廷、俄罗斯、哈萨克斯坦、泰国等国家或地区纳入需检疫的有害生物。我们利用电镜观察、RT-PCR和SYBR Green实时荧光RT-PCR首次从进境的番茄种子检出ToBRFV。电镜观察显示该样品所携带的病毒粒子形态符合烟草花叶病毒属病毒的粒子特征,RT-PCR扩增出特异的条带,实时荧光RT-PCR有明显的扩增曲线,PCR产物测序结果与ToBRFV(GenBank登录号MK133093.1和KT383474.1)同源性高达99.65%。

番茄褐色皱果病毒RT⁃PCR检测方法的建立与评价

本研究旨在建立番茄和辣椒种子携带番茄褐色皱果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)快速、精准的核酸检测技术。选用ToBRFV的MP蛋白基因和CP蛋白基因保守序列作为靶标区域设计了1对特异性引物ToBRFV⁃F⁃5506/ToBRFV⁃R⁃6186,建立了ToBRFV的RT⁃PCR检测方法。用ToBRFV阳性样品对该方法的灵敏度和特异性进行了系统分析,最后以疑似ToBRFV感染的实际种子样品进行验证,并与已报道的9对ToBRFV特异性引物对实际种子样品的检测效率进行比较分析。结果表明,采用本研究建立的RT⁃PCR检测方法检测限值至2.5ng/μL,且与番茄和辣椒的其他主要病毒无交叉反应,特异性良好,对50份疑似ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品的阳性检出率高达40%,要优于已报道的9对ToBRFV特异性引物。本研究建立的番茄褐色皱果病毒RT⁃PCR检测方法具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于ToBRFV感染的番茄和辣椒种子样品检测。

一种新发植物病毒--番茄褐色皱纹果病毒

番茄褐色皱纹果病毒是一种新发植物病毒,已知可侵染番茄、辣椒。该病毒发展迅速,潜在的危害性巨大。我国于2019年在山东禹城报道发生。本文对该病毒的生物学特征、发生与分布、危害特点、检测方法进行了介绍,并提出了防控措施建议。

番茄褐色皱果病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR Green I的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒种子进行了检测验证。结果表明,构建的实时荧光RT-PCR检测ToBRFV阳性的番茄种子总RNA和重组质粒标准品的检测低限分别为0.2 ng/μL和50.0拷贝/μL,均为普通RT-PCR检测灵敏度的100倍;对番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)、番茄环斑病毒(tomato ringspot virus,ToRSV)、番茄黑环病毒(tomato black ring virus,TBRV)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)等7种病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。对50份疑似感染了ToBRFV的番茄和辣椒种子样品检测结果表明,与常规RT-PCR和已报道的2种实时荧光RT-PCR方法相比,本研究建立的实时荧光RT-PCR方法具有准确率高、特异性强、灵敏度高的特点,适用于低丰度ToBRFV的种子检测。