通络益肾方对UUO大鼠肾间质纤维化及piezo1的影响

目的探讨通络益肾方对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化及压电式机械敏感离子通道组件1(piezo-type mechanosensitive ion channel component 1,piezo1)的影响。方法以UUO大鼠为模型,以通络益肾方为干预手段,以缬沙坦为阳性药,连续给药14天。观察大鼠血肌酐和尿素氮变化。采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察大鼠肾脏病理形态学变化。采用Ⅲ型胶原免疫组化评估大鼠肾间质纤维化程度。采用CD34免疫荧光观察大鼠肾脏肾小管周毛细血管(peritubular capillary,PTC)变化。采用免疫组化、免疫蛋白印记法和转录PCR观察大鼠肾脏piezo1及其下游分子mRNA以及蛋白表达改变。结果与假手术组相比,模型组血清肌酐和尿素氮水平升高(P<0.05),与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组血清肌酐(P<0.05)和尿素氮(P>0.05)较低。与假手术组相比,模型组镜下观察肾间质纤维化改变明显,PTC明显减少,piezo1表达增加,经通络益肾方和缬沙坦干预后UUO大鼠肾脏间质纤维化程度改善,PTC增多,piezo1表达减少。与假手术组相比,模型组piezo1蛋白表达显著增加(P<0.05),通络益肾方和缬沙坦干预均能降低piezo1蛋白表达(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠肾组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达增多(P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组PlGF表达增多(P<0.05);模型组PlGF的受体血管内皮生长因子受体1(FMS-like tyrosine kinase 1,flt1)表达较假手术组减少(P<0.05),缬沙坦组与通络益肾方组与模型组相比flt1表达水平的升高。结论通络益肾方能明显改善UUO大鼠肾间质纤维化进展,其机制可能是通过下调piezo1蛋白表达,上调ADM、PlGF及其受体flt1表达,减轻PTC损伤,起到拮抗肾间质纤维化的作用。

益肾通络方治疗肾虚络阻型少弱精子症不育疗效观察

目的探讨益肾通络方治疗肾虚络阻型少弱精子症不育患者的有效性与安全性。方法选取2022年1月—2022年12月于河南省中医院(河南中医药大学第二附属医院)生殖医学科门诊就诊的108例肾虚络阻型少弱精子症不育患者,随机分为试验组和对照组,每组54例。试验组给予益肾通络方,1剂/d,200 mL/次,分早、晚2次饭后1 h温服;对照组给予左卡尼汀口服溶液,10 mL/次,2次/d,餐时口服。两组疗程均为90 d,并于治疗开始前、30、60、90 d及治疗结束后3个月各随访1次。以精子浓度、精子总数、前向运动(progressive motility,PR)精子百分比、前向及非前向运动(progressive and non-progressive motility,PR+NP)(即总活力)精子百分比及配偶受孕率为主要疗效指标,以精液量、中医证候评分为次要疗效指标,比较两组临床疗效及患者治疗前后的症状改善情况,并观察记录患者的不良反应情况。结果治疗前后两组组内比较,精子浓度、精子总数、PR精子百分比、PR+NP精子百分比均显著改善(P<0.001);试验组精子浓度、精子总数、PR精子百分比、PR+NP精子百分比提升均优于对照组(P<0.001),而配偶受孕率两组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后两组组内比较,仅试验组精液量提升、中医证候评分总分降低具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,试验组精液量差异无统计学意义(P>0.05),而3次同时期访视在降低中医证候评分总分方面均明显优于对照组(P<0.01),尤其在改善腰膝酸软,小腹、腹股沟或会阴部刺痛,头晕,耳鸣,神疲乏力,舌色紫黯,舌有瘀点或瘀斑,脉沉迟或涩等症状方面差异具有统计学意义(P<0.05)。研究结束后,试验组、对照组总有效率分别为88.00%(44/50)、66.67%(34/51),两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者在研究期间均未出现明显不良反应。结论采用益肾通络方治疗肾虚络阻型少弱精子症不育,临床疗效确切,症状改善较明显,且具有良好的安全性,值得临床推广与应用。

益肾通络方联合小剂量他达拉非治疗肾虚血瘀证糖尿病性勃起功能障碍患者的疗效评价

目的:观察益肾通络方与小剂量他达拉非联合治疗糖尿病性勃起功能障碍的临床疗效。方法:选取糖尿病性勃起障碍患者80例,随机分为两组。对照组给予他达拉非治疗,观察组在对照组的基础上给予益肾通络方治疗。治疗周期为8周,分别于治疗前后观察两组患者勃起功能国际问卷-5(IIEF-5)评分、勃起质量量表(EQS)评分、勃起硬度(EHS)评分、中医证候积分、血清同型半胱氨酸(HCY)含量、血管内皮功能指标[血清前列腺素I2(PGI2)、内皮素(ET-1)含量、一氧化氮(NO)]、糖脂代谢指标[甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)]及氧化应激相关因子[总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)]的变化情况,并评定两组临床疗效。结果:观察组总有效率(79.4%)优于对照组(48.7%,P<0.01),治疗后两组患者IIEF-5评分、EQS评分、EHS评分及血清PGI2、NO、T-AOC、GSH-Px较治疗前升高(P<0.05);中医证候积分及血清TC、TG、HCY、ET-1较治疗前均呈现下降趋势(P<0.05),观察组的效果优于对照组(P<0.01)。结论:益肾通络方联合小剂量他达拉非治疗糖尿病性勃起功能障碍(肾虚血瘀证)有助于改善糖尿病性勃起功能障碍患者的阴茎勃起功能,改善糖脂代谢。

基于SREBPs通路的益肾通络方改善脂质代谢异常作用机制研究

目的基于固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)通路探究益肾通络方改善脂质代谢异常的作用机制。方法以C57BLKS/J(db/db)小鼠为模型动物、C57BLKS/J(db/m)小鼠为正常对照,通过测定小鼠肝脏系数及血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量,观察小鼠肝组织脂肪变性和脂质蓄积情况,测定小鼠肝组织中SREBP-1、SREBP-2蛋白和Srebp-1c、Srebp-2及其下游脂质代谢相关靶基因(Fasn、Acc1、Scd5、Fads1、Hmgcr、Dhcr24、Insig-1、Fdps)的mRNA转录水平,来考察1、2.5、5 g/kg益肾通络方改善db/db小鼠脂质代谢异常的作用机制。以低脂培养的人肝癌细胞HepG2为体外脂质代谢异常细胞模型,以25-HC(SREBPs抑制剂,10μmol/L)为抑制剂对照,考察125、250、500μg/mL益肾通络方干预24 h后对细胞中SREBP-1、SREBP-2蛋白和SREBP-1c、SREBP-2其下游脂质代谢相关靶基因mRNA转录水平的影响,进行体外机制验证。结果1、2.5、5 g/kg益肾通络方均可显著降低模型小鼠TC、TG、LDL水平,显著降低肝组织脂滴阳性面积百分比、肝脏系数,显著下调肝组织中Pre-SREBP-1、n-SREBP-1、Pre-SREBP-2、n-SREBP-2蛋白以及Srebp-1c、Srebp-2及其下游靶基因的mRNA转录水平,并可显著升高HDL水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。体外细胞实验中,125、250、500μg/mL益肾通络方作用24 h后细胞中上述蛋白及基因的表达的变化与动物实验一致,且抑制剂对照与250、500μg/mL益肾通络方给药后细胞中上述蛋白和基因表达水平相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论益肾通络方可能通过调控转录因子SREBPs表达,进而抑制脂肪酸及胆固醇合成相关基因的高表达,促进TC、TG的降解,改善脂质代谢异常,抑制脂质蓄积,从而发挥降脂作用。

通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制。方法以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平。结果与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P<0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P<0.01);通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01或P<0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P<0.05或P<0.01),尤以高剂量组效果最佳,呈剂量依赖性;西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P>0.05)。结论通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用。

益肾通络方对C-BSA肾病综合征大鼠模型的整体治疗作用

目的:观察益肾通络方对阳离子牛血清白蛋白(C-BSA)大鼠模型的整体治疗作用。方法:采用C-BSA复制肾病综合征大鼠模型,随机分为3组,即模型组,肾炎四味片组,益肾通络方组,每组各10只,并以10只同批正常大鼠为正常组。分别测定大鼠24h尿蛋白,血清白蛋白,血肌酐,血尿素氮;观察大鼠肾组织病理形态,测定面积比。结果:益肾通络方组24h尿蛋白含量、血清肌酐、血尿素氮下降(P<0.01);血清白蛋白提高(P<0.01);肾脏病理损害均有不同程度减轻,面积比减少(P<0.01);其作用优于模型组和肾炎四味片组(P<0.05,P<0.01)。结论:益肾通络方对肾病综合征大鼠有良好的治疗作用,能改善相关蛋白,改善肾功能,减轻肾脏病理损害。

益肾通络方对STZ诱导糖尿病模型大鼠血管内皮细胞因子水平的影响

目的观察益肾通络方对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型大鼠内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、血栓烷素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素1α(6-keto-PGF1α)水平的影响。方法用STZ诱导糖尿病模型大鼠,随机分为模型组、葛根素组以及益肾通络方大剂量组、益肾通络方小剂量组,并设正常对照组。各组干预6周后,检测各组对大鼠体质量、血糖以及血浆中ET、NO、TXB2、6-keto-PGF1α含量。结果与正常对照组比较,模型组大鼠体质量明显减轻,血糖升高,血浆中ET、TXB2含量明显升高,NO、6-Keto-PGF1α含量明显减低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,益肾通络大剂量组体质量增加,NO、6-Keto-PGF1α含量升高、ET、TXB2含量降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);益肾通络小剂量组ET含量降低、6-Keto-PGF1α含量升高(P<0.01);葛根素组空腹血糖降低,ET、TXB2含量降低,6-Keto-PGF1α含量升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与葛根素组比较,益肾通络大剂量组ET、TXB2含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论益肾通络方能够改善糖尿病模型大鼠NO、ET、TXB2、6-Keto-PGF1α的含量,从而保护血管内皮功能。

益肾通络方对雌性小鼠卵子修复精子DNA能力的影响

目的:探讨益肾通络方是否能够改善卵母细胞的DNA修复能力。方法:复制苯并(a)芘(BaP)致雄鼠精子DNA损伤模型,使正常雄鼠(雄性空白对照组)及BaP染毒雄鼠(雄性造模组)分别与灌胃益肾通络方水煎液及灌胃生理盐水的雌鼠合笼,对比各组雌鼠的妊娠结局。结果:造模后,雄性造模组小鼠精子DNA碎片指数(DFI)高于雄性空白对照组(P<0.01)。与空白组(正常雄鼠与正常雌鼠合笼)比较,同BaP染毒雄鼠合笼的正常雌鼠(BaP组)产仔数及活胎数显著降低(P<0.01),死胎率明显增高(P<0.01);与BaP组比较,同BaP染毒雄鼠合笼的灌胃益肾通络方雌鼠(益肾通络方组)产仔数及活胎数显著增加(P<0.05,P<0.01),但两组死胎数比较,差异无统计学意义。结论:益肾通络方提前干预雌鼠可改善其与高精子DNA碎片指数(DFI)雄鼠合笼的妊娠结局。具体机制推测可能与益肾通络方改善卵子的DNA修复能力有关。

健脾益肾化瘀通络方治疗移植肾功能延迟的疗效观察

目的:探讨健脾益肾化瘀通络方治疗移植肾功能延迟的效果及对TNF-α、IL-6、hs-CRP等炎性反应因子的影响。方法:选取2013年4月至2018年3月武汉科技大学附属普仁医院收治的移植肾功能延迟恢复的患者60例作为研究对象。按照随机数字表法随机分组法分为对照组和观察组,每组30例。对照组给予血液透析联合免疫抑制方案辅助治疗,观察组在对照组基础上给予健脾益肾化瘀通络方治疗。比较2组肾功能指标(Scr、BUN、Ccr)、炎性反应因子(TNF-α、IL-6、hs-CRP)、肾功能恢复时间及临床疗效。结果:治疗后,2组Scr、BUN、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均降低,Ccr水平均升高(P<0.05);观察组治疗后Scr、BUN、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均降低幅度及Ccr升高幅度均高于对照组(P<0.05);观察组治疗后肾功能恢复时间早于对照组(P<0.05);2组患者总有效率比较(观察组96.67%:对照组90.00%)(P>0.05)。结论:健脾益肾化瘀通络方可显著改善移植肾功能水平,缩短移植肾功能延迟恢复的时间,降低血清TNF-α、IL-6、hs-CRP等炎性反应因子水平,临床治疗效果显著,可进一步推广。

益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞表型转化的影响

目的通过观察膜性肾病(MN)足细胞标志蛋白Nephrin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化,探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞转分化的干预作用及其可能机制。方法从60只实验鼠中随机选取15只为正常对照组,其余通过尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)法建立膜性肾病动物模型,造模成功后将大鼠随机分为模型组、贝那普利(10 mg/kg)组、益肾通络方(21.33 g/kg)组。各组依据对应的剂量分别灌胃给药,治疗结束后检测24 h蛋白尿(UTP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)评估大鼠治疗情况;观察大鼠的肾脏病理形态学变化;免疫组化检测大鼠肾组织Nephrin、α-SMA蛋白表达。结果经贝那普利和益肾通络方干预后,UTP、TC、TG较模型组显著下降,TP、ALB较模型组显著增高(P<0.05);BUN、Scr差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示,贝那普利组与益肾通络方组Nephrin表达较模型组上升,a-SMA表达较模型组降低。结论益肾通络方能够降低膜性肾病大鼠蛋白尿,升高血浆白蛋白,降低血脂,其作用机制可能与抑制足细胞发生表型转分化有关。

通络益肾方联合雷公藤多甙片治疗糖尿病肾病临床疗效及氧化应激水平的影响

目的观察通络益肾方联合雷公藤多甙片治疗糖尿病肾病(DN)的临床疗效。方法将116例DN患者随机分为对照组(雷公藤多甙片)和试验组(通络益肾方+雷公藤多甙片),8周为1个疗程。观察患者治疗的总有效率及肾功能、24h尿蛋白定量及氧化应激指标的改善情况及不良反应。结果试验组总有效率显著高于对照组(P<0.05);两组患者治疗后肾功能、尿蛋白定量及氧化应激水平均明显改善(P<0.05)。试验组各项指标均优于对照组(P<0.05)。结论通络益肾方联合雷公藤多甙片可改善DN患者肾功能及氧化应激水平,提高DN的临床疗效。

益肾通络方对多囊卵巢综合征大鼠IRS-2蛋白表达及IL-18、IL-10水平的影响

目的:观察益肾通络方对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠黄素化颗粒细胞IRS-2蛋白表达及IL-18、IL-10水平的影响。方法:将30只雌性SPF大鼠随机分为3组,即正常组、PCOS模型组、中药组,每组10只,建立PCOS大鼠模型。模型组及正常组灌服生理盐水,中药组灌服益肾通络方,造模后3组大鼠均取出卵巢,进行心脏采血,通过免疫印迹法检测大鼠卵巢黄素化颗粒细胞IRS-2的蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测大鼠血清IL-18、IL-10水平的变化。结果:PCOS组的IRS-2蛋白表达增强,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);中药组的IRS-2蛋白表达较PCOS组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS组的IL-18水平升高,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);中药组IL-18水平显著下降,与PCOS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。PCOS组的IL-10水平降低,与正常组比较有统计学意义(P<0.05);中药组的IL-10水平上升,与PCOS组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾通络方可以调节PCOS大鼠黄素化颗粒细胞IRS-2蛋白表达。PCOS大鼠黄素化颗粒细胞IRS-2参与PCOS的发病,但是产生这种变化的原因尚不清楚。同时亦证明了益肾通络方对PCOS的发病可能起到双向调节作用。

益肾泄浊通络方联合穴位敷贴治疗慢性肾脏病3～4期临床研究

目的:观察益肾泄浊通络方联合中药制剂外敷足三里、三阴交、肾俞穴治疗慢性肾脏病3~4期患者的临床疗效。方法:将70例患者随机分为治疗组和对照组各35例。两组患者均给予基础治疗。治疗组加用益肾泄浊通络方口服及中药穴位敷贴,疗程12周。观察两组患者中医证候积分及尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿酸(UA)、内生肌酐清除率(CCr)及血红蛋白(Hb)的变化。结果:治疗组总有效率88.57%,对照组总有效率62.85%,两组疗效比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后中医证候积分较治疗前明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),与对照组治疗后比较差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组治疗后BUN、SCr、CCr与治疗前相比均有好转,与对照组治疗后比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾泄浊通络方联合穴位敷贴能有效延缓慢性肾脏病的进展,且安全有效。

基于促炎因子探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎大鼠肾功能的干预作用

目的:从促炎因子角度探讨益肾通络方对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾功能的改善作用。方法:将30只雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、UUO模型组、贝那普利组和益肾通络方组,每组6只。正常组、假手术组及UUO模型组大鼠每日予10mL/kg蒸馏水灌胃,贝那普利组每日予盐酸贝那普利片1.0mg/kg灌胃,益肾通络方组每日予益肾通络方14.6g/kg灌胃,各组连续给药干预4周。用ELISA法测定各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和α1-微球蛋白的表达水平,用生化仪测定血清中尿素氮、肌酐、尿酸、24h尿蛋白定量的含量。结果:与UUO模型组比较,益肾通络方组各项数值均显著降低(P<0.05),益肾通络方组在尿素氮、肌酐、尿酸、α1-微球蛋白和24h尿蛋白定量方面较贝那普利组降低更显著(P<0.05),且对MCP-1的改善作用优于贝那普利组(P<0.05)。结论:益肾通络方可通过下调促炎因子缓解局部炎症反应、改善肾功能和延缓肾病进程.

益肾通络方治疗无症状性特发性少弱精子症不育临床研究

目的:观察益肾通络方治疗无症状性特发性少弱精子症不育的临床疗效。方法:130例患者随机为对照组(65例,脱落5例)和治疗组(65例,脱落6例),对照组采用左卡尼汀口服溶液治疗,治疗组采用益肾通络方治疗。观察并比较两组患者治疗前及治疗4、8、12周后的精液体积、精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、精子总活力(PR+NP)、直线运动速度(VSL)、精子功能(精子尾部低渗膨胀率、精子顶体酶活性),精子DNA碎片指数(DFI)等情况,比较两组患者配偶妊娠率,评价临床疗效。结果:与本组治疗前比较,治疗12周,两组患者的精液体积、精子浓度、精子总数、PR、PR+NP、VSL、精子DFI、精子顶体酶活性、精子尾部低渗膨胀率均显著改善(P<0.05),且除精液体积外,治疗组均优于对照组(P<0.05);治疗组总有效率为83.05%(49/59),显著高于对照组的61.67%(37/60)(P<0.05);治疗组患者配偶妊娠率为16.95%(10/59),高于对照组的10.00%(6/60),但差异无统计学意义;整个临床研究过程中患者均未出现明显不良反应及一般安全性指标异常。结论:益肾通络方可提高无症状性特发性少弱精子症不育的生育能力,且具有较好的安全性。

益肾通络方对苯并(a)芘致精子DNA损伤模型小鼠睾丸靶基因影响的多组学研究

目的探讨益肾通络方对精子DNA损伤的影响及可能作用机制。方法40只ICR小鼠随机分为空白组,模型组和益肾通络方低、中、高剂量组,每组8只。除空白组外其余各组按100 mg/(kg·d)灌胃苯并(a)芘复制精子DNA损伤模型,益肾通络方低、中、高剂量组上午造模,下午分别给予益肾通络方水煎液5.95、11.89、23.78 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组同时灌胃0.1 ml/10 g生理盐水,各组均持续8周。检测各组小鼠精子DNA碎片指数(DFI),根据DFI结果进行睾丸转录组学和蛋白组学分析,对两组学的结果进行趋势分析、GO分析和KEGG富集通路分析。采用九象限法筛选益肾通络方作用靶基因,并采用Western blot法进行验证。结果模型组小鼠精子DFI明显高于空白组(P<0.01);与模型组比较,益肾通络方高剂量组小鼠精子DFI显著下降(P<0.01),而益肾通络方低、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05),故对空白组、模型组、益肾通络方高剂量组进行转录组学和蛋白组学分析。结果显示,共筛选出1272个差异基因(DEGs)和1309个差异蛋白(DEPs)。趋势分析筛选出8种趋势类型,其中谱2为模型组表达下调,益肾通络方干预后恢复的基因/蛋白;谱5为模型组表达上调,益肾通络方干预后恢复的基因/蛋白。因此,选择对谱2和谱5中的基因或蛋白进一步分析。GO分析显示,在生物学过程、细胞成分、分子功能类别中排第一位分别是发育过程、细胞内部分、分子功能监管。谱2和谱5中基因KEGG富集通路前五位分别为铂类药物抗药性、破骨细胞分化、多种细胞凋亡、凋亡及非酒精性脂肪肝疾病,蛋白KEGG通路前五个通路分别为系统性红斑狼疮、氮代谢、蛋白消化吸收、非洲锥虫病和B细胞受体信号通路。九象限法筛选出X线交叉互补修复基因1(Xrcc1)、细胞色素b5还原酶3(Cyb5r3)、血红素结合蛋白1(Hebp1)、丝氨酸蛋白酶45(Prss45)为益肾通络方靶基因。经Western blot验证,与空白组比较,模型组小鼠睾丸组织Xrcc1及Prss45蛋白表达显著下调(P<0.05)。益肾通络方高剂量组Xrcc1蛋白表达较模型组显著上调(P<0.01)。结论益肾通络方可修复由苯并(a)芘染毒引起的精子DNA损伤,其机制可能与耐药、凋亡等通路及Xrcc1有关。

基于NLRP3/CASP1/GSDMD通路探讨益肾通络方抑制糖尿病肾脏疾病小鼠足细胞焦亡的作用机制

目的观察益肾通络方(熟地黄、黄芪、山萸肉、丹参、大黄、鬼箭羽、血竭)对db/db小鼠足细胞及小鼠肾足细胞MPC-5焦亡的影响,探讨其抑制糖尿病肾脏疾病足细胞焦亡改善足细胞损伤的可能作用机制。方法①体内实验。以db/db小鼠(模型组及各给药组)及同窝对照db/m小鼠(对照组)为研究对象。db/db小鼠按体质量随机分为5组,除模型组外,其余4组分别按照每日1.0、2.5、5.0 g/kg剂量给予益肾通络方及10 mg/kg缬沙坦灌胃,模型组及对照组给予等量蒸馏水。治疗8周后,透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织中足细胞数量与形态变化情况;对肾脏组织进行TUNEL染色,同时利用免疫荧光技术标记足细胞标志蛋白Wilms瘤基因1(WT-1);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;利用实时荧光定量PCR、Western blotting检测小鼠肾脏组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(CASP1)、焦孔素D(GSDMD)mRNA及蛋白表达和激活情况。②体外实验。以糖基化终末期产物(AGEs)诱导的小鼠肾足细胞MPC-5为研究对象,利用CCK-8法及乳酸脱氢酶(LDH)释放检测技术,评价细胞成活率及细胞膜完整性;利用Q-PCR、Western blotting检测MPC-5细胞中NLRP3、CASP1、GSDMD的mRNA及蛋白表达和激活情况。结果①体内实验。与对照组相比,模型组小鼠肾脏足细胞足突出现融合,基底膜明显增厚,肾脏组织TUNEL染色阳性细胞比例增加,WT-1阳性表达率下降,血清中IL-1β、IL-18含量增加,NLRP3、CASP1、GSDMD、IL-1β及IL-18 mRNA表达上调,NLRP3蛋白表达上调,CASP1、GSDMD被激活(均P<0.05);与模型组相比,益肾通络方不同剂量干预后,肾脏组织的足细胞损伤情况缓解,肾脏组织TUNEL阳性细胞明显减少,血清中IL-1β、IL-18含量下降,NLRP3、CASP1、GSDMD mRNA表达下调,NLRP3蛋白表达下调,CASP1、GSDMD通路蛋白激活被抑制(均P<0.05)。②体外实验。与对照组相比,模型组MPC-5细胞活性下降,LDH释放增加,NLRP3、CASP1、GSDMD、IL-1β及IL-18 mRNA表达上调,NLRP3蛋白表达上调,CASP1、GSDMD被激活(均P<0.05);给予益肾通络方作用后,足细胞损伤情况改善,LDH释放率下降,NLRP3、CASP1、GSDMD mRNA表达下调,NLRP3蛋白表达下调,CASP1、GSDMD通路蛋白激活被抑制(均P<0.05)。结论益肾通络方可能通过抑制NLRP3/CASP1/GSDMD信号通路的激活,减少足细胞焦亡的发生,进而发挥改善糖尿病肾脏疾病小鼠足细胞损伤的作用。

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78 mRNA及JNK mRNA表达的影响

目的探讨通络益肾方治疗糖尿病肾病的可能作用机制。方法 35只SD大鼠随机分为空白组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组7只。中药大、中、小剂量组小鼠每日分别给予6.20、3.10、1.55 g/ml的通络益肾方2 ml灌胃;西药组小鼠每日灌胃洛汀新(0.09 mg/ml)、糖适平(0.27 mg/ml)混合液2ml。每日1次,连续给药10天。于末次灌胃2 h后制备含药血清。大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1细胞分正常组、模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,同步化24 h后,正常组加5.6 mmol/L低糖+10%的胎牛血清100μl,模型组加30 mmol/L高糖+10%的空白血清100μl,中药大、中、小剂量组加30 mmol/L高糖及10%的中药大、中、小剂量含药血清100μl,西药组加30 mmol/L高糖+10%的西药血清100μl。分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用流式细胞术检测系膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组系膜细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA的表达水平。结果与正常组同时间点比较,模型组系膜细胞在24 h、48 h和72 h凋亡率持续增加(P<0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组24 h、48 h和72 h时系膜细胞凋亡率均明显下降(P<0.01);中药大、中、小剂量组在各时间点系膜细胞凋亡率随着药物剂量升高而降低,呈剂量依赖性(P<0.01)。与正常组同时间点比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降,JNK mRNA表达在48、72 h时明显增加(P<0.05或P<0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组系膜细胞GRP78 mRNA、JNK mRNA在48 h、72 h时明显减低,且以中药大剂量组最低(P<0.05或P<0.01)。结论通络益肾方可抑制肾小球系膜细胞凋亡,其作用机制可能与延缓GRP78 mRNA增幅、下调JNK mRNA表达有关。

益肾通络方加减治疗肝郁肾虚型勃起功能障碍30例临床观察

目的观察益肾通络方加减治疗男性勃起功能障碍(ED)的临床疗效。方法将60例ED患者随机分为治疗组、对照组各30例。治疗组给予口服益肾通络方加减,每天1剂。对照组口服他达拉非片,每次10mg,睡前30min服用,每3天1次,两组均治疗4周后评价临床疗效,并于治疗前后比较两组患者勃起功能障碍国际指数(IIEF-5)评分及中医症状积分。结果治疗组总有效率为76.6%,对照组为83.3%,两组临床疗效总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后IIEF-5评分与本组治疗前比较均明显升高(P﹤0.05),治疗后两组间IIEF-5评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗后阳痿不举、情志抑郁、头晕耳鸣、腰膝酸软、性欲与射精感评分与治疗前比较明显降低(P﹤0.05)。治疗后两组头晕耳鸣、腰膝酸软、性欲与射精感评分比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论益肾通络方治疗ED疗效与他达拉非片相近,但益肾通络方改善ED患者临床症状疗效更优。