TGF-β_1R在通脉大生片作用下的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的探索TGF-β1R在通脉大生片作用下的离体大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞培养上清液,用酶联免疫法检测上清液中TGF-β1R的表达量。结果自然生长组各时间点的TGF-β1R的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组于给药12 h时TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低,FSH组于给药2 h后TGF-β1R的表达量达高峰,48 h降到最低。结论通脉大生片可增加TGF-β1R的表达量,进而揭示通脉大生片通过可能通过TGF-β/smad信号通路来调节卵泡的发育和排卵。

通脉大生片对肾虚排卵障碍不孕模型大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的影响

目的:探讨通脉大生片治疗对雄激素致不孕大鼠模型(ASR)卵巢基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:采用雄激素致不孕大鼠模型(ASR模型),以原位杂交方法观察分析卵巢MMP-9 mRNA信号表达的情况。结果:由于药物的干预,各个用药组MMP-9阳性细胞的表达浓度和表达总量均高于模型组,以通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达尤其明显,与正常组水平接近,差异无统计学意义(P>0.05)。通脉大生片高剂量组卵巢MMP-9 mRNA表达亦明显优于氯米芬组,差异(P<0.05)。结论:通脉大生片可能通过促进肾虚排卵障碍不孕大鼠卵巢基质金属蛋白酶-9的表达,发挥其对不孕症的治疗作用,这可能是其促进卵泡发育和卵巢排卵的机制之一。

Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达

目的研究Smad3在通脉大生片作用后的大鼠卵巢颗粒细胞中的表达。方法将培养的原代大鼠卵巢颗粒细胞爬片后,随机分为自然生长对照组、通脉大生片高剂量组、通脉大生片中剂量组、通脉大生片低剂量组、FSH组,分别在细胞生长对数期给药,取给药后的细胞爬片,用免疫组化法检测细胞爬片中Smad3的表达量。结果自然生长对照组各时间点的Smad3的表达量无明显变化,通高组、通中组、通低组给药12h时Smad3核阳性率明显高于给药6h和24h(P<0.05);通中组给药12h时Smad3核阳性率明显高于通高组和通低组12h时Smad3核阳性率,有统计学意义(P<0.05);FSH组给药后1h、2h时Smad3核阳性率明显高于正常组,有统计学意义(P<0.05),FSH组给药后2h时Smad3核阳性率明显高于给药后1h时Smad3核阳性率,有统计学意义(P<0.05)。结论通脉大生片可能是通过增加Smad3的表达量来促进卵泡发育,以达到治疗排卵障碍性不孕的目的 。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢TGF-β1及Smad7表达的影响

目的:观察通脉大生片对大鼠卵巢TGF-β1、Smad7在TGF-β/smads通路中的表达变化及意义。方法:建立大鼠肾虚排卵障碍不孕(ASR)模型,通过阴道涂片筛选造模成功大鼠后分组用药,采用酶联免疫法(Elisa)法检测TGF-β1的表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠卵巢中Smad7蛋白的表达量。结果:①模型组大鼠卵巢TGF-β1的表达量最低,与正常组、通高组、来曲唑组、右归丸组相比,有统计学差异(P<0.05,P<0.01);通脉大生片组中以通高组最优;②通脉大生片高、中组来曲唑组及右归丸组Smad7表达均低于模型组(P<0.05,P<0.01),以通高组效果最好。结论:通脉大生片可用于治疗肾虚排卵功能障碍型不孕,而其促排卵作用可能部分是通过调节TGF-β/smads信号通路中TGF-β1及Smad7的表达,进而促进排卵障碍型不孕大鼠卵巢颗粒细胞TGF-β/smads信号通路的激活来实现的。

基于有效成分的溶出性与粉末分散性构建通脉大生片的粉末分散体

目的改善通脉大生片中丹参与白芍的溶出性,构建优良的粉末分散体。方法采用普通粉碎法及超微粉碎法对白芍、丹参及紫河车进行粉碎,并将六偏磷酸钠(SH)作为粉碎分散剂,共制备19个粉末分散体样品。考察各粉末分散体的粒径分布、红外光谱、分散性,比表面积及孔隙率,采用HPLC法测定丹酚酸B、芍药苷含量,评价不同粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度。结果红外光谱结果显示超微粉碎、药材混合打粉、SH均没有使药材粉末产生新的物质。丹参-白芍混合超微粉末分散体中丹酚酸B及芍药苷的溶出度最高,丹酚酸B 83.57%,RSD 2.03%;芍药苷80.75%,RSD 0.61%。结论溶出度不仅受粉末比表面积的影响,同时还受到粉末分散性的影响。在改善粉末中有效成分溶出度时,不仅要考虑增大粉末的比表面积,还应改善粉末的分散性。紫河车与丹参-白芍的混合超微粉末中,丹酚酸B、芍药苷溶出度较丹参-白芍混合粉末中两者的溶出度低,因此将紫河车单独粉碎后与另两者混合。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢Smad4表达的影响

目的观察通脉大生片对大鼠卵巢形态学改变及信号蛋白Smad4在TGF-β/smads通路中的表达变化及意义。方法建立大鼠肾虚排卵障碍不孕(ASR)模型,通过阴道涂片筛选造模成功大鼠后分组用药5周后,处死大鼠,HE染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测大鼠卵巢中Smad4蛋白的表达量。结果 1各用药组从卵巢形态学上明显恢复的趋势,镜下可见成熟卵泡和黄体。2与模型组相比,通脉大生片高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠卵巢Smad4的表达水平升高(P<0.05),以高剂量组及来曲唑组最明显。结论通脉大生片可用于治疗肾虚排卵障碍型不孕,而其促排卵作用可能部分是通过调节Smad4的表达,进而调控卵巢TGF-β/smads信号通路的激活来实现的。

通脉大生片对肾虚排卵障碍型不孕大鼠卵巢P-Smad3表达水平影响研究

目的在前期研究的基础上,探讨以"补肾调冲法"立法的通脉大生片对大鼠卵巢TGF-β/Smads信号转导通路的调控作用,探索中医补肾调冲法促卵泡发育的机制,从而为补肾调冲法治疗肾虚排卵障碍型不孕提供科学依据。方法选取9日龄SD大鼠,通过给予颈背部皮下注射丙酸睾酮,建立肾虚排卵障碍型不孕大鼠(ASR)模型,根据大鼠阴道脱落细胞涂片的表现,筛选出造模成功的大鼠,随机分为6个组,分别为模型组、通脉大生片高剂量组(简称通高组)、通脉大生片中剂量组(简称通中组)、通脉大生片低剂量组(简称通低组)、来曲唑组(LE)、右归丸组,另设正常组,于大鼠第80日龄,分别给予相应药物进行干预,连续干预5周后股动脉取血并处死动物,迅速剥离大鼠卵巢,每组选取三只大鼠的卵巢组织,立即置于Eppendorf管中,储存于液氮中以备检测。采用免疫印迹法,检测各组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平。结果与模型组相比,正常组、通高组、来曲唑组、右归丸组大鼠卵巢P-Smad3的表达水平较高,差异有显著意义(P<0.01),通低组、通中组的P-Smad3水平亦有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);通脉大生片各剂量组中,通高组升高P-Smad3水平的效果明显高于通中组、通低组。结论通脉大生片可以提高肾虚排卵障碍性不孕大鼠P-smad3的表达水平,进而改善卵巢局部的微环境,以促进卵泡的生长、发育和促进成熟卵泡破裂及卵子的排出,从而达到治疗肾虚排卵障碍性不孕的作用。