同仁牛黄清心丸治疗痰热上扰型高血压性眩晕临床观察

高血压病是以外周循环动脉压力增高为主要临床表现的心血管综合征,眩晕为其主要临床表现之一。高血压性眩晕属中医学“眩晕”的范畴,结合其发病特点及临床实践观察,多以肝、脾、肾三脏为基础,风、火、痰、瘀、虚等常相兼为病,尤以痰为主。辨病辨证论治高血压性眩晕——痰热上扰证,当以益气养血、镇静安神、化痰息风为法,标本兼顾,因此选取同仁牛黄清心丸治疗高血压性眩晕。文章总结应用体会,以期为高血压性眩晕的中医治疗提供思路。

UPLC-MS/MS法同时测定同仁牛黄清心丸中15个胆汁酸的含量

目的 建立同时测定同仁牛黄清心丸中15个胆汁酸成分含量的方法,并采用该法测定15批样品的含量。方法 以脱氢胆酸为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术进行测定。色谱柱为Hypersil GOLD C_(18),以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;采用加热型电喷雾离子源,在负离子模式下进行平行反应监测模式扫描。采用SPSS 24.0软件对含量测定结果进行化学模式识别分析。结果 15个胆汁酸成分在各自检测质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(R^(2)均不小于0.998 9),精密度、重复性、稳定性均良好(RSD均不大于5.49%),平均加样回收率为93.8%~105.7%(RSD为0.5%~5.8%)。牛磺胆酸、7-酮-3α,12α-羟基胆烷酸、12-脱氢胆酸、甘氨胆酸、3-oxo-7α,12α-hydroxy-5β-cholanoic acid、牛磺鹅脱氧胆酸、3α-羟基-7-氧代-5β-胆烷酸、猪胆酸、牛磺脱氧胆酸钠、猪脱氧胆酸、胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、甘氨脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸的平均含量分别为670.56、25.97、10.54、280.12、4.04、29.81、182.98、813.55、120.95、220.31、797.37、18.37、68.59、30.13、59.82μg/g。聚类分析和主成分分析均将15批同仁牛黄清心丸分为2类,其中S1~S12为一类,S13~S15为另一类。结论 所建方法准确、灵敏度高、专属性强,且测定胆汁酸种类较多,能快速实现对同仁牛黄清心丸中15个胆汁酸成分的定量分析,适用于该药的质量控制。

同仁牛黄清心丸的毒性研究

目的:观察大鼠和小鼠口服同仁牛黄清心丸的急性毒性及长期毒性作用,为临床试验设计人用安全剂量和主要观察指标提供参考。方法:以SPF级ICR小鼠测定最大给药量的急性毒性试验;用SPF级SD大鼠进行长期毒性试验,160只大鼠按性别与体重随机分为对照组和同仁牛黄清心丸高[3.06 g生药/(kg·d)]、中[1.53 g生药/(kg·d)]、低[0.77 g生药/(kg·d)]剂量组,每日按1.0 m L/100g灌胃给药1次,每周给药6 d,连续灌胃26周,并分别于给药13、26周和停药4周时分批处死动物,观察大鼠的一般行为、体重增长、食量消耗,进行血常规及血液生化学指标、尿常规检查、系统尸解及组织病理学诊断。结果:小鼠体重增长、摄食量及大体解剖与空白对照组比较均无明显差异,试验过程中未见动物死亡。长期毒性各给药组大鼠的外观体征、行为活动、粪便性状及摄食量等未见明显异常,各剂量组的血常规、生化学、脏器指数等指标与对照组比较均无明显差异;病理学检查对照组及给药组均有少数动物个别组织出现异常,但与对照组比较,各给药组均未出现相关毒性病理病变。结论:小鼠灌胃同仁牛黄清心丸允许的最大给药量为28.235 g生药/(kg·d),相当于人日用剂量的461倍;在本实验条件下大鼠口服同仁牛黄清心丸高[3.06 g生药/(kg·d)]、中[1.53 g生药/kg·d]、低[0.77 g生药/(kg·d)]剂量组26周均未见明显毒性反应,该剂量下同仁牛黄清心丸对SD大鼠无明显毒性作用。

气相色谱法测定同仁牛黄清心丸中麝香酮的含量

目的建立同仁牛黄清心丸中麝香酮的气相色谱(GC)含量测定方法。方法色谱柱为HP-5柱(30 mm×32 mm,25μm),载气为氮气,流速1.0 mL/min,柱温190℃,进样口温度250℃,氢火焰离子化检测器温度220℃。结果麝香酮进样量在0.12～0.28μg(r=0.999 1)范围内,麝香酮峰面积与进样量呈现良好的线性关系,平均加样回收率为98.72%,RSD=2.34%。结论该方法快速、简便、准确、重复性较好,结果可靠,可用于控制同仁牛黄清心丸制剂的质量。

基于MIF-HEMT生物传感技术的同仁牛黄清心丸关键质量属性测量研究

中药复方临床疗效关联的关键质量属性(critical quality attributes,CQAs)测量是中药制造亟待攻克的关键难题之一。为此,以同仁牛黄清心丸为载体,提出生物传感结合超高效液相色谱/串联质谱(ultra-performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的集成策略。首先,以干预缺血性脑卒中的潜在关键靶点巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)为视角,采用高电子迁移率晶体管(high electron mobility transistor,HEMT),创建了MIF-HEMT生物传感,开展了同仁牛黄清心丸不同柱分离组分干预脑卒中作用的测量研究,发现其3段组分均具有较强的脑卒中治疗作用,尤其A段,作用强度达8.722×10^(-10)g·mL^(-1)。进一步采用MIF-HEMT生物传感集成UPLC-MS/MS,实现了同仁牛黄清心丸不同组分干预脑卒中的CQAs分离和鉴定研究。测量得到了芍药内酯苷(albiflorin)、芍药苷(paeoniflorin)、升麻素苷(prim-O-glucosylcimifugin)等19个干预MIF发挥脑卒中治疗作用的潜在CQAs。这为同仁牛黄清心丸干预MIF产生脑卒中治疗作用的CQAs研究提供了关键测量技术与方法借鉴,为优质名方高效利用和质量控制测量提供了重要参考。

山羊角替代羚羊角后同仁牛黄清心丸的毒理学研究

目的:考察同仁牛黄清心丸(山羊角替代羚羊角)的毒性,为该药的临床安全应用提供实验参考。方法:选用SPF级ICR小鼠进行急性毒性实验,测定最大给药量。将SPF级大鼠随机分为对照组、替代前同仁牛黄清心丸组(3.060g生药·kg-1·d-1)和替代后同仁牛黄清心丸高、中、低剂量(3.570、1.785、0.893g生药·kg-1·d-1)组,每日按1.0m L/100g灌胃给药1次,每周给药6d,连续灌胃给药26周,停药恢复4周。给药期间及恢复期间,观察大鼠的一般状况,并记录每周的进食量和体质量变化。给药期和恢复期结束后分别检测大鼠血液学指标和血清生化指标,取主要脏器并计算脏器指数,同时进行系统观察和组织病理学检查。结果:替代后同仁牛黄清心丸最大给药量为30.000g生药/kg,给药过程中未见动物死亡,小鼠体质量增长、摄食量及大体解剖与空白对照组相比较均无明显差异。长期毒性实验中,与同期对照组比较,各给药组动物一般状况、行为活动、体质量等检查均未见异常;大鼠摄食量在给药期间时有低于对照组,但替代后与替代前组比较无明显差异,给药组个别血液学指标和血液生化指标虽与对照组比较或高或低,但均在本实验室正常参考值范围内;病理学检查对照组及给药组均有少数动物个别组织出现异常,但与对照组相比,各给药组均未出现与药物相关的毒性病理病变。结论:一日累计给药量30.000g生药/kg剂量,相当于人日用剂量的420倍,小鼠无明显不良反应。长期毒性实验提示山羊角替代羚羊角后同仁牛黄清心丸对大鼠给药量3.570 g生药·kg-1·d-1以下对大鼠用药安全。

中药大品种制造关键质量属性表征:水分含量化学属性的同仁牛黄清心丸NIR现场检测方法研究

该研究针对中药制造过程水分含量关键质量属性的现场检测问题,以中药大品种同仁牛黄清心丸为载体,采用近红外(near infrared,NIR)光谱技术结合化学计量学方法,建立生产真实世界中带玻璃纸和不带玻璃纸的同仁牛黄清心丸水分含量NIR现场检测模型。用烘干法测定水分含量作为参考值,采用偏最小二乘法(partial least squares,PLS)将光谱与水分参考值进行关联分析,并对光谱预处理方法进行筛选优化,进一步提高了模型的准确性和稳定性。结果表明,光谱预处理方法均采用标准正则变换(standard normal variate,SNV),带玻璃纸和不带玻璃纸的同仁牛黄清心丸样品潜变量因子数分别为2和7时,所建立的定量分析模型效果最优。带玻璃纸样品模型的预测决定系数(Rpre2)和预测均方根误差(root mean square error of prediction,RMSEP)分别为0.7657和0.1572%;不带玻璃纸样品模型的Rpre2和RMSEP分别为0.7722和0.2078%。该研究所建立的带玻璃纸和不带玻璃纸的同仁牛黄清心丸水分含量NIR定量模型均具有良好的预测性能,可实现对大蜜丸水分含量的快速、准确和无损定量分析,并为中药大品种制造中水分关键化学属性的现场质量控制提供了方法。

中药大品种制造关键质量属性表征:空间分布均匀度质量属性的同仁牛黄清心丸贵细药混合过程控制可视化方法研究

贵细药的空间分布均匀度是同仁牛黄清心丸过程控制的关键质量属性。以同仁牛黄清心丸混合过程生产真实世界样品为研究对象,采集大小为180 pix×180 pix的高光谱成像,共32400个数据点的样本。采用光谱角匹配法(spectral angle mapping,SAM)、经典最小二乘法(classic least square,CLS)和混合调谐匹配滤波法(mixture tuned matched filtering,MTMF),建立混合中间体的贵细药辨识模型。结果表明MTMF模型有更高的识别精度,因此基于MTMF模型辨识了混合中间体的贵细药空间分布。进一步结合直方图法,评价混合中间体的贵细药均匀度。数据显示,混合中间体中人工牛黄、人工麝香、冰片、羚羊角、水牛角浓缩粉的标准偏差值分别为4.78,6.5,3.48,1.96,3.00;方差分别为22.8,42.3,12.1,3.82,9.00;偏度值分别为1.26,1.71,0.06,-0.86,1.04,最终结果表明混合中间体中冰片、羚羊角、水牛角浓缩粉混合较为均匀,人工牛黄次之,人工麝香混合均匀度较差。建立了同仁牛黄清心丸混合过程生产真实世界的贵细药空间分布均匀度可视化方法,为中药大品种混合过程质量控制方法研究提供依据。

中药大品种制造关键质量属性表征:质构感官属性的同仁牛黄清心丸质量控制方法研究

质构感官属性是中药大蜜丸质量控制的内容之一。该研究以中药大品种同仁牛黄清心丸的合坨丸块和成品的生产真实世界样品为载体,开发中药大蜜丸质构感官属性的质量控制方法。首先,采用质构仪的质地剖面分析(texture profile analysis,TPA),通过单因素和中心点复合设计(central composite design,CCD)试验,优化质构方法参数,建立同仁牛黄清心丸质构感官属性的检测方法。结果表明,质构方法参数的最优参数水平为形变率70%,检测速度30 mm·min^(-1),间隔时间15 s,所建立的同仁牛黄清心丸质构感官属性的检测方法稳定、可靠。进一步,基于30批同仁牛黄清心丸成品的6种质构感官属性,共540个数据点,采用多元统计过程控制(multivariate statistical process control,MSPC)模型,通过Hotelling T2和平方预测误差(squared prediction error,SPE)控制图,建立了质构感官属性的同仁牛黄清心丸质量控制方法,为中药大蜜丸制造质量控制体系的完善提供参考。

中药大品种制造关键质量属性表征:化学与功效属性结合的同仁牛黄清心丸模块化辨识研究

关键质量属性辨识是中药大品种同仁牛黄清心丸质量控制的关键问题。该研究采用液质联用技术结合网络药理学方法,通过TCMSP,BATMAN-TCM,TCMID数据库及相关文献和液质解析的数据,收集了同仁牛黄清心丸661个活性化学成分,基于SwissTargetPrediction网站预测了活性化学成分1413个作用靶点。将预测靶点与456个中风疾病靶点取交集,得到152个潜在作用靶点,基于Metascape网站对潜在作用靶点进行功能富集分析。进一步,基于功效模块将同仁牛黄清心丸全方27味中药划分为4组,以活血化瘀组和补益组为研究示范,筛选了活血化瘀组37个和补益组41个潜在关键作用靶点。此外,基于2个功效模块的潜在关键作用靶点,反向预测了同仁牛黄清心丸治疗中风疾病的137个潜在关键质量属性。该研究揭示了同仁牛黄清心丸治疗中风疾病的潜在作用机制,建立了化学与功效属性结合的中药大品种潜在关键质量属性模块化辨识的方法,并实现了同仁牛黄清心丸潜在关键质量属性辨识,为其关键质量属性研究提供了依据。