DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)磷酸化功能位点推测及功能分析

为阐明DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)参与DNA损伤修复应答的分子机制,本研究通过生物信息学分析,发现多个潜在的TopBP1磷酸化位点T860,S887,T1104及T1167,利用分子生物学手段从人cDNA文库中扩增并获得TopBP1克隆质粒,将上述磷酸化位点突变为丙氨酸,观察突变质粒转染细胞对DNA损伤修复的应答反应.结果显示,在粒子射线照射或化疗药物处理细胞后,第1104丙氨酸突变(T1104A)的TopBP1蛋白导致pRPA32-S33的磷酸化水平大幅降低,同时细胞周期检验点失活,严重阻滞了DNA应激反应,证实T1104是TopBP1参与DNA损伤修复的关键活性位点.

TopBP1多克隆抗体的制备及初步鉴定

研究以人cDNA文库为模板,构建重组质粒pET41a-TopBP1,在原核表达菌株BL21中通过IPTG诱导,表达并经GST亲和纯化重组蛋白TopBP1-GST,免疫家兔后制备多抗血清,并采用Western-Blot检测其效价和特异性,为TopBP1在DNA损伤修复中的研究奠定基础.结果显示在表达受体菌株BL21中成功表达并纯化了TopBP1-GST重组蛋白,免疫家兔并获得了高效价的多抗血清,利用Western-Blot也证实了抗体特异性,并能识别出经CPT处理后的特异性磷酸化条带.以上表明,高效价的兔抗人TopBP1血清抗体制备成功,为TopBP1相关领域的研究提供了技术支撑.

BRCA1和TopBP1表达与非小细胞肺癌含铂方案疗效的相关性研究

目的探讨DNA损伤修复蛋白乳腺癌易感基因-1（BRCA1）和拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1（TopBP1）表达与非小细胞肺癌（non—small cell lung cancer，NSCLC）含铂方案疗效的相关性。方法回顾性收集2008年1月～2012年12月我院诊断为非小细胞肺癌、采用含铂方案治疗的患者资料及病理组织标本，以免疫组织化学染色法检测BRCA1和TopBP1表达，评价BRCA1和TopBP1表达与NSCLC临床特征的相关性，并以Kaplan—Meier生存曲线和Cox比例风险回归模型评价BRCA1和TopBP1表达与非小细胞肺癌含铂方案治疗效果的相关性。结果共101例非小细胞肺癌患者纳入研究，肿瘤组织中BRCA1和TopBP1表达存在显著相关（P〈0．001，r=0．326）；BRCA1和TopBPI与年龄、性别、吸烟状况、病理类型、临床分期均无明显相关性（P〉0．05）；BRCA1表达阴性患者生存期显著高于阳性患者（中位生存期34vs．21months，HR1．913，95％CI：1．161～3．150，P=0．011）。TopBP1表达阴性患者生存期显著高于阳性患者（中位生存期36vs．23months，HR1．931，95％CI：1．157～3．224，P=0．012）。BRCA1和TopBP1表达与疾病进展时间无显著相关性（P〉0．05）。结论BRCA1和TopBP1表达阴性的NSCLC患者含铂方案疗效较好，是潜在的疗效预测生物标志物。

TopBP1和ATR-ATRIP在细胞周期中的作用及联系

TopBP1(topoisomeraseⅡbeta-bindingprotein1)和ATR(ataxia-telangiectasiamutated-andrad3-re-lated)-ATRIP(ATR-interactingprotein)通过调节一些因子在DNA损伤检控点(DNAdamagecheckpoint)中起着关键的作用,其中TopBP1可以激活ATR-ATRIP的复合体。文章着重阐述了TopBP1和ATR-ATRIP如何调控细胞周期并发挥其维护基因组完整性的作用。

TICRR基因与乳腺癌发生及预后关系的研究

目的:评价TopBP1相互作用检查点和复制调节器(TICRR)基因在乳腺癌发生和预后中的作用。方法:基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中的乳腺癌的测序和临床数据,使用Wilcoxon秩和检验确定TICRR在肿瘤组织和正常组织中的表达。使用基因集富集分析(GSEA)方法评估TICRR的生物学功能。应用Logistic分析研究TICRR表达与乳腺癌临床病理特征的相关性。采用Cox回归分析、Kaplan-Meier分析和列线图确定TICRR对乳腺癌患者临床结局的预测价值。结果:TICRR在乳腺癌组织中表达显著升高(P<0.001)。GSEA分析结果表明,TICRR表达增加主要通过促进细胞周期循环、同源重组等通路来促进肿瘤细胞增。乳腺癌组织中TICRR的高表达与年龄、临床分期、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子2(HER2)表达有关。Logistics回归分析发现TICRR表达与T分期、HER2表达呈正相关,与ER和PR表达呈负相关。Cox回归分析显示,TICRR基因表达是乳腺癌总生存率(HR:1.881,P=0.036)的独立风险因素,在无疾病进展生存期(PFI)单因素分析中是危险因素(P<0.05)。结论:TICRR基因表达增加可能通过调节细胞周期、代谢等相关通路促进乳腺癌发生,检测TICRR基因表达对评价乳腺癌预后有较高的预测价值。