消瘤藤总香豆素诱导结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

为探究广西传统瑶药消瘤藤总香豆素(Total Coumarins from Pileostegia tomentella,TCPT)诱导人结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)HT-29细胞铁死亡的作用及其机制,本研究采用不同浓度TCPT处理人结直肠癌HT-29细胞,利用细胞增殖活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)结合流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞活性的变化情况,采用透射电子显微镜观察细胞线粒体的形态变化,利用二氯荧光素(DCFH-DA)染料探针法检测细胞内铁依赖性活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量的变化,利用特异性荧光探针BODIPY 581/589 C11检测细胞内脂质过氧化物含量,利用蛋白质印记(Western blotting)检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)、胱氨酸-谷氨酸反向转运体亚基(Cysteine-glutamate antiporter subunit,xCT)、核受体共激活因子4(Nuclear receptor Coactivator 4,NCOA4)和二价金属离子转运体(Divalent Metal Transporter 1,DMT1)的表达水平。结果表明:人结直肠癌HT-29细胞经TCPT处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞线粒体出现细胞质骤减、嵴塌陷、“同心圆”等典型的铁死亡形态特征,细胞内的ROS和脂质过氧化物水平呈剂量依赖性显著升高。HT-29细胞铁死亡标志蛋白GPX4、xCT的表达水平下调,而NCOA4、DMT1的表达水平上调。综上所述,消瘤藤总香豆素可使细胞内ROS和脂质过氧化物水平明显升高,从而诱导结直肠癌HT-29细胞铁死亡,这可能是其抗结直肠癌的作用机制之一。

First total synthesis of ocimarin

A facile approach for the first synthesis of ocimarin, naturally occurring coumarins, was developed by employing a cerium （III） chloride heptahydrate-catalyzed Pechmann condensation of phenols and β-keto esters in a solvent-free system as key step, by which ocimarin was achieved by three steps starting from acetylacetic ether and resorcinol with total yield 23.2%. All structures of new compounds were confirmed by IR, ^1H NMR and MS.

白芷不同基原化学成分差异性研究

目的:对白芷(白芷和杭白芷)不同基原进行化学成分差异性研究。方法:对白芷和杭白芷饮片进行浸出物、总香豆素含量及特征指纹图谱研究,浸出物按照2020版《中国药典》四部2201项下方法测定,总香豆素含量采用紫外-分光光度法,特征指纹图谱采用HPLC法。结果:二者质量差异较大,白芷的浸出物含量和总香豆素的含量明显高于杭白芷,且特征指纹图谱成分差异明显。结论:白芷不同基原在所含化学成分方面存在一定的差异性,在制剂开发中应固定基原,以利于制剂的质量控制。

响应面法优化毛大丁草总香豆素提取工艺及其抗氧化作用研究

以毛大丁草为研究对象,选择提取温度、提取溶剂、料液比和提取时间进行单因素试验,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法优化其总香豆素提取工艺,并测定不同产地毛大丁草总香豆素提取率及评价其体外抗氧化活性。结果表明,其最佳提取工艺为提取温度85℃,乙醇体积分数60%,料液比1∶40(g/mL),提取时间60 min。不同产地中清除率最高的为广西百色市样品,IC 50为0.36μg/mL;最低的是贵州黔南州样品,IC 50为121.43μg/mL。不同产地兰香草总黄酮具有一定的总抗氧化能力,能够有效地清除DPPH自由基,效果弱于同浓度条件下V C。经验证该工艺合理、简便,总香豆素提取率可达1.66%。

消瘤藤总香豆素通过诱导铁死亡抑制小细胞肺癌H1688细胞增殖

目的研究消瘤藤总香豆素(total coumarins from Pileostegia tomentella,TCPT)通过诱导铁死亡抑制小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)H1688细胞增殖的机制。方法采用梯度浓度的TCPT处理SCLC细胞H1688后,CCK-8法检测TCPT对细胞增殖的抑制作用;利用透射电镜观察给药后线粒体形态学变化;二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;BODIPY 581/589 C11探针检测细胞内脂质过氧化物的生成能力;Western blot检测细胞中铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein,KEAP1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,NRF2)、铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的表达水平。结果TCPT干预SCLC细胞H1688后,对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。透射电镜下可见TCPT引起SCLC铁死亡形态学变化。TCPT可有效提高细胞内ROS和脂质过氧化物水平。H1688中铁死亡标志蛋白GPX4、NRF2、FTH1的表达下调而KEAP1的表达上调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论PCPT可明显抑制SCLC细胞H1688增殖能力,其机制可能是通过升高细胞内ROS和脂质过氧化水平,最终诱导细胞铁死亡。

前胡总香豆素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:探讨前胡总香豆素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:高糖诱导创建HUVECs损伤模型,将HUVECs随机分成正常对照组、高糖模型组、前胡总香豆素低剂量组(10μg/mL)、前胡总香豆素中剂量组(20μg/mL)、前胡总香豆素高剂量组(40μg/mL)。采用CCK-8法测HUVECs活性,倒置显微镜下观察HUVECs形态;采用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;采用Hoechst染色检测HUVECs凋亡情况;ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α和IL-1β水平;Western blotting测Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3蛋白相对表达量。结果:前胡总香豆素低、中、高剂量组细胞存活率明显高于高糖模型组(P<0.05或P<0.01);与高糖模型组比较,前胡总香豆素低、中、高剂量组HUVECs形态显著改善;前胡总香豆素低、中、高剂量组HUVECs的MDA、LDH含量及细胞凋亡率明显低于高糖模型组,GSH-Px、SOD和NO水平高于高糖模型组(P<0.05或P<0.01),TNF-α和IL-1β水平明显低于高糖模型组(P<0.05或P<0.01);前胡总香豆素低、中、高剂量组Bcl-2蛋白相对表达量高于高糖模型组,Bax、cleaved Caspase-3蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2显著低于高糖模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:前胡总香豆素能保护高糖诱导的HUVECs损伤,其机制可能为调节氧化应激,抑制Bax、cleaved Caspase-3表达,改善Bcl-2表达,降低Bax/Bcl-2水平。

木薯皮总香豆素活性物质超声波提取工艺优化

为了能充分提取和利用木薯皮香豆素活性物质,研究了超声波提取木薯皮总香豆素的工艺。通过单因素试验和Box-Behnken响应面设计优化试验确定了超声波辅助乙醇提取木薯皮中总香豆素活性物质的最优工艺条件,并比较了超声波提取与传统溶剂浸提的提取效果。试验结果表明:超声波辅助乙醇提取木薯皮中总香豆素活性物质的最优工艺条件为:乙醇体积分数95%,超声波功率550 W,提取时间90 min,提取温度60℃,液料比12 mL/g,在此工艺条件下,木薯皮提取物的总香豆素平均质量比为2.48 mg/g。影响总香豆素含量的4个因素的显著程度依次为:超声波功率、提取温度、提取时间、液料比。与溶剂浸提法(提取时间360 min,液料比16 mL/g,总香豆素2.14 mg/g)相比,超声波提取法具有提取速度快、总香豆素含量高、提取物活性好、溶剂用量少等明显优势。

秦皮总香豆素降低小鼠急性高尿酸血症血尿酸水平及机理研究

目的:研究秦皮总香豆素对高尿酸血症小鼠血尿酸水平的影响,并初步探讨其作用机理。方法:采用氧嗪酸钾腹腔注射复制小鼠急性高尿酸血症模型,给予不同剂量秦皮总香豆素(440、220、110mg/kg),观察高尿酸血症小鼠血清尿酸水平及肝脏黄嘌呤氧化酶、鸟嘌呤脱氢酶和腺嘌呤脱氢酶水平。结果:秦皮总香豆素组小鼠的血清尿酸值明显低于模型组,其中以大、中剂量组为佳;对黄嘌呤氧化酶的活性有明显的抑制作用;而对小鼠鸟嘌呤脱氢酶和腺嘌呤脱氢酶的影响无统计学意义。结论:秦皮总香豆素能明显降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平,其机理可能和抑制黄嘌呤氧化酶的活性有关。

前胡中总香豆素的含量测定

应用紫外分光光度法对十一个品种、不同产地的25个前胡样品进行了总香豆素含量测定,最大吸收波长在322±1nm处,平均回收率99.18％,变异系数2.08％。

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，ＯＳＴ）和蛇床子总香豆素（ｔｏｔａｌ－ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，ＴＣＲ）给药，测定大鼠血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）和三种甲状腺激素Ｔ３、反Ｔ３（ｒＴ３）及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ、Ｔ３、ｒＴ３和Ｔ４都显著降低（Ｐ均＜０．０１）；用药大鼠与肾阳虚模型大鼠比较，上述４项指标都有显著性提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示ＯＳＴ和ＴＣＲ可以提高肾阳虚模型大鼠的腺垂体－甲状腺轴功能。

紫外分光光度法测定川明参中总香豆素类成分含量

目的建立川明参药材中总香豆素含量测定方法。方法采用紫外分光光度法,以8-羟基-5-甲氧基补骨脂素为对照品,检测波长为273 nm。结果在1.53～7.65μg/ml质量浓度范围内,对照品8-羟基-5-甲氧基补骨脂素的吸光度和浓度线性关系良好,r=0.9991。平均回收率为101.8%,RSD=2.37%(n=6)。结论该法简便,可靠,为有效控制川明参药材质量奠定了一定的基础。

补骨脂总香豆素对哮喘大鼠血清cGMP/cGMP的影响

目的观察补骨脂总香豆素对卵蛋白致敏哮喘大鼠血清cAMP/cGMP的影响,探讨其平喘作用机制与cAMP/cGMP相关性。方法哮喘实验动物模型采用卵蛋白过敏性哮喘大鼠;cAMP、cGMP的测定:采用酶联免疫法(ELISA法)。结果卵蛋白致敏哮喘大鼠血清cGMP含量无明显变化,而cAMP含量有降低的趋势;补骨脂各组对哮喘大鼠血清cGMP含量无明显影响,但明显提高哮喘大鼠血清cAMP含量,以补骨脂黑色粘稠物作用最为明显。哮喘大鼠血清cAMP/cGMP比值有降低的趋势,给总香豆素后,血清cAMP/cGMP比值明显增加,其中以补骨脂黑色粘稠物作用最为明显。结论补骨脂总香豆素抗哮喘炎症的作用机制之一,与调节cAMP、cGMP的含量及其比值变化有关。

响应面法优化藏药毛莲蒿总香豆素的超声辅助提取工艺

通过单因素实验法考察乙醇体积分数、浸提时间、浸提温度、料液比及超声时间对毛莲蒿总香豆素得率的影响,并通过Box-Behnken试验设计优化毛莲蒿总香豆素的超声辅助提取工艺.结果表明,毛莲蒿总香豆素的最佳提取工艺为乙醇体积分数72%,浸提时间71min,浸提温度68℃,料液比1∶58(g/mL)及超声时间30min,在该条件下毛莲蒿总香豆素的平均得率为3.45%.优化后的提取工艺方便、可行,可为毛莲蒿中总香豆素类化合物的提取提供参考.

响应曲面分析法优化川明参总香豆素超声辅助提取工艺

研究川明参总香豆素超声辅助醇提法的最佳工艺。通过单因素实验方法考察乙醇体积分数、超声温度、超声功率、超声时间和液料比对川明参总香豆素提取率的影响,并通过Box-Behnken响应面设计优化实验确定了超声波辅助乙醇提取川明参总香豆素的最优工艺。结果表明,川明参总香豆素超声辅助提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%,超声功率140W、超声时间49min、超声温度52℃、液料比9∶1。该工艺条件下,川明参总香豆素的平均提取率为(2.165±0.017)mg/g。所得川明参总香豆素提取回归模型高度显著(R2=0.9864),拟合性好,可用于预测川明参总香豆素提取率。

秦皮总香豆素不同提取工艺对比研究

目的考察不同提取工艺对秦皮总香豆素提取率及主要香豆素活性成分含量的影响,以确定其适宜的提取工艺。方法采用正交设计法,以综合指标秦皮总香豆素提取率为考察指标,分别以水和醇作为溶剂,对秦皮提取工艺进行优选。结果秦皮水提取最佳工艺:秦皮饮片加9倍量水,煎煮3次,每次煎煮1.5 h。水提取秦皮出膏率为28.87%,总香豆素含量为19.26%、提取率为5.56%,秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为13.47%。秦皮醇提取最佳工艺:秦皮饮片用8倍量75%乙醇回流2次,每次2 h。醇提取秦皮出膏率为30.47%,总香豆素含量为21.72%、提取率为6.62%,秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为15.29%。2种工艺对比,醇提取比水提取出膏率提高了5.54%,总香豆素含量提高了12.77%、提取率提高了19.06%,4种香豆素成分总含量提高了13.51%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论醇提取工艺各考察指标均优于水提取工艺,故应采用75%乙醇提取秦皮总香豆素,且工艺稳定。

对节白蜡叶中总香豆素提取工艺研究

目的通过正交设计优化对节白蜡叶中总香豆素提取工艺。方法以秦皮甲素为考察指标,通过单因素及L9(34)正交实验优选对节白蜡总香豆素的提取工艺。考察乙醇浓度、提取时间、提取次数、浸取温度对秦皮甲素含量的影响。结果最佳工艺条件为浸提时间1 h,浸提温度80℃,乙醇浓度60%,提取次数3次。该结果在验证实验中得到确认。结论正交设计优化提取工艺可较好地提取对节白蜡中香豆素类化合物。

总香豆素抗支气管哮喘气道变应性炎症的作用机制

目的:探讨总香豆素抗支气管哮喘气道变应性炎症的作用机制。方法:支气管哮喘气道变应性炎症动物模型采用卵白蛋白致敏哮喘大鼠;激发后d4起,正常组和哮喘模型组灌胃给予等量蒸馏水,补骨脂总香豆素组、补骨脂黑色黏稠物组和蛇床子总香豆素组分别按体重灌胃给药,剂量分别为23．3,25．0和20．0 g·kg^(-1),连续10d。末次给药后2h,各组动物心脏采血测定血清皮质醇(化学发光法)、cAMP/cGMP及IFN-γ/IL-4(ELISA法)。结果:哮喘模型组皮质醇含量明显下降,蛇床子总香豆素皮质醇含量明显提高,其他组变化不明显。哮喘模型组cGMP无明显变化,而cAMP有降低趋势;蛇床子总香豆素组cAMP和cGMP含量及比值明显提高,而补骨脂总香豆素组cGMP无明显变化,但cAMP和cAMP/cGMP比值明显提高。哮喘模型组IL-4明显增加,Th_1/Th_2有降低趋势,而IFN-γ无明显变化;补骨脂黑色黏稠物组IL-4明显降低,IFN-γ增加,且Th_1/Th_2比值增加。结论:总香豆素抗支气管哮喘气道变应性炎症的作用机制与其调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统有关,并通过调节cAMP/cGMP及Th_1/Th_2比值起作用。

蛇床子有效成分防治骨质疏松症的研究进展

概述近年来蛇床子有效成分防治骨质疏松症的实验研究进展。蛇床子的有效成分总香豆素以及其中的单体蛇床子素可对成骨细胞和破骨细胞的骨代谢进行调节,并对各种类型的骨质疏松模型具有一定的防治作用。

紫外分光光度法测定川白芷中总香豆素类成分的含量

目的 建立川白芷药材中总香豆素的含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法,测定波长30 0nm。结果 线性范围2 .2～11.0 μg·ml-1(r=0 .9999) ,回收率为10 1.32 % ,RSD =3.34% (n =6 )。结论 所用方法准确、快速、重复性好,可用于川白芷药材中总香豆素的测定。

蛇床子总香豆素止喘作用机理探讨

蛇床子总香豆素具有松驰由药物引起的支气管痉挛和直接扩张支气管的作用,这一作用均能被β-受体阻滞剂心得安所阻断。此外,蛇床子总香豆素对麻醉动物无加快心率和升高血压的作用。提示蛇床子总香豆素的解痉作用可能是通过兴奋β_2-受体所致。