水芹总酚酸体外抗HIV-1的作用

目的探讨水芹总酚酸体外抑制人类免疫缺陷病毒1型的作用。方法用不同稀释度的水芹总酚酸与TZM-bl细胞共同培养,使用MTT法检测活细胞的数量,观察水芹总酚酸对TZM-bl细胞的毒性作用;用人类免疫缺陷病毒1型实验室适应株SF33、BAL分别感染TZM-bl细胞,基于TZM-bl细胞的荧光素酶检测体系,采用荧光素酶活性检测方法检测水芹总酚酸抗人类免疫缺陷病毒1型的活性。结果水芹总酚酸对TZM-bl细胞表现出较低的细胞毒性,半数细胞毒浓度>1600μg·ml^(-1)。水芹总酚酸对TZM-bl细胞HIV-1 SF33、HIV-1 BAL病毒的半抑制浓度平均值分别为38.93和24.25μg·ml^(-1),治疗指数分别为>41和>66。结论水芹总酚酸在体外具有抑制人类免疫缺陷病毒1型复制活性的作用。

水芹总酚酸抗四氯化碳所致肝纤维化作用的实验研究

目的探讨水芹总酚酸对四氯化碳所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝和抗肝纤维化作用及其可能机制。方法采用四氯化碳复制慢性肝损伤动物模型(40%四氯化碳橄榄油溶液,皮下注射,首次剂量按0.5ml/100g,以后按0.3ml/100g体质量,3天1次,共42d)。自造模之日开始,灌胃给药,1次/d,连续42d。末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、ALP、TP、ChE、LDH)指标、肝纤维化指标(HA、LN、Ⅲ-C、Ⅳ-C)和肝组织中SOD活力与MDA含量及免疫组化法测α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达量和光镜下观察肝脏组织学变化。结果模型组大鼠有明显肝损伤和慢性纤维化表现;各给药组肝功能和肝纤维化均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻。结论水芹总酚酸对慢性肝纤维化大鼠具有明显的保肝和抗纤维化作用,其机制可能与清除自由基和抗氧化作用以及抑制肝星状细胞的活化有关。

水芹总酚酸对小鼠CCl_4肝损伤的保护作用

目的观察水芹总酚酸(OJTPA)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将180只小鼠随机分为正常组,联苯双酯阳性药物组,CCl4模型对照组和OJTPA高、中、低(500、250、125mg·kg-1)3个剂量组。应用0.1%CCl4腹腔注射致小鼠急性肝损伤模型,通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性以及小鼠肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,并观察肝脏组织病理学变化,对OJTPA的保肝作用进行研究。结果模型组小鼠肝功能明显异常,肝组织变性、坏死严重;OJTPA组能明显改善CCl4中毒小鼠肝功能,其降酶率(ALT)以高、中、低剂量分别为74.74%、55.87%、7.25%;肝组织切片镜检证实,OJTPA能减轻中毒小鼠肝细胞损伤程度。结论OJTPA对急性肝损伤小鼠有较好的保肝作用。

水芹总酚酸退黄作用的实验研究

目的观察水芹总酚酸(OJTPA)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致大鼠黄疸模型的退黄作用。方法将Wistar大鼠随机分为6组:正常组、ANIT模型对照组、茵栀黄颗粒阳性药物组、OJTPA高、中、低(300、150、75mg.kg-1)3个剂量组。各给药组连续给药7d,最后一次给药1h后,ANIT按75mg.kg-1体质量灌服大鼠诱发黄疸模型,正常组给等量的花生油。72h后取血取肝,检测血清总胆红素(T-Bil)含量以及肝组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,同时观察肝脏组织病理学的改变。结果模型组大鼠血清T-Bil含量及肝脏MDA含量明显升高(P<0.01),肝脏SOD活性明显降低(P<0.01);OJT-PA能明显对抗这种改变,其退黄率分别为58.12%、43.12%、22.19%。肝脏组织病理学检查证实,OJTPA能减轻中毒大鼠肝细胞损伤程度。结论OJTPA退黄效果肯定,其机制可能与抗脂质过氧化有关。

水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌HBsAg与HBeAg的抑制作用

目的观察水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制作用。方法以2.2.15细胞为研究对象,通过细胞毒性实验确定水芹总酚酸对细胞的最大无毒浓度(TC0),在最大无毒浓度以下将药物用培养液对倍稀释成500、250、125μg.mL-1加入2.2.15细胞进行培养,每4d换同浓度药物培养液;分别收集第4、8天以及停药后4d的培养液,酶联免疫法(ELISA)测定HBsAg、HBeAg含量。结果水芹总酚酸最大无毒浓度为500μg.mL-1,在最大无毒浓度时对HBsAg、HBeAg具有明显的抑制作用,第8天时的抑制率分别为59.33%和90%,半数抑制浓度(IC50)分别为484.17、379.89μg.mL-1,治疗指数(TI)分别为3.158、4.025,其中对HBeAg的抑制作用优于HBsAg。结论水芹总酚酸对2.2.15细胞分泌的HBsAg、HBeAg有显著的抑制作用。

水芹总酚酸对鸭乙肝病毒DNA的抑制作用

目的观察水芹总酚酸对鸭乙肝病毒(DHBV)DNA的抑制作用,验证其体内抗乙肝病毒作用。方法取造模成功雏鸭随机分成模型组、拉米夫定(50mg.kg-.1d-1)阳性药对照组、水芹总酚酸(125、250、500mg.kg-.1d-1)3个剂量组。自感染第7天灌胃给药,2次/d,共10d。分别留取感染第7天(0d)、给药5d、给药10d及停药3d的血清,斑点杂交、放射自显影测定血清中DHBV-DNA的OD值进行自身和组间比较;另取肝组织适量,10%甲醛固定,常规石蜡切片、HE染色,镜下观察肝组织病理变化。结果水芹总酚酸用药组在5d、10d和停药3d均对DHBV-DNA具有明显的抑制作用。病理学观察用药组鸭肝小叶结构基本完整,肝细胞变性改变明显较轻,点、灶状坏死散在分布;而模型组鸭肝实质细胞明显嗜酸性变、水肿、脂肪变等改变和弥漫分布的点、灶性坏死,表现为小叶周边肝细胞坏死广泛,界板参差不齐,浸润的炎细胞向小叶内延伸,两组肝组织比较差异显著。结论水芹总酚酸对乙肝病毒DNA具有显著的抑制作用,且具有较强的肝细胞保护作用。

水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响

目的探讨水芹总酚酸对正常小鼠免疫功能的影响。方法用分光光度法测定血清溶血素含量,MTT法检测T淋巴细胞增殖能力及ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-2的含量,碳粒廓清法测定小鼠外周血碳粒廓清指数。结果水芹总酚酸能够显著提高血清溶血素水平及脾细胞培养上清中IL-2水平,促进ConA诱导的T淋巴细胞增殖,提高正常小鼠外周血碳粒廓清指数。结论水芹总酚酸对正常小鼠的免疫功能具有增强作用。

水芹总酚酸对D-半乳糖胺盐酸盐诱导肝损伤的保护作用

目的观察水芹总酚酸(OJTPA)对D-半乳糖胺盐酸盐(D-Galn)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将小鼠随机分为生理氯化钠溶液(NS)组、D-Galn模型组、OJTPA低、中、高(125、250、500mg.kg-1)剂量组和阳性药联苯双酯(LB,150mg.kg-1)组,除NS组、D-Galn模型组给予与OJTPA高剂量同等剂量的NS外,给药各组均分别给药7d后,以D-Galn(800mg.kg-1)给各组小鼠(NS组除外)腹腔注射,使之中毒,造成急性肝损伤,24h后杀鼠取材,分别检测各组动物肝功能等指标并取肝脏作病理组织学检查。结果D-Galn模型组小鼠肝功能明显异常,ALT、AST显著升高,肝组织变性、坏死严重。OJTPA中、高剂量组小鼠血清中ALT、AST的水平均非常显著低于模型组(P<0.001),并呈良好的剂量依赖性;此外,还可显著降低肝损伤小鼠血清丙二醛的含量,显著升高其超氧化物歧化酶活力;肝组织镜检证实,OJTPA中、高剂量均能减轻中毒小鼠肝细胞损伤程度。结论OJTPA对D-Galn致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用。

水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞周期的影响

目的研究水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞增殖抑制及细胞周期的影响。方法用不同浓度的水芹总酚酸作用于体外培养的2.2.15细胞,采用MTT法检测水芹总酚酸对2.2.15细胞增殖抑制能力;倒置显微镜观察2.2.15细胞的形态学变化;流式细胞术检测水芹总酚酸对2.2.15细胞周期的影响。结果水芹总酚酸对2.2.15细胞增殖具有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性;流式细胞术检测表明水芹总酚酸作用于2.2.15细胞后,可将细胞阻滞在S期。结论水芹总酚酸对人肝癌2.2.15细胞具有明显的抑制增殖作用,可能与阻滞细胞周期有关。

水芹总酚酸胶囊质量控制方法的研究

目的初步建立水芹总酚酸胶囊的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对水芹总酚酸进行定性鉴别;采用Folin酚法测定水芹总酚酸含量;采用高效液相色谱法测定总酚酸中绿原酸含量,色谱条件:DiamonsilC18柱,流动相:A:乙腈-甲醇(10∶1);B:0.4%磷酸,梯度洗脱;检测波长:325nm;流速:1ml/min;柱温:25℃。结果按现有生产工艺,水芹总酚酸胶囊总酚酸含量最高为32.42%,绿原酸最高为9.3%。结论 Folin酚法和高效液相色谱法能精确测定水芹总酚酸胶囊中总酚酸和绿原酸含量,可作为水芹总酚酸胶囊的质量控制方法 。

水芹总酚酸对Fr.MuLV感染小鼠的抗病毒作用

目的观察水芹总酚酸对Friend鼠白血病病毒(Fr. MuLV)感染小鼠模型的作用。方法 Fr. MuLV病毒感染BALB/c小鼠造模,水芹总酚酸125、250、500mg·kg-1灌胃给药,每天1次,连续28d。末次给药后眼球取血,取脏器。计算小鼠脾指数和胸腺指数,ELISA试剂盒检测外周血CD_4^+、CD_8^+分子含量,RT-PCR方法检测脾脏病毒载量。结果水芹总酚酸250、500mg·kg-1组CD_4^+分子含量及CD_4^+/CD_8^+值明显提高,小鼠脾内Fr. MuLV降低,抑制率分别为46.95%和71.80%(P <0.05)。结论水芹总酚酸可改善小鼠的免疫抑制,降低脾内病毒载量。

水芹总酚酸体外抗HBV作用及其机制探讨

目的观察水芹总酚酸体外对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用并探讨其作用机制。方法水芹总酚酸对Hep AD38细胞的毒性实验分为水芹总酚酸组(细分为1600、800、400、200、100μg/mL浓度组)和空白对照组。体外培养Hep AD38细胞,用MTT法检测水芹总酚酸的毒性范围。水芹总酚酸体外抗HBV作用实验分为水芹总酚酸组(细分为200、100、50、25μg/mL浓度组)、阳性对照组[恩替卡韦(ETV)10μmol/L]和病毒对照组。用无毒浓度以下的水芹总酚酸药液处理Hep AD38细胞,连续6 d,收取上清和细胞,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测上清中HBsAg、HBeAg滴度;实时荧光定量PCR方法检测细胞内HBV DNA载量。水芹总酚酸对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA聚合酶的影响实验分为水芹总酚酸组(细分为400、200、100、50、25μg/mL浓度组)、阴性对照组和DHBV DNA聚合酶对照组。从感染鸭乙肝病毒的鸭肝中提取DHBV DNA聚合酶,分别给予不同浓度水芹总酚酸药液,采用ELISA法检测水芹总酚酸对DHBV DNA聚合酶活性的影响。结果水芹总酚酸对Hep AD38细胞的无毒浓度为400μg/mL。与病毒对照组比较,水芹总酚酸组中的200、100、50μg/mL浓度组的HBsAg、HBeAg滴度和HBV DNA载量均明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01);与DHBV DNA聚合酶对照组比较,水芹总酚酸组中的400、200、100μg/mL浓度组可抑制DHBV DNA聚合酶活性,差异有高度统计学意义(P<0.01)。结论水芹总酚酸体外具有良好的抗HBV作用,其作用机制包括抑制HBV DNA聚合酶的活性。

水芹总酚酸胶囊对Wistar大鼠的长期毒性研究

目的:观察连续灌胃给予水芹总酚酸对Wistar大鼠的长期毒性反应,评价其长期用药的安全性,为拟定临床剂量提供实验依据。方法:Wistar大鼠160只,根据性别、体重随机分为对照组和高(3000mg/kg)、中(1500mg/kg)、低(750mg/kg)剂量组,每组40只,雌雄各半。每周灌胃6天(每周日停1天),连续给药26周。停药后留取部分大鼠进行4周恢复性观察。不同时段检查大鼠的一般症状、体重变化、耗料量、血液学指标、血清生化学指标。动物剖检后,称重主要脏器并计算脏器系数,进行组织病理学检查。结果:与同期对照组比较,水芹总酚酸750m g/kg、1500m g/kg剂量组动物各项检查均未见明显异常,开始出现毒性剂量为3000 mg/kg,主要毒性表现为体重增长缓慢,血液学检查NE%升高和LY%降低,上述毒性反应均于停药后4周内恢复正常。结论:水芹总酚酸对Wistar大鼠的安全剂量为1500 mg/kg,开始出现毒性剂量为3000 mg/kg,主要表现为对体重和血液学指标的影响,毒性反应可逆且程度较轻,未见延迟性毒性反应,建议临床使用时定期进行血液学指标检测。