藤茶总黄酮对动脉粥样硬化大鼠血脂及血液流变学的影响

目的探讨藤茶总黄酮对动脉粥样硬化(AS)大鼠血脂、血液流变学指标的影响。方法给大鼠饲喂高脂饲料加腹腔注射维生素D3,复制AS模型,以藤茶总黄酮灌胃,24周后,观察藤茶总黄酮对模型大鼠血清血脂、血液流变学部分指标的影响。结果藤茶总黄酮可显著降低AS大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平,升高高密度脂蛋白(HDL)水平,差异均有统计学意义(P<0.05);显著降低AS大鼠全血黏度(高、中、低切)、血浆黏度、红细胞压积,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论藤茶总黄酮可改善AS大鼠血脂水平和血液流变学,对AS具有一定的防治作用。

藤茶总黄酮对小鼠的体内外抗氧化作用研究

目的：研究藤茶总黄酮（AGTF）的体内外抗氧化作用。方法：使用丙二醛（MDA）测定试剂盒测定AGTF对体内外MDA含量的影响；用分光光度法测定AGTF对H2O2诱导小鼠红细胞溶血和Fe^2＋-VitC诱导的肝线粒体肿胀度的抑制作用。结果：2.00mg·mL^-1 AGTF对脂肪氧合酶的粗酶活性抑制率超过50％；AGTF在0．5～10．0mg·mL^-1范围内，具有较强的体外抗活性氧能力，并能减少小鼠肝线粒体及肝匀浆MDA的生成，可抑制H2O2诱导的小鼠红细胞溶血和Fe^2＋-Vit C诱导的肝线粒体肿胀；腹腔注射AGTF对小鼠体内肝组织MDA生成的抑制作用显著。结论：AGTF具有较强的体内外抗氧化活性。

大孔吸附树脂—聚酰胺联用纯化茅岩莓总黄酮工艺优化

为纯化茅岩莓总黄酮,先用HPD-100型大孔吸附树脂(macroporous adsorption resin,MAR)层析柱进行初步纯化,再用聚酰胺(polyamide,PA)层析柱进行第2次纯化,得到的HPD-100型MAR最适宜吸附工艺参数为上样液总黄酮质量浓度6 mg/mL、上样流速1 mL/min、上样液体积130 mL,在此条件下吸附率为97.14%;最适宜解吸工艺参数为洗脱液乙醇体积分数70%、洗脱流速1 mL/min、洗脱液体积40 mL,在此条件下解吸率为94.10%。经HPD-100型MAR纯化后的总黄酮纯度从55.00%提高到了72.25%。PA的最适宜吸附工艺参数为上样液总黄酮质量浓度6 mg/mL、上样流速2 mL/min,在此条件下吸附率为99.57%;最适宜解吸工艺参数为洗脱液乙醇体积分数70%、洗脱流速1 mL/min、洗脱液体积55 mL,在此条件下解吸率为76.50%。经PA纯化后总黄酮纯度从72.25%提高到了80.75%。该方法为茅岩莓黄酮的纯化提供了一种更高效的方法,具有良好的应用前景。

响应面法优化藤茶总黄酮的提取工艺

目的优化超声波辅助乙醇提取藤茶总黄酮的工艺条件,提高藤茶总黄酮的提取效率。方法在单因素的基础上,应用Box-Behnken中心组合法进行4因素3水平的试验设计,研究乙醇浓度、超声波处理温度、超声波处理时间、液料比对总黄酮得率的影响。结果藤茶总黄酮的最优超声波辅助乙醇提取条件为:乙醇浓度67%(V:V),超声波处理温度58℃,超声波处理时间28 min,液料比22.5:1(V:m)。模型预测结果显示藤茶总黄酮得率最大为38.45%,经过验证,实际得率为38.74%,接近预测值,说明预测值和真实值之间有很好的拟合性,用响应面优化法得到的结果科学有效,有较高的参考价值。结论采用超声波辅助提取法,总黄酮得率高,用时少,具有很好的应用前景。

藤茶总黄酮的体外抗氧化作用研究

目的:研究藤荼总黄酮(AGTF)的体外抗氧化作用。方法:分别用铁氰化钾模型、脂肪氧合酶体系评价AGTF的还原能力与抑制脂肪氧合酶活性的能力,并测定AGTF对活性氧形成的影响,以及对H2O2诱导小鼠红细胞溶血的抑制作用。结果:AGTF具有较强的还原能力;2．00 mg·ml-1AGTF对脂肪氧合酶的粗酶活抑制率超过50％;AGTF在0．5-10.0 mg·ml-1范围内,具有较强的体外抗活性氧能力,并可抑制H2O2诱导的小鼠红细胞溶血。结论:AGTF具有较高的体外抗氧化性能。

微波辅助法提取藤茶黄酮工艺优化

[目的]提高藤茶中总黄酮提取率。[方法]以藤茶为原料,以水为溶剂,采用微波辅助提取的方式,研究了浸提温度、浸提时间、微波辅助加热时间、微波加热功率4个单因素对藤茶总黄酮提取率的影响,并在单因素的基础上进行正交试验得到藤茶总黄酮提取的最佳工艺条件。[结果]在100℃的温度下浸提时间60 min,中高档微波加热120 s的条件下,藤茶总黄酮的得率最高。[结论]优化微波辅助法工艺能提高藤茶黄酮提取率。

利川市藤茶黄酮成分研究

从湖北省利川市齐岳山(海拔1 500~1 600 m)采集藤茶(Ampelopsis grossedentata)样品,采用60%乙醇超声提取总黄酮,利用紫外可见光分光光度计双波长(λ=208.4 nm,λ=293.2 nm)检测藤茶幼嫩茎尖总黄酮,平均含量高达453.67±11.26 mg/g;利用硅胶柱色谱及半制备高效液相分离到3个化合物,利用LC-HR-ESIMS、1D和2D NMR波谱数据进行分析,鉴定其结构分别为二氢杨梅素(1)、杨梅素(2)和花旗松素(3);通过高效液相(HPLC)检测分析发现,利川市藤茶样品中二氢杨梅素、杨梅素和花旗松素的含量为别186.31±10.43、13.83±1.32、14.76±2.26 mg/g。

藤茶总黄酮检测方法的对比研究

本文对比研究了直接测定法、硝酸铝-亚硝酸钠-氢氧化钠比色法、三氯化铝比色法、差示分光光度法测定藤茶样品中总黄酮含量的准确性,并对方法的精密度、重复性、稳定性、加标回收率以及白砂糖、β-环糊精、羧甲基纤维素钠、果葡糖浆和焦糖色素对方法的干扰进行测定,最终用高效液相色谱法对结果进行验证。结果表明,以二氢杨梅素为对照品,在没有干扰物质的条件下,差示分光光度法最适合藤茶总黄酮的测定;该方法的精密度、重复性、稳定性和加标回收率的相对标准偏差(RSD)值分别为0.19%、2.26%、1.67%和100.97±1.63%。单独或者复合加入不同浓度的干扰物质,均对4种方法的检测结果造成明显的干扰。在复合干扰物存在时,直接测定法所测总黄酮含量最接近高效液相色谱法的测定结果。

藤茶总黄酮调节C2C12细胞胰岛素抵抗的作用和机制研究

目的:观察藤茶总黄酮对棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖利用的影响,并从IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通路探讨其作用机制。方法:用含2%马血清的高糖培养基(DMEM)培养小鼠C2C12成肌细胞,诱导为成熟的肌管细胞后,用0.5 mmol/L棕榈酸诱导培养16 h建立细胞胰岛素抵抗模型。用CCK-8法测定不同浓度的藤茶总黄酮(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、50μg/mL、80μg/mL)对C2C12细胞活性的影响,并确定后续实验的藤茶总黄酮高、中、低剂量。将C2C12细胞诱导成熟的肌管细胞分为正常组(NC)、高糖模型组(DM)和藤茶总黄酮高、中、低剂量组(AGH、AGM、AGL),检测各组细胞的葡萄糖消耗量,用Western Blotting法检测藤茶总黄酮对IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号转导通的蛋白表达的影响。结果:藤茶总黄酮浓度在50μg/mL时,细胞成活率最高。据C2C12细胞活性检测,得到用于后续细胞实验的藤茶总黄酮高、中、低浓度分别为80μg/mL、50μg/mL、30μg/mL。藤茶总黄酮高、中、低剂量组葡萄糖消耗量与高糖模型组比较显著增加(P<0.01)。藤茶总黄酮高、中剂量组显著提升IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路的蛋白表达(P<0.01)。结论:藤茶总黄酮可改善C2C12细胞葡萄糖消耗量从而改善胰岛素抵抗,其作用机制可能通过调节IRS-1/PI3K p85/AKT/GLUT4信号通路实现。

藤茶总黄酮提取工艺优化与抗氧化活性物质基础研究

本文建立测定藤茶中总黄酮含量的紫外分光光度法,并对藤茶的水提工艺进行优化,在此基础上,研究藤茶的抗氧化活性物质基础。结果表明,直接测定法操作简便、快速、结果准确,可适用于藤茶总黄酮含量测定。采用传统浸提法,得到藤茶水提最佳工艺条件为料液比1∶40,提取2.0 h,提取2次。通过DPPH法对不同提取物自由基清除能力进行研究,发现藤茶水提物对DPPH自由基清除能力的强弱与黄酮含量呈正相关性。藤茶中主要的4种黄酮类单体化合物均有较强的清除作用,对DPPH自由基清除能力随着浓度的增加而增强,对DPPH自由基清除能力强弱为杨梅素>槲皮素>二氢杨梅素>维生素C>橙皮素。

藤茶黄酮对高脂大鼠的降血脂作用研究

为了探讨藤茶对细胞内源性胆固醇生物合成的影响以及对高脂血症大鼠的降血脂效果,采用乙醇提取藤茶黄酮(TFAG),用两性霉素B-细胞模型检测其对细胞内胆固醇合成的影响;通过喂食高脂饲料建立SD高脂大鼠模型,以血脂康为阳性对照,连续灌胃不同剂量的TFAG30d,测心、肝组织匀浆和血清中的各项指标;取部分肝脏进行病理学观察.结果表明:TFAG能明显抑制细胞内胆固醇的合成,不同剂量的TFAG能明显降低高脂大鼠血清中的TC、TG含量,增加HDL的含量;对心、肝组织中的TC、TG也有明显降低作用;能提高高脂大鼠肝脏中SOD、CAT和GSH的含量,降低MDA的含量.病理切片结果显示,TFAG能改善高脂大鼠模型肝细胞的受损程度,其中高剂量组的效果与血脂康组相当.总体而言,TFAG具有较好的抗氧化和降血脂效果,并能有效抑制肝脏脂肪变性.

显齿蛇葡萄叶代用茶总黄酮以二氢杨梅素计的试验验证

自然界中许多植物都含有天然黄酮类物质,但植物各异,其总黄酮含量及主要黄酮单体成分也各不相同。对显齿蛇葡萄叶代用茶总黄酮是否应以二氢杨梅素计进行了试验验证。结果表明:显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶或藤茶)中不含或极少含芦丁,其总黄酮单体成分主要是二氢杨梅素,从而论证显齿蛇葡萄叶代用茶(即莓茶或藤茶)中总黄酮以二氢杨梅素计。通过分析检测莓茶或藤茶中总黄酮(以二氢杨梅素计)含量高达300-400 g/kg,其中,二氢杨梅素单体含量高达200-300 g/kg,二氢杨梅素含量占总黄酮70%-80%。

茅岩莓叶及叶柄中总黄酮含量测定

为比较茅岩莓叶及叶柄中总黄酮含量,采用乙醇超声法提取茅岩莓叶及叶柄中的总黄酮,并以芦丁为对照品,采用可见分光光度法测定总黄酮的含量。结果表明,茅岩莓叶柄、叶中总黄酮含量分别为5.53,11.03 mg/g,茅岩莓叶中的总黄酮含量比叶柄高,使用时应区别对待。

广西藤茶总黄酮对金黄色葡萄球菌抗菌机制研究

目的:研究广西藤茶总黄酮(TF)抗金黄色葡萄球菌(SA)作用机制,从而初步明确其作用靶位。方法:使用不同终质量浓度TF(310～38.75 mg.L-1)处理SA,另设不经药物处理的SA为对照,采用扫描电镜法观察155 mg.L-1TF对菌体的超微形态结构,微生物粘着碳氢化合物法测定155 mg.L-1TF对菌体表面疏水性,电导率法测定77.5,155,310 mg.L-1TF对菌体通透性及比色法测定38.75,77.5,155,310 mg.L-1TF对细菌脱氢酶活性的影响。结果:随着药物浓度增加,作用时间延长,细菌菌体超微形态有明显改变,表现为菌体表面粗糙不平,产生瘤状突起,细胞间界限模糊不清,细胞直径变大等;与不经药物处理的SA比较,TF作用SA 4,8,16 h后,能明显降低细菌细胞表面疏水性(P<0.01);明显增加细菌细胞通透性;明显抑制细菌脱氢酶的活性。结论:广西藤茶总黄酮可能通过降低细菌表面疏水性,增加细菌通透性使细菌形态发生改变,并通过抑制细菌脱氢酶活性发挥抗菌作用。

藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞作用研究

目的:研究藤茶总黄酮体外抗人肝癌细胞的作用。方法:以MTT法、细胞生长曲线法、集落形成法观察藤茶提取物对人肝癌BEL7404细胞的体外抑制作用。结果:藤茶总黄酮能显著抑制体外培养的BEL7404细胞的生长。MTT法测得的半数抑制浓度(IC50)为28·59μg·mL-1;细胞生长曲线法提示藤茶总黄酮对BEL7404细胞的生长有显著的抑制作用;集落形成法提示当药物浓度在22·22μg·mL-1以上时IC50为100%,当药物浓度在14·81μg·mL-1时IC50为58·05%。结论:藤茶总黄酮对体外培养的BEL7404细胞有显著的抑制作用。

栽培藤茶中功能性成分动态变化

目的:考察不同采摘时期的两年生栽培藤茶中几种功能性成分多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量动态变化。方法:以蒸馏水为溶剂恒温(90℃)回流提取栽培藤茶中的功能性成分;以苯酚-硫酸比色法、三氯化铝比色法分别在紫外-可见分光光度仪490,318 nm下测定不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮的含量;采用Dikma ODS C18色谱柱,以甲醇/乙腈(5∶11)-0.1%磷酸水溶液(80∶20)为流动相,流速1 mL·min-1,在HPLC色谱仪紫外检测波长为292,370 nm处分别对二氢杨梅素和杨梅素进行含量测定,柱温为40℃。结果:不同采摘时期的两年生栽培藤茶中多糖、总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量差别比较明显,其中多糖以8,9月份含量最高,分别为2.46%和2.41%;总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素的含量均是4月份达到最高,分别为8.74%,4.69%,0.18%。结论:本实验所建立的测定不同采摘时期栽培藤茶中4种功能性成分含量变化的分析方法可行,结果可靠,能明确栽培藤茶中这4种功能性成分含量达到最高的最佳采收时期。

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L^(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L^(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L^(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L^(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。

显齿蛇葡萄总黄酮降血糖作用研究

目的研究显齿蛇葡萄总黄酮(TFAG)降血糖的效果及其抗氧化能力。方法体外测定利用超声波辅助提取并经D-101大孔树脂纯化得到的TFAG对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的影响;体内降血糖实验采用链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠糖尿病模型,TFAG不同剂量(100、200、400 mg·kg^(-1))连续给药15 d,分别于灌胃0、3、6、9、12、15 d时尾部动脉取血测定血糖,在给药后16 d时,以眼眶采血测定血清胰岛素含量及各项生化指标,并取胰腺组织做HE染色观察,另外取肝脏测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)的含量。结果 TFAG能抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性,且TFAG对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较对α-淀粉酶的抑制作用要强。体内实验表明,TFAG能显著降低糖尿病小鼠的血糖、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的浓度,增加胰岛素、高密度脂蛋白(HDL)的浓度;HE染色结果显示,TFAG对糖尿病小鼠胰岛细胞具有一定的修复作用;TFAG能使肝组织中MDA的含量明显下降,而SOD、CAT的活性显著升高。结论 TFAG具有显著的降血糖作用和抗氧化能力,能修复胰岛细胞,是一种极具开发价值的药食兼用原材料。

基于分子对接技术的藤茶总黄酮对高尿酸血症肾功能损伤保护机制研究

目的探讨藤茶总黄酮(total flavonoids from Ampelopsis grossedentata,AGTF)对高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)肾功能损伤的保护机制。方法利用分子对接技术,将藤茶总黄酮主要活性成分与HUA相关靶点蛋白尿酸重吸收转运体1(uric acid reabsorption transporter 1,URAT1)、葡萄糖转运蛋白9(glucose transporter 9,GLUT9)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate binding cassette transporter G2,ABCG2)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)和腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)进行分子对接。采用腺嘌呤联合乙胺丁醇复合方法制备HUA肾功能损伤大鼠模型,以AGTF进行干预,检测大鼠血清中尿酸代谢酶XOD和ADA活性、尿酸以及肾功能生化指标肌酐和尿素氮的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理变化;Western blotting法检测大鼠肾组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)蛋白的表达;免疫组化法检测大鼠肾组织中URAT1、GLUT9和ABCG2蛋白的表达。结果分子对接结果表明,AGTF主要活性成分二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素和藤茶素与疾病相关靶点对接得分均较高,提示AGTF可能通过干预URAT1、GLUT9、ABCG2、ADA和XOD发挥抗HUA肾功能损伤的作用。AGTF能显著降低HUA肾功能损伤模型大鼠血清中XOD和ADA的活性以及尿酸、肌酐、尿素氮的水平(P<0.05、0.01)。HE染色结果显示,AGTF能缓解模型大鼠肾小球基底膜增厚,减轻肾小管排列紊乱及坏死,抑制病变区域内纤维组织增生。Westernblotting和免疫组化结果显示,AGTF能显著降低大鼠肾组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β蛋白和尿酸盐重吸收相关蛋白URAT1、GLUT9的表达(P<0.05、0.01),显著升高尿酸盐排泄相关蛋白ABCG2的表达(P<0.05、0.01)。结论 AGTF对HUA肾功能损伤大鼠具有较好的保护作用,其作用机制可能与降低TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β表达,抑制炎症反应,并调节尿酸盐转运蛋白URAT1、GLUT9和ABCG2的表达,促进尿酸代谢有关,与分子对接预测结果一致。

基于多层次交互网络和体内实验探讨藤茶总黄酮抗痛风性关节炎的作用机制

基于网络药理学预测分析藤茶总黄酮(total flavonoids from Ampelopsis grossedentata,AGTF)防治痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)的作用机制,并进行实验验证。利用相关数据库,结合文献资料,筛选出AGTF的主要活性成分、作用靶点及疾病靶点,并分别构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络和“药物-关键成分-潜在靶点-核心通路”网络,预测AGTF抗GA潜在的作用靶点和机制。通过建立高尿酸血症(hyperuricemia, HUA)合并GA大鼠模型,对大鼠的步态行为评分,观察踝关节肿胀度;检测大鼠血清中尿酸(uric acid, UA)水平和黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XOD)活性,以及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;采用免疫组化法测定大鼠踝关节滑膜组织中Toll样受体-4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的蛋白表达。网络药理学筛选出AGTF有效活性成分10个,AGTF抗GA的候选靶点73个;KEGG富集显著的信号通路86条,其中与AGTF抗GA密切相关的通路有TNF信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路及嘌呤代谢等。动物实验结果显示,AGTF能有效改善GA大鼠异常步态行为、缓解踝关节炎症反应、降低踝关节肿胀度;同时,AGTF能显著降低UA水平,抑制XOD活性,减少TNF-α、IL-6和IL-1β含量,下调踝关节滑膜组织TLR4、MyD88和NF-κB的表达(P<0.05,P<0.01)。网络药理学预测与验证实验结果相吻合,均表明AGTF通过调控尿酸代谢、改善尿酸水平异常、减少炎症因子释放、调节免疫及炎症TLR4/MyD88/NF-κB通路等多途径综合发挥防治GA的药效作用。