维药新塔花中总黄酮纯化工艺研究

以新疆特有的芳香新塔花为研究对象,通过用大孔树脂对提取的总黄酮进行吸附与解吸,对大孔树脂进行筛选,确定比较理想的大孔树脂。采用吸附率最大和解析率最大的大孔树脂对芳香新塔花总黄酮其他纯化工艺参数进行考察,包括上样浓度、大孔树脂梯度洗脱、径高比、上样液流速的影响。最佳纯化工艺为:大孔树脂型号为HPD-600,上样液浓度为4.70mg/mL,径高比为1∶10,上样液流速为0.5mL/min,洗脱时合并30%vol、50%vol、70%vol的乙醇洗脱液。

芳香新塔花总黄酮的HPLC指纹图谱研究及化学模式识别分析

目的建立芳香新塔花总黄酮的HPLC指纹图谱,为芳香新塔花总黄酮的质量评价提供参考。方法通过HPLC法对15批不同时期采收的芳香新塔花中提取的芳香新塔花总黄酮进行色谱分析,对色谱结果进行相似度分析、聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,最终对15批芳香新塔花总黄酮的质量进行综合评价。结果建立了芳香新塔花总黄酮的HPLC指纹图谱,确定了14个共有峰并指认了其中4个色谱峰。CPR分析结果表明15批样品综合质量高低依次为S9>S15>S4>S5>S14>S10>S11>S12>S2>S13>S3>S6>S8>S1>S7,包括蒙花苷和芦丁在内的5个成分是造成不同批次样品差异性的主要标志物。结论所建立的HPLC指纹图谱方法稳定、准确性好,可用于芳香新塔花总黄酮的鉴定和质量评价。

HPLC法同时测定新疆唇香草总黄酮提取物中3种黄酮类成分的含量

建立了同时测定新疆唇香草总黄酮提取物中3种黄酮类成分(木犀草苷、芦丁、芹菜苷)含量的HPLC法。色谱条件:依利特Hypersil ODS-2(C18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),甲醇-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长360 nm,柱温35℃,流速1 mL·min-1。结果表明,木犀草苷、芦丁、芹菜苷质量分别在4.4~44.0μg(R=0.9998)、4.4~44.0μg(R=1.0000)、4.0~80.0μg(R=0.9998)内与峰面积线性关系良好,平均加标回收率分别为99.99%、99.12%、99.74%,RSD分别为1.72%、2.07%、2.41%。该方法简便、快速、准确、可靠、重现性好,可用于唇香草总黄酮提取物的质量评价与控制。

维药唇香草总黄酮微波提取工艺研究

目的优选唇香草总黄酮的最佳提取工艺。方法以唇香草总黄酮的提取率为指标,采用正交设计法优选唇香草总黄酮微波提取工艺。结果唇香草总黄酮微波最佳提取工艺为,提取功率800 W,提取时间45min,提取温度80℃,测得唇香草中总黄酮的含量为5.53%。结论微波提取唇香草总黄酮工艺经济、合理,工艺条件可行。

芳香新塔花总黄酮调控PI3K/Akt/mTOR通路改善动脉粥样硬化的作用机制研究

观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠自噬和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,探讨芳香新塔花总黄酮抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。ApoE^(-/-)小鼠喂食高脂饲料8周,建立体内AS实验模型,随机分为5组(模型组、阳性对照组及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组),普通饲料喂食C57BL/6J小鼠设为空白组。灌胃给药12周后取出血清和主动脉,全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;油红O染色法观察小鼠主动脉斑块面积;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉斑块及病理变化;免疫荧光法检测主动脉中P62、LC3的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠主动脉中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果显示,与空白组相比,模型组小鼠血清中TC、TG、LDL-C、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9含量明显升高(P<0.01或P<0.05),HDL-C含量明显降低(P<0.05),主动脉内斑块面积显著增加(P<0.01),主动脉中LC3的表达量明显下调,P62的表达量明显上升(P<0.01或P<0.05),主动脉裂解液中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的表达量明显下调,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62的表达明显上升(P<0.01);芳香新塔花总黄酮中、高剂量组较模型组显示均显著降低血清中TC、TG、LDL-C、ICAM-1、VCAM-1、MMP-2、MMP-9水平(P<0.01或P<0.05),增加HDL-C含量(P<0.01或P<0.05);主动脉斑块面积显著减小(P<0.01),且泡沫细胞的含量减少,管腔的狭窄程度减弱;芳香新塔花总黄酮各剂量组较模型组显示,明显增加主动脉中LC3和裂解液中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1表达量,降低主动脉中P62和裂解液中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62表达水平(P<0.01或P<0.05)。结果表明,芳香新塔花总黄酮可改善血脂和炎症因子含量,减少主动脉组织中泡沫细胞和斑块的生成,其机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

芳香新塔花总黄酮对ApoE^(-/-)小鼠主动脉TLR4/NF-κB表达及炎症水平的影响

目的:观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块及炎症反应的影响及其机制研究。方法:50只健康雄性ApoE小鼠给予高脂饲料,以构建AS模型,随机分成5组并灌胃给药:模型对照组、阿托伐他汀3 mg/kg组、芳香新塔花总黄酮25、50、100 mg/kg组;10只同周龄同性别的健康C57BL/6J小鼠设为正常对照组给予普通饲料,灌胃给予等体积生理盐水。在第12 w末解剖小鼠,取出血清和主动脉血管,经苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉粥样硬化病变;油红O染色观察小鼠主动脉内壁斑块面积;全自动生化仪检测小鼠血清中血脂总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6含量;Western Blot检测主动脉Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白变化。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,HDL-C含量显著降低(P<0.01);主动脉中TLR4、NF-κB蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,芳香新塔花总黄酮50、100 mg/kg组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低,HDL-C含量显著升高,主动脉TLR4、NF-κB蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。芳香新塔花总黄酮各剂量组泡沫细胞浸润和内膜下组织斑块明显减少。结论:芳香新塔花总黄酮对ApoE小鼠的AS具有较好的治疗作用,其机制与抑制炎症及TLR4/NF-κB通路有关。

芳香新塔花总黄酮抗氧化活性研究

以芳香新塔花为试材,采用Al Cl3比色法测定芳香新塔花总黄酮含量,并通过DPPH自由基(DPPH·)法、羟基自由基(·OH)法和测定还原能力的方法评价其抗氧化能力。结果表明:芦丁在0.009 6~0.033 6 mg·m L-1范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为99.78%(RSD为1.30%),芳香新塔花中总黄酮含量为40 mg·g-1;芳香新塔花总黄酮对DPPH·、·OH的清除作用及其还原力在同等条件下与维生素C相比较弱,且在试验浓度范围内抗氧化能力和浓度存在良好的量效关系,可见芳香新塔花总黄酮具有良好的体外抗氧化活性。