荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠lncRNAs、mRNAs表达的影响和生物学功能分析

目的基于高通量测序技术探讨荔枝核总黄酮(TFL)对肝纤维化大鼠差异lncRNAs、mRNAs表达的影响及其生物学功能分析。方法2021年4—7月于广西中医药大学实验动物中心进行实验,建立肝纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为对照组(Control,n=6)、模型组(Model,n=7)和荔枝核总黄酮组(TFL,n=7),TFL组大鼠给予TFL 50 mg·kg-1·d-1干预6周。采用HE和Masson染色观察肝脏组织纤维化改变,ELISA法测定血清透明质酸酶(HA)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ),RNA-seq高通量测序技术筛选Model和TFL组差异表达lncRNAs和mRNAs,cis方式预测差异表达lncRNAs靶基因,GO和KEGG对各差异表达lncRNAs靶基因和mRNAs进行生物学功能富集分析。结果纤维化评分比较,Model组>TFL组>Control组(F=14.420,P<0.001),大鼠血清HA、LN、Ⅳ-C和PCⅢ水平比较,Model组>TFL组>Control组(F=47.055、74.655、177.328、54.445,P均<0.001)。共筛选出Model组与TFL组差异表达lncRNAs 73个(上调43个,下调30个),Model组与TFL组差异表达mRNAs 261个(上调150个,下调111个),采用cis方式共预测到Model与TFL组24个靶基因;差异表达lncRNAs靶基因和mRNAs的生物学富集功能分析显示TFL通过参与昼夜节律、谷胱甘肽代谢泛醌、戊糖磷酸途径等信号通路发挥抗肝纤维化的作用。结论TFL能够明显改善大鼠纤维化组织病理学形态,降低血清HA、Ⅳ-C、LN、PC-Ⅲ含量,其作用机制可能与调控特定差异lncRNAs和mRNAs表达,参与昼夜节律、谷胱甘肽代谢泛醌、戊糖磷酸途径等信号通路有关。

基于MAPK信号通路探讨荔枝核总黄酮对HSC-T6细胞的作用

目的观察荔枝核总黄酮对HSC-T6细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨荔枝核总黄酮是否可通过调控MAPK信号通路影响肝纤维化的进程。方法设置荔枝核总黄酮20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL组和细胞对照组、空白组,CCK-8法检测各组细胞吸光度,计算细胞增殖抑制率,选择最佳的荔枝核总黄酮浓度进行后续实验。后续实验设置荔枝核总黄酮组、秋水仙碱组、细胞对照组及空白组,加入相应培养基培养24 h、48 h、72 h后,CCK-8法检测各组细胞吸光度,计算细胞增殖抑制率;各组细胞培养72 h后,透射电镜观察细胞的超微结构,ELISA法检测细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)水平,RT-PCR法检测细胞中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38 mRNA表达情况,免疫组化法检测细胞中JNK、ERK、p38蛋白及其相应磷酸化蛋白(p-JNK、p-ERK、p-p38)表达情况。结果荔枝核总黄酮的最佳实验浓度为160μg/mL,最佳干预时间为72 h;与细胞对照组比较,荔枝核总黄酮组和秋水仙碱组培养24 h、48 h、72 h后的吸光度均明显降低(P均<0.05)。培养72 h后,荔枝核总黄酮组细胞之间间隙变大,细胞膜四周纤毛脱落,细胞浆内线粒体嵴断裂或消失,部分线粒体呈空泡状,粗面内质网扁池扩张,附着的核糖体脱粒,细胞核内染色质浓缩凝结,部分染色质边聚,核膜皱缩,可见凋亡小体形成;荔枝核总黄酮组、秋水仙碱组MMP-2、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平均明显低于细胞对照组(P均<0.05),秋水仙碱组MMP-2水平明显低于荔枝核总黄酮组(P<0.05);荔枝核总黄酮组JNK、ERK、P38 mRNA相对表达量和p-JNK、p-ERK、p-P38蛋白相对表达量均明显低于细胞对照组(P均<0.05),与秋水仙碱组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论荔枝核总黄酮具有抗肝纤维化的生物学效应,其作用机制可能与调控MAPK信号通路相关。

酸荔枝核黄酮体外抗氧化作用的研究

为探讨酸荔枝核总黄酮的提取工艺及体外抗氧化作用。采用正交试验乙醇热浸的方法考察提取溶剂浓度、提取时间、料液比等因素对酸荔枝核总黄酮提取率的影响。结果以液固比20∶1,提取时间30min,乙醇体积百分数为95%vol这3个因素为最佳。酸荔枝核中总黄酮对DPPH和氧自由基这2种自由基有很好的清除作用以及还原能力。

荔枝核总黄酮对大鼠肝纤维化转化生长因子-β_1受体和胶原的影响

目的观察荔枝核总黄酮(TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化的防治效果,并探讨其可能机制。方法 90只SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、TFL大剂量组、TFL中剂量组和TFL小剂量组,每组15只。除正常对照组外,腹腔注射0.5%DMN 2 mL·kg^(-1)4周,制作大鼠肝纤维化模型。造模当日开始给药,正常对照组及模型对照组灌胃0.9%氯化钠溶液5 mL·kg^(-1),TFL大、中、小剂量组分别灌胃TFL 200,100,50 mg·kg^(-1),秋水仙碱组灌胃秋水仙碱0.1 mg·kg^(-1),各组每日给药1次,共6周。至实验第6周末处死大鼠,取肝脏同一部位行苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察大鼠病理改变及肝纤维化程度;采用免疫组化法和蛋白质印迹法(Western blotting)检测转化生长因子β-Ⅰ/Ⅱ型受体(TβRⅠ/Ⅱ)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠肝纤维半定量评分和TβRⅠ、TβRⅡ、ColⅠ和ColⅢ蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,TFL大、中、小剂量组TβRⅠ、TβRⅡ、ColⅠ和ColⅢ蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);肝纤维半定量评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),且具有一定量效关系。结论 TFL可抑制DMN诱导的大鼠肝纤维化形成,其机制可能与下调促肝纤维化因子TGF-β_1受体TβRⅠ/Ⅱ的表达,抑制肝星状细胞的增殖与活化,降低胶原含量,从而发挥抗肝纤维化的作用有关。

荔枝和荔枝核及其有效部位的药理及药效学作用

综述近3年荔枝和荔枝核及其有效部位的药理及药效学的研究进展。研究表明荔枝和荔枝核及其有效部位具有降血糖、调血脂、抗氧化、抑制病毒、抗肿瘤及抗肝损伤等药理及药效学作用。其中,黄酮类化合物可抑制病毒和抗肿瘤,总皂苷能抑制病毒活性并降血糖、调血脂和增强胰岛素敏感性,黄酮类、总皂苷类和多糖化合物均具有抗氧化作用,多糖能提高免疫功能。荔枝叶、果壳、核仁和果肉含有黄酮类、酚酸类、皂苷类和多糖等多种具有生物活性的成分,应加以综合开发应用。

超声波微波双辅助提取荔枝壳总黄酮工艺优化

以购自泸州市合江县的荔枝(Litchi chinensis)壳为原料,为了优化超声波微波双辅助提取荔枝壳总黄酮工艺,以总黄酮得率为评价指标,在单因素试验基础上,采用正交试验优化提取工艺。结果表明,采用超声波微波双辅助提取荔枝壳总黄酮的最佳工艺条件为,以60%乙醇作提取剂、料液比为1∶30(m/V,g∶mL)、超声波提取时间为40 min、微波辐射时间为30 s、微波功率为500 W、微波间歇辐射2次,在此工艺条件下,总黄酮得率为38.59 mg/g。

微波法提取荔枝核黄酮的工艺研究

为了优化微波法提取荔枝核黄酮的最佳工艺条件,本试验采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定荔枝核中总黄酮的含量,利用单因素试验和正交试验对微波法提取荔枝核黄酮的工艺进行系统研究。提取荔枝核黄酮的最佳工艺条件为:提取时间3.0min,提取功率850W,料液比1∶20,提取溶剂70%乙醇。该工艺合理、简单、可行,试验结果能为荔枝核黄酮的开发利用提供依据。

荔枝核总黄酮联合紫杉醇对前列腺癌耐药细胞的增殖抑制作用

目的探讨荔枝核总黄酮(Total flavonoids of litchi seed,TFLS)是否增强前列腺癌紫杉醇耐药细胞(Prostate cancer paclitaxel resistance cells,PCa-Txr)对紫杉醇(Paclitaxel,PTX)的敏感性,以及TFLS与PTX联合应用是否具有协同抑制作用。方法采用CCK-8法检测TFLS和PTX对PCa-Txr细胞及亲本细胞的增殖抑制作用;采用低细胞毒性剂量TFLS提前处理或与PTX同时作用PCa-Txr细胞来观察细胞对PTX敏感性;采用Chou T C推荐的联合方案来观察TFLS与PTX联合应用对PCa-Txr细胞的增殖抑制作用,并依据联合指数(Combination index,CI)判断TFLS与PTX联合应用对PCa-Txr细胞是否具有协同抑制作用。结果TFLS抑制PCa-Txr细胞及亲本细胞的增殖,并呈现时间和剂量依赖性。TFLS提前处理或与PTX同时作用PCa-Txr细胞均未能增加耐药细胞对PTX的敏感性。TFLS联合PTX明显抑制PCa-Txr细胞活性,CI值小于1,两药联合应用存在协同作用。结论TFLS抑制PCa-Txr细胞的增殖,TFLS联合PTX协同地抑制PCa-Txr细胞,但TFLS未能增加PCa-Txr细胞对PTX的敏感性。

不同产地苍术种子中总黄酮和多酚的含量测定及比较

分别以芦丁和没食子酸为标准品,采用NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)-NaOH和Folin-Ciocalteu分光光度计法,首次测定和比较了两个产地来源的苍术种子中总黄酮和多酚的含量.结果表明:两个产地之间的总黄酮、多酚含量相近,但是同一产地中的多酚含量显著高于总黄酮含量.苍术在陕西植物资源丰富,具有广阔的发展前景,本实验为苍术的进一步开发利用提供了重要的科学依据.

荔枝核醇提工艺优化以及抗氧化作用研究

目的:以总黄酮得率为评价指标,研究从镇隆荔枝核醇提条件的最佳工艺,并研究其抗氧化作用。方法:以本地特产镇隆荔枝核作为提取总黄酮的原料,以提取时间、温度、料液比、乙醇体积分数以及微波超声功率为考察因素,进行L16(45)正交试验得出最佳提取条件;应用DPPH法检测提取所得总黄酮的抗氧化作用。结果:研究表明荔枝核醇提的最佳条件是以50%乙醇溶液为提取溶剂,温度为50℃、料液比例为1:30,超声功率为600W提取40min。各因素对总黄酮得率的影响大小依次为:超声功率>提取时间>乙醇体积分数>提取温度>料液比例;所得的荔枝核总黄酮在浓度0~50μg·mL^-1范围内抗氧化作用明显。结论:经优化后的醇提取工艺可以提高镇隆荔枝核总黄酮的得率,且其抗氧化作用明显。

荔枝核总黄酮对大鼠HSC-T6差异表达蛋白的筛选及生物信息学分析

目的通过数据非依赖采集(DIA)技术筛选荔枝核总黄酮(TFL)对大鼠肝星形细胞T6细胞株(HSC-T6)的差异表达蛋白,并进行对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析。方法大鼠随机分为模型对照组和TFL实验组,分别给予相应干预后取大鼠的血清。药物和含药血清干预肝星形细胞后,提取细胞蛋白,通过DDA谱图库结合DIA技术的方法检测模型对照组和TFL实验组的差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果共鉴定出差异蛋白177个,其中显著下调蛋白共93个,上调蛋白共84个,主要参与了众多与细胞转录、复制、增殖相关的信号通路。结论TFL可能通过调控多个蛋白,参与翻译后修饰、转录、重组和信号传导等多种复杂的信号通路,从而促进肝星状细胞凋亡,达到抗肝纤维化的作用。