天山堇菜中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

目的从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,并测定其含量。方法运用微波技术提取天山堇菜总黄酮和多糖,用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果测得天山堇菜中总黄酮含量为1.465%,平均回收率为98.05%,RSD为1.74%(n=5);多糖含量为8.478%,平均回收率为99.86%,RSD为1.58%(n=5)。结论运用微波技术从天山堇菜中提取总黄酮和多糖,反应速度快,效率高。

天山堇菜中总黄酮的提取工艺研究

目的以天山堇菜总黄酮含量为考察指标,优化天山堇菜总黄酮提取工艺。方法以亚硝酸钠比色法检测天山堇菜中黄酮含量,采取正交试验对影响因素进行优化,考察总黄酮的提取影响因素。结果天山堇菜最佳提取工艺条件为料液比1∶15,提取时间60min,乙醇浓度70%,提取温度90℃。结论该方法准确,简便,可作为天山堇菜总黄酮提取工艺条件。

天山堇菜总黄酮抗甲型流感病毒的作用研究

目的考察天山堇菜总黄酮提取物(TSMF)体内外抗甲型流感病毒的作用。方法①体外实验:采用细胞病变效应(CPE)评分法,考察天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72感染犬肾细胞(MDCK)引起细胞病变的影响。②体内实验:采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/H1N1/PR/8/34感染的小鼠模型,观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的生命延长率、死亡保护率、肺指数和肺匀浆中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)的含量,以及对血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IFN-γ、IL-10含量的影响,以HE染色法观察天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠肺组织病理变化的影响。结果①体外实验中,与病毒对照组比较,天山堇菜总黄酮对流感病毒株A/H1N1/京防/262/95、A/H3N2/济防/15/90、A/H3N2/粤防/243/72引起的MDCK细胞病变均有一定的抑制作用,其选择指数(SI)值分别为:4.7、9.5、16.8。②体内实验中,与模型组比较,天山堇菜总黄酮中、高剂量组的小鼠死亡率显著降低(P <0.05),存活时间明显延长(P <0.01),其生命延长率分别为48.6%、51.2%;中、高剂量组小鼠的肺指数明显降低(P <0.05,P <0.01),抑制率分别为20.8%、27.6%;天山堇菜总黄酮各剂量组肺匀浆中的IL-1β及血清中的TNF-α水平明显降低(P <0.05,P <0.01),肺匀浆中IL-10水平明显升高(P <0.01);天山堇菜总黄酮中、高剂量组肺匀浆及血清中的IFN-γ水平均明显降低(P <0.05,P <0.01),高剂量组的血清IL-10水平明显升高(P <0.05)。此外,天山堇菜总黄酮对流感病毒感染小鼠的肺组织病理损伤具有明显改善作用。结论天山堇菜总黄酮具有较好的抗流感病毒作用,还能够调控炎性细胞因子的分泌,从而减轻流感病毒感染小鼠的肺部炎症。

天山堇菜总黄酮抗菌、抗炎、解热、镇咳作用研究

目的考察天山堇菜总黄酮的抗菌、抗炎、解热、镇咳作用。方法采用体外倍比稀释法及体内建立小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌感染模型来考察天山堇菜总黄酮的体内外抗菌作用;采用小鼠耳廓肿胀模型和腹腔毛细血管通透性升高模型考察其抗炎作用;通过干酵母诱导的大鼠发热模型考察其解热作用;采用氨水引咳法观察其镇咳作用。结果天山堇菜总黄酮对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)值分别为1.95、3.90 mg/mL,对大肠埃希菌的MIC、MBC值分别为0.49、0.98 mg/mL。天山堇菜总黄酮在0.32 g/kg对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌小鼠感染模型具有显著的保护作用,其保护率分别为30%、40%。天山堇菜总黄酮在0.16、0.32 g/kg可显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀,在0.08、0.16、0.32 g/kg可显著抑制冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管炎性渗出;天山堇菜总黄酮在0.14、0.28 g/kg对干酵母致大鼠发热具有较好的抑制作用。天山堇菜总黄酮对氨水引咳具有显著的抑制作用,在0.32 g/kg时抑制率为57.7%。结论天山堇菜总黄酮提取物具有较好的抗菌、抗炎、解热及镇咳药理活性,其作用机制有待于进一步研究。

大孔吸附树脂纯化天山堇菜中总黄酮的工艺研究

目的以天山堇菜总黄酮含量为考察指标,研究大孔吸附树脂分离纯化天山堇菜总黄酮工艺。方法以亚硝酸钠比色法检测天山堇菜中总黄酮含量,用大孔吸附树脂及柱层析法,考察总黄酮分离纯化的影响因素。结果AB-8型大孔吸附树脂是纯化天山堇菜总黄酮的最佳大孔吸附树脂。最佳工艺参数为上柱液浓度0.0667mg·mL^-1,洗脱剂为60%乙醇,最大上样体积为13BV,解吸液体积用量为10BV。结论该方法操作简单,有效,可作为天山堇菜总黄酮纯化的工艺条件。

天山堇菜总黄酮的提取工艺及抗氧化活性研究

探讨天山堇菜中总黄酮提取的最佳工艺条件。采用正交实验,对影响天山堇菜中总黄酮的提取因素进行研究。同时,本实验还研究了天山堇菜总黄酮对羟自由基(·OH)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除能力。结果表明,天山堇菜总黄酮提取的最佳工艺条件为:以50%乙醇为提取溶剂,提取时间为30min,提取温度为60℃,提取3次,此时总黄酮的含量为2.233%。天山堇菜中的总黄酮对·OH和DPPH·均有清除作用,浓度增大其抗氧化能力也随之增强。

天山堇菜总黄酮抗炎和免疫调节作用研究

目的:考察天山堇菜总黄酮提取物抗炎和免疫调节作用。方法:采用脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型,Griess法检测NO分泌水平,DCFH探针法检测活性氧(ROS)的含量,ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,以及采用酶学实验检测天山堇菜总黄酮对环氧酶(COX)以及5-脂氧酶(5-LO)的抑制活性来考察天山堇菜总黄酮的抗炎作用;通过MTS法及ELISA法检测天山堇菜总黄酮对静息期淋巴细胞的影响,对刀豆蛋白(ConA)、LPS分别诱导小鼠T、B淋巴细胞增殖,以及对T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ的影响来考察天山堇菜总黄酮提取物的免疫调节作用。结果:在LPS诱导的RAW264.7炎症模型中,与空白对照组比较,LPS模型对照组NO、TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及活性氧ROS水平显著升高(P<0.01),与LPS模型对照组比较,天山堇菜总黄酮在0.78μg/mL~12.5μg/mL均能明显降低LPS致RAW 264.7分泌炎症介质NO和促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平(P<0.05或P<0.01),在3.12μg/mL~12.5μg/mL可显著降低活性氧ROS水平(P<0.01);天山堇菜总黄酮对COX-1、COX-2具有显著的抑制活性,IC_(50)分别为:13.5μg/mL, 0.73μg/mL,对5-LO也具有一定的抑制活性,其IC_(50)为334.3μg/mL;此外,天山堇菜总黄酮在6.25μg/mL~50μg/mL能显著促进静息期脾淋巴细胞增殖(P<0.01)。在T、B淋巴细胞增殖实验中,与空白对照组比较,ConA模型对照组、LPS模型对照组分别能显著促进小鼠T、B淋巴细胞增殖(P<0.01),与模型对照组比较,天山堇菜总黄酮在6.25μg/mL~200μg/mL对ConA、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖具有明显拮抗作用(P<0.05或P<0.01),在12.5μg/mL~200μg/mL明显抑制T淋巴细胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ(P<0.05或P<0.01)。结论:天山堇菜总黄酮具有较好的抗炎活性并且具有双向免疫调节作用,其机制有待进一步研究。

天山堇菜总黄酮抗流感病毒作用及机制研究

目的研究天山堇菜总黄酮(TFVM)的体内外抗流感病毒作用及其机制。方法体外实验采用细胞病变效应(CPE)法观察TFVM对流感病毒A/FM/1/1947(H1N1)致犬肾细胞(MDCK)病变的影响;设置细胞对照组,病毒感染组,阳性药金刚烷胺(AH)对照药组(10μmol/L),TFVM 100、50、25μg/mL 3个浓度组,以H1N1分别感染MDCK和人髓系白血病单核细胞(THP-1),Western Blot法检测基质蛋白2(M2)、非结构蛋白(NS1)蛋白表达,检测THP-1细胞中p65蛋白表达及核转位;鸡血球细胞凝集实验检测TFVM对血凝素(HA)的抑制作用,荧光法检测神经氨酸酶(NA)活性。体内实验将小鼠随机分为病毒感染对照组,阳性药达菲(11.375 mg/kg)组,TFVM高、低剂量(0.4、0.2 g/kg)组,以流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠建立病毒性肺炎模型,取小鼠肺组织研磨液接种MDCK细胞,CPE法观察对小鼠肺组织病毒增殖量的影响;qRT-PCR检测M2蛋白及肺组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、干扰素诱导蛋白10 (IP-10)mRNA表达水平。结果 TFVM明显抑制流感病毒致MDCK细胞病变,其IC50为79.1μg/mL;其100μg/mL浓度对MDCK和THP-1细胞中流感病毒M2、NS1蛋白表达均有明显抑制作用;TFVM还可抑制THP-1细胞内p65蛋白表达及其核转位。TFVM对流感病毒的两个膜蛋白NA和HA功能无明显影响;TFVM以0.2、0.4 g/kg剂量给药可明显降低流感病毒感染小鼠肺组织内病毒载量(P<0.05,P<0.01),并降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IP-10 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),在一定程度上能降低M2 mRNA表达水平(P>0.05)。结论 TFVM在体内外均有明显的抗流感病毒作用,其机制可能是通过抑制M2蛋白和NS1蛋白表达而直接抑制流感病毒的复制;还可能通过抑制宿主细胞内p65蛋白表达及其核转位,从而干预NF-κB信号通路下游炎症因子的表达,发挥间接抗病毒作用。