野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响

目的研究野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能以及滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC大、中、小剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)对照组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;运用免疫荧光法检测各组滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白的表达。结果TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TRAIL在模型组大鼠滑膜组织中的表达明显低于正常组;TFC各剂量组可上调TRAIL的过低表达,而TNF-α的检测结果与之相反。结论以TNF-α为参照,TRAIL参与AA大鼠的发病过程,TFC可上调TRAIL蛋白的过低表达,这可能是其治疗AA的机制之一。

基于NLRP3-IL-1β-NF-κB信号轴研究野菊花总黄酮对脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响

目的探究野菊花总黄酮(TFC)对脂多糖(LPS)诱导HK-2细胞炎性反应及自噬的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,将细胞分为阴性对照(Control)组、LPS处理(LPS)组、TFC预处理(TFC)组、NLRP3激活预处理(4-MET)组、TFC联合4-MET预处理(TFC+4-MET)组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Hoechst 33342染色观察各组细胞形态变化;免疫印迹法检测各组细胞核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(Asc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、p-IκB、IκB、自噬相关蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、蛋白表达情况;ELISA法检测细胞中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;透射电镜观察细胞自噬情况。结果与Control组相比,LPS组细胞增殖率降低,细胞核破碎情况加重,细胞凋亡率升高,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。与LPS组相比,TFC组细胞增殖率升高,细胞核破碎减轻,细胞凋亡率降低,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达降低、IκB蛋白磷酸化水平降低,IL-1β、IL-18水平降低,细胞自噬程度增加,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达升高;4-MET组细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高,细胞核破碎情况加重,NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达升高、IκB蛋白磷酸化水平升高,IL-1β、IL-18水平升高,细胞自噬程度降低,LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达降低(P<0.05)。TFC+4-MET组细胞增殖率、细胞自噬程度、LC3Ⅱ/Ⅰ水平、Beclin-1蛋白表达高于4-MET组,细胞核破碎情况减轻,细胞凋亡率、NLRP3、Asc、caspase-1蛋白表达、IκB蛋白磷酸化、IL-1β、IL-18水平低于4-MET组(P<0.05)。结论野菊花总黄酮可能通过抑制NLRP3-IL-1β-NF-κB信号通路活化,进而抑制脂多糖诱导HK-2细胞炎性反应,诱导细胞自噬。

野菊花总黄酮-PLGA缓释微球的制备及其工艺优化

目的:制备野菊花总黄酮(TFC)-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球,并对制备工艺进行优化。方法:采用复乳溶剂挥发法制备TFC-PLGA微球,观察初乳搅拌速度、聚乙烯醇(PVA)浓度和TFC与PLGA的投药比等不同因素对微球包封率(EE)的影响。显微镜观察微球大体形态;扫描电镜(SEM)观察微球表面形态和粒径大小;紫外分光光度法测量微球EE及其体外释放结果。结果:在搅拌速度为3 000r·min-1、PVA浓度为3.0%、TFC与PLGA投药比为1∶15的优化条件下,TFC-PLGA微球平均EE为(45.03±1.25)%,平均粒径大小为(102.20±1.97)μm。体外释放实验,24h时微球累积释放率为22.07%,20d时累积释放率达92.32%,TFC-PLGA微球具有明显的缓释效果。结论:采用优化的制备工艺可以制备出粒径适宜、分散较均匀、EE较高的TFC-PLGA缓释微球。

HPLC-DAD同时测定野菊不同部位8种活性成分的含量

目的建立同时测定中药野菊不同部位(花、叶、嫩茎、老茎)中绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素含量的高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)方法。方法采用Thermo Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35℃,检测波长327 nm。结果绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素进样量分别在0.031~0.620μg、0.009~0.180μg、0.016~0.320μg、0.081~1.620μg、0.021~0.420μg、0.011~0.220μg、0.152~3.040μg、0.017~0.340μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9999,0.9998,0.9997,0.9996,0.9995,0.9996,0.9997,0.9998。绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-O-β-D-葡糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷、蒙花苷和木犀草素的平均加样回收率分别为98.29%,99.09%,99.03%,98.88%,99.22%,99.02%,98.38%,99.02%,RSD(n=6)分别为1.40%,1.05%,0.98%,1.18%,0.98%,0.91%,0.89%,1.26%。结论本法操作简便,准确性和重复性好,可用于中药野菊的质量控制,测定结果显示野菊不同部位有机酸和黄酮类活性成分含量差异较大。

野菊花总黄酮对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用

目的观察野菊花总黄酮(TFC)对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用及部分机制。方法用TFC(125、250、500 mg/kg)连续给小鼠灌胃4后,腹腔注射0.1%CCl4(10ml/kg)致小鼠急性肝损伤模型,测定不同剂量的TFC对肝损伤血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性、肝匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响;并通过放射免疫分析法测定肝匀浆中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNFα-)的表达量;同时对肝组织进行病理学检查。结果TFC能降低CCl4致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST值的升高,降低肝匀浆中MDA含量,增强SOD的活性,TNFα-表达降低,减轻CCl4对肝组织的病理损伤。结论TFC对CCl4致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能主要与清除自由基、抑制脂质过氧化作用、抑制TNFα-表达有关。

大孔树脂纯化野菊花总黄酮的工艺研究

目的研究大孔树脂吸附法纯化野菊花总黄酮的工艺条件。方法用树脂静态、动态吸附解吸实验法,以总黄酮吸附率、解吸率等为考察指标。结果用LX-60树脂纯化野菊花总黄酮的最佳工艺为上样质量浓度1.6 mg/mL,上样体积流量2 BV/h,最大上样量48 mg/g干树脂,洗脱溶剂为90%乙醇,洗脱体积流量2 BV/h,洗脱溶剂用量为4 BV。结论该方法对野菊花总黄酮具有良好的富集作用。

野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

目的研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理。方法SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片。结果MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体。结论TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响

目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制。方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多苷片100mg/kg。组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达。结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达。结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一。

中药野菊花的药理作用研究进展

野菊花是常用的中草药，具有清热解毒、疏风平肝等功效。现代药理学研究表明其具有抗微生物、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、保肝、神经保护、保护心血管、抗血小板聚集等多种作用，且具有高效、低毒的特点，有较好的临床应用价值和研发潜力。本文综述了野菊花的化学成分，国内外对野菊花提取物、主要化学成分总黄酮和挥发油的药理作用，野菊花毒理等方面的进展情况，为野菊花的开发提供理论依据。

DM130型大孔树脂分离纯化野菊花总黄酮的工艺研究

目的研究大孔吸附树脂从野菊花提取液中分离纯化总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮回收率为指标,采用静态和动态试验考察大孔吸附树脂对野菊花总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果 DM130型大孔吸附树脂对野菊花总黄酮的最佳纯化工艺条件为:上柱样品溶液总黄酮质量浓度为2.78mg/mL,pH 3～4,以80%(体积分数)乙醇洗脱,洗脱流速为2 mL/min,洗脱剂用量为5倍柱体积。总黄酮的回收率为79.19%,纯度为37.31%。结论经过优化的工艺稳定可行,DM130型大孔吸附树脂能较好地分离纯化野菊花总黄酮。

野菊花总黄酮对乳腺癌细胞增殖、凋亡、转移、侵袭及细胞周期的影响

目的:探讨野菊花总黄酮对人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、转移、侵袭、细胞周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养MCF-7和MDA-MB-231细胞,分为对照组和不同浓度野菊花总黄酮组。显微镜观察细胞形态;CCK-8法评价细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭能力;AnnexinV-FITC/PI双染法及Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Bax、P53 mRNA表达;Western Blot法检测β-catenin、E-cadherin蛋白表达。结果:野菊花总黄酮处理MCF-7、MDA-MB-231细胞后,细胞发生缩小、变形、解体;CCK-8结果显示,野菊花总黄酮对MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用呈一定的浓度和时间依赖性,24 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(42.17±0.59)、(35.01±0.83)μg/mL;划痕实验显示,野菊花总黄酮可显著降低MCF-7、MDA-MB-231细胞的迁移率(P<0.01);Transwell实验显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞侵袭率显著降低(P<0.01);AnnexinV/PI双染结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞的早期凋亡率升高,且Hoechst染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核裂解;流式结果显示,野菊花总黄酮使MCF-7、MDA-MB-231细胞阻滞在S期和G_(2)期;Real-time PCR结果显示,经野菊花总黄酮处理后的MCF-7和MDA-MB-231细胞的Bax、P53 mRNA表达显著升高(P<0.01);Western Blot实验显示,野菊花总黄酮可下调MCF-7、MDA-MB-231细胞β-catenin蛋白表达(P<0.01),而对E-cadherin蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:野菊花总黄酮在体外能抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及促进凋亡相关基因Bax、P53的表达有关,与EMT进程无明显关系。

野菊花总黄酮提取工艺的响应面设计优化

目的优化野菊花总黄酮提取工艺。方法在分析单因素的基础上,以总黄酮得率为响应值,采用响应面实验设计方法(RSD)对其提取工艺进行研究。结果最佳工艺参数为乙醇浓度56.6%,提取温度80℃,液固比为19.6,提取时间为3.2 h,提取1次,该工艺条件可使总黄酮得率达4.64%。结论该工艺条件可为工业生产提供参考数据。响应面试验设计法可在连续范围内进行分析,优于现在普遍采用的只能分析离散条件的正交实验设计。

野菊花总黄酮体外对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

目的探讨野菊花总黄酮(TFC)体外对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响。方法采用AA大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外给药培养,并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果TFC能提高AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2水平,对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1水平具有抑制作用。结论TFC对AA大鼠免疫功能具有明显的调节作用。

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用

目的:研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用,探讨TFC治疗AA的可能机制。方法:SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC高、中、低剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;原位末端标记检测(TUNEL)法观察滑膜组织中滑膜细胞的凋亡改变;流式细胞仪检测体外培养滑膜细胞的凋亡变化。结果:AA大鼠滑膜细胞出现凋亡抑制,增殖过度的类瘤样细胞特征,TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TFC(168,336 mg.kg-1)治疗组大鼠滑膜细胞的凋亡率较模型组显著升高。结论:TFC可抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的机制之一。

白簕消炎喷雾剂的研制

[目的]研制白簕消炎喷雾剂,为开发利用白簕资源提供依据。[方法]分别提取白簕、野菊花、车前草中的黄酮,通过正交试验检测3种物质提取物的混合杀菌效果,研制一种具有快速消炎、镇痛、杀菌等作用的喷雾剂。[结果]白簕、野菊花、车前草中的总黄酮含量分别为:3.54%、3.41%、3.45%。配方为40 mg/ml白簕提取物、30 mg/ml野菊花提取物、2 mg/ml车前草提取物的喷雾剂0.5 h后的杀菌效果较好,但仍剩余43.3%的菌体,1.0 h后的杀菌效果最好,适合作外用药。配方为60 mg/ml白簕提取物、60 mg/ml野菊花提取物、4 mg/ml车前草提取物的喷雾剂3.0 h后的杀菌效果较好,有效抑制了细菌再生,仅剩余16.7%的菌体。[结论]利用白簕、野菊花和车前草的黄酮提取物,可制成绝佳的消炎杀菌喷雾剂。

野菊茎叶根黄酮的超声波提取及生物活性研究

目的提取野菊茎叶根中的黄酮,测试其抗氧化活性和抗菌活性,为野菊非用药部位的综合利用提供依据。方法对野菊茎叶根粉末脱除色素后超声波辅助提取野菊茎叶根中的黄酮,NaNO_(2)-Al(NO_(3))_(3)-NaOH比色法测定黄酮的提取量。以黄酮提取量为评价指标,考察乙醇浓度、料液比、超声时间、超声功率等单因素对野菊茎叶根黄酮提取的影响,设计L_(9)(3^(4))正交实验优化其黄酮提取工艺。以Vc为参照,用DPPH·法、邻二氮菲-Fe^(2+)氧化法及普鲁士蓝法测试其黄酮的抗氧化活性,滤纸片扩散法和二倍浓度稀释法测试抗菌活性。结果超声波辅助提取野菊茎叶根黄酮的最佳工艺条件为乙醇浓度65%、料液比1∶40(g/mL)、超声时间45 min、超声功率360 W,此时其黄酮提取量为3.68 g/100g,其黄酮对DPPH·、·OH有清除作用且有总还原能力,浓度在0.25 mg/mL时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为(9.53±0.24)mm,对5个菌株的MIC值在0.04~2.50 mg/mL之间,MBC值在0.16~5.00 mg/mL之间,对实验菌株有抑制和灭活作用。结论可用超声波辅助法提取野菊茎叶根中的黄酮,其黄酮有抗氧化活性和抗菌活性。

正交试验结合抗菌活性实验优选野菊花的提取工艺

目的通过正交试验结合抗菌活性实验研究野菊花的最佳提取工艺。方法以野菊花总黄酮量、浸出物总量以及抑菌活性为评价指标,采用L16(45)进行正交试验,考察因素包括料液比、乙醇体积分数、提取温度、提取时间,和p H值。结果从金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌和黄曲霉的最低抑菌浓度计分看,野菊花的最佳醇提工艺为加入8倍量50%乙醇后调整p H至9,在80℃下回流提取4 h。结论本方法结合抗菌活性提取野菊花黄酮类成分的工艺比仅考虑化学成分的工艺更合理。

广西产磨盘草药材中总黄酮的含量测定

目的:建立磨盘草药材总黄酮的含量测定方法。方法:50%乙醇回流提取1h,以芦丁为对照品,采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量。结果:本法在60min内测定稳定,芦丁的线性方程:Y=11.323X-0.0139,相关系数r=0.9997(n=6),平均加样回收率为98.47%(n=6),RSD=1.29%。结论:该方法简便、准确、稳定性好,可作为磨盘草药材的质量控制方法。

磨盘草不同营养器官中总黄酮和总酚含量测定

分别以芦丁和没食子酸为对照品,测定了磨盘草不同营养器官(根、茎、叶)中总黄酮和总酚的含量。结果表明,磨盘草叶、茎、根中总黄酮含量分别为1.96%、1.20%、0.78%,总酚含量分别为8.61%、6.03%、4.31%。

超声提取野菊花总黄酮及其抑菌活性的研究

以野菊花中总黄酮含量作为考察指标,用正交实验法优化野菊花总黄酮超声提取工艺,并考察超声波法对总黄酮抑菌活性的影响。结果表明,野菊花总黄酮的最佳提取工艺为:在超声功率200 W条件下,用12倍量45%的乙醇提取15 min。此时野菊花总黄酮的得率达到2.86%。该工艺简单可行、重现性好,且超声波对总黄酮抑菌活性没有影响,适用于工业化生产。