The Mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides and Cornus Polysaccharide on Myocardial Protection in Rats with Acute Myocardial Infarction

Objective: To investigate effects of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) and Cornus Polysaccharide (CP) on myocardial protection and on expression of mitochondria biogenesis related gene of acute myocardial infarction (AMI) rats, Materials and Methods: Ninety-six SD rats of SPF level were randomly divided into 5 groups: sham operation group, model group, preventive treatment group, COTG treatment group, CP treatment group, and there were 12 cases in each one. By legating the left anterior descending branch of coronary artery method, acute myocardial infarction model was established. The rat of sham operation group and model group was intragastric administered with physiological saline;other groups were given with corresponding drugs. The cardiac function, the myocardial infarct area, the expression of mitochondrial biogenesis genes such as PGC-1α, PGC-1β, NRF-1mRNA and GSK-3β mRNA, GSK-3β Protein Expression were analyzed. Results: The results revealed that compared with model group, myocardial infarction size, LVDs, LVDd, LVESV, LVEDP, and -dp/dt decreased;LVSP increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05);LVEDV increased in preventive treatment group (p < 0.05), PGC 1 alpha, and PGC 1 beta;the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with CP and COTG treatment group, PGClpha, beta PGC 1, the NRF-1 mRNA expression increased in preventive treatment group (p < 0.05). Compared with the sham operation group, GSK-3 beta mRNA and protein expression increased in model group, preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p < 0.05). Compared with model group, GSK-3 beta mRNA expression reduced in preventive treatment group, COTG treatment group, and CP treatment group (p Cornus officinalis total glycosides and Cornus polysaccharides can effectively protect myocardial mitochondria of acute myocardial infarction rats by activating GSK-3β signaling pathways, and reduce the myocardial infarct size, which has great significance for improving cardiac function.

Effects of Cornus Officinal Is Total Glycoside on Cardiomyocyte Apoptosis and Calcium Overload after Hypoxia/Reoxygenation Injury in Rats

Objective: To investigate the mechanism of Cornus officinalis Total Glycosides (COTG) on myocardial protection, by studying effects of COTG on cardiomyocyte apoptosis induced by hypoxia/reoxygenation and calcium concentration in rats. Methods: The myocardial cells of born 1-3d SD rats were isolated by enzyme digestion, cultured for 3 days. Cells were divided into five groups: Control group, H/R group, Cornus officinalis Total Glycosides low-dose group (LDG), Cornus officinalis Total Glycosides middle-dose group (MDG) and Cornus officinalis Total Glycosides high-dose group (HDG). Three drug groups were pretreated with different doses of Cornus officinalis Total Glycosides before hypoxia/reoxygenation treatment. The apoptotic rate was determined by flow cytometry assay, the intracellular free calcium concentration was examined by flow cytometry, and the ultrastructure of myocardial cells was observed under transmission electron microscope. Results: The results revealed that Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment decreased apoptosis rate, but the effect of lower dosage is not significant. Furthermore, Cornus officinalis Total Glycosides can attenuate mitochondrial calcium overload, improve mitochondrial morphology and inhibit cardiomyocyte apoptosis caused by H/R. Conclusion: Cornus officinalis Total Glycosides pretreatment can inhibit cardiomyocyte apoptosis and calcium overload during H/R injury. However, the underlying mechanisms require us to further study.

山茱萸环烯醚萜苷对延缓大鼠脑动脉瘤进展的影响

目的 探讨山茱萸环烯醚萜苷(CLG)通过Ras同源基因家族蛋白(Rho)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶(Rock)信号通路对大鼠动脉瘤进展的影响。方法 选取50只雄性大鼠建立脑动脉瘤(CA)模型,48只造模成功大鼠随机分为模型组、CLG低剂量、中剂量和高剂量组(各12只),未造模大鼠取12只为对照组。CLG低剂量、中剂量和高剂量组灌胃100、150、200 mg·kg^(-1)的CLG溶液(蒸馏水配制),连续30 d,对照组及模型组给予等量蒸馏水。检测各组大鼠血压变化;ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察脑组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠脑组织Rho、Rock2 mRNA和蛋白表达情况。结果 与模型组比较,3组大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压、TNF-α、IL-1、IL-6、Rho、Rock2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),与CLG低剂量组比较,CLG中剂量、高剂量组诸项指标水平降低(P<0.05),与CLG中剂量组比较,CLG高剂量组诸项指标水平降低(P<0.05)。结论 CLG可调节CA大鼠血压水平、降低炎性因子水平,在一定程度上抑制动脉瘤样扩张,可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。

RP-HPLC法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量

目的建立反相高效液相色谱法测定山茱萸环烯醚萜总苷中马钱苷和莫诺苷含量的方法，为完善山茱萸环烯醚萜总苷的质量评价提供依据。方法色谱柱：Lichrosphere C18柱（4．6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-水梯度洗脱（0～12min，乙腈比例由10％增加到55％）；流速1.0mL／min；柱温30℃；检测波长240nm。结果马钱苷和莫诺苷分别在o．088-0．528μg（r=0.9998）和0.088-0．352μg（r=0．9995）之间范围内线性关系良好；平均回收率（n=6）分别为98．7％（RSD=1．3％）、98．6％（RSD=0.8％）。结论所建立的方法简便、准确、分离效果好、重复性好。可以用干控制山菜萤环烯醚萜总菩的席号．

山茱萸环烯醚萜苷对血栓形成和凝血功能的影响

目的观察山茱萸环烯醚萜苷(comel iridoid glycoside,CIG)对血栓形成和凝血功能的影响。方法大鼠灌胃给予不同剂量的CIG(20,60,180 mg·kg^(-1)),连续7 d,于末次给药后1h建立动-静脉旁路形成模型,测量血栓干重和湿重;并进行体外血栓形成实验,测定血栓长度、干重和湿重。取新西兰兔抗凝血,分离血浆,加入不同剂量CIG(10,20,40 mg·mL^(-1)),测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)。结果CIG各剂量能明显抑制动-静脉旁路实验大鼠血栓形成,减轻血栓干重和湿重;缩短体外血栓实验大鼠血栓长度,减轻其干重和湿重。CIG可明显延长TT,中、大剂量组与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01);延长PT,大剂量组与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01);延长APTT,各剂量组与生理盐水组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论CIG具有抑制血栓形成和抗凝血的作用,为CIG用于防治缺血性血管疾病提供实验依据。

山茱萸总苷抗类风湿关节炎免疫作用机理的初步研究

目的 :探讨山茱萸总苷抗Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的类风湿关节炎的免疫作用机理。方法 :建立Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎 (CIA)大鼠模型 ,对山茱萸总苷对大鼠在免疫诱导期、关节炎急性期、慢性缓解期血清中CⅡ抗体的水平、腹股沟引流淋巴结细胞IFN γ的自发分泌和刺激性分泌以及淋巴结细胞的特异增殖能力的影响进行动态观察。结果 :山茱萸总苷对类风湿关节炎有明显的防治作用 ,特异性抑制免疫大鼠抗CⅡ抗体的产生、腹股沟淋巴结Th1型细胞因子IFN γ的分泌及细胞增殖。结论 :山茱萸总苷抗类风湿关节炎的免疫作用机理之一是抑制CⅡ特异性体液免疫和Th1型细胞免疫。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺

目的:优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的制备工艺,并对其进行表征。方法:采用逆相蒸发法制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体。采用高效液相色谱法测定山茱萸总环烯醚萜苷脂质体中马钱苷和莫诺苷含量。以总皂苷(以马钱苷和莫诺苷总和计)包封率为指标,通过单因素试验筛选制备山茱萸总环烯醚萜苷脂质体的主要工艺因素后,采用星点设计-效应面法优化药物与磷脂的质量比(药脂比)、胆固醇与磷脂的质量比(胆脂比)和水合介质pH值。利用达尔文激光粒径测定仪测定最优处方下所制脂质体的Zeta电位和粒径,并在透射电镜下观察其形态。结果:确定最优处方的药脂比为0.026、胆脂比为0.107、水合介质pH为5.78。所制3批脂质体的平均包封率为11.63%(n=3),与预测值11.48%的相对误差为1.29%;平均粒径为(80.87±0.27)nm,Zeta电位为(-13.60±5.32)mV,脂质体外观呈球形或类球形。结论:优化后山茱萸总环烯醚萜苷脂质体制备工艺简单,所制脂质体粒径较小。

山茱萸总苷对刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤的保护作用

目的:观察山茱萸总苷(TGCO)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将60只C57BL小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组,每组10只;正常组和模型组以0.2 mL/10 g生理盐水灌胃,阳性对照组给予联苯双酯150 mg/kg灌胃,TGCOH组、TGCOM组、TGCOL组给予TGCO溶液460、230、115 mg/kg灌胃,1次/d,连续14 d。末次给药后2 h,正常组尾静脉注射生理盐水,其余各组尾静脉注射Con A制备小鼠免疫性肝损伤模型。8 h后称重,处死小鼠,计算各组小鼠肝、脾系数并取肝组织进行HE染色观察病理学变化;检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC)含量。结果:与模型组比较,各浓度TGCO组小鼠肝组织的病变程度较轻,血清ALT、AST水平及肝组织中TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6、OTC含量均降低,肝组织中SOD水平升高(P<0.05)。结论:TGCO对免疫性肝损伤小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低转氨酶,提高抗氧化能力和抑制TNF-α、IFN-r、IL-1、IL-6生成有关。

山茱萸环烯醚萜总苷对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响

目的:观察山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响。方法:大鼠以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模,2周后灌胃给予ICO(0.1,0.2g/kg)或氨基胍(AG,0.1g/kg)治疗,连续16周。检测体重、空腹血糖、血清Ins、Ins-Ab、CHOL、TG、HDL-C及LDL-C含量;分离心脏进行形态学观察。结果:模型组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C明显升高,Ins水平显著降低;光镜检查显示心肌肥大伴程度不等的间质水肿和组织细胞增生,心内膜或心包膜有轻度炎症及纤维化。ICO及AG组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C均明显降低,心肌肥大程度减轻。结论:ICO对2型糖尿病心脏病变有一定的保护作用。

山茱萸环烯醚萜总苷对小鼠胰岛素抵抗和非酒精性肝损伤的改善作用及其机制研究

[目的]探讨山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对胰岛素抵抗和非酒精性肝损伤的改善作用及其作用机制。[方法]采用摄入高脂饲料的方法构建肥胖糖尿病大鼠模型,设置正常组、模型组、吡格列酮对照组和ICO低、中、高剂量组共5个实验组,给药3周,酶联免疫吸附(ELISA)方法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、胰岛素和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定肝脏组织p-P65,p-ERK1/2,p-JNK1/2,p-P38蛋白表达水平。[结果]ICO可以显著降低肥胖小鼠脂肪指数、降低血清中ALT、AST、TC、TG、LDL、HDL、胰岛素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,改善葡萄糖耐量和胰岛素耐量,降低肝脏组织p-P65,p-ERK1/2,p-JNK1/2,p-P38蛋白表达水平。[结论]ICO可改善小鼠胰岛素敏感水平和肝损伤程度,这可能与其能够降低P65,ERK1/2,JNK1/2,P38蛋白磷酸化水平,抑制核因子-κB(NF-κB)和MAPKs信号通路激活,从而降低机体炎性水平有关。

山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病心脏病变的保护作用

目的研究山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对实验性糖尿病心脏病变的保护作用。方法以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模。于造模后2周分别灌胃给予降糖通脉(JTTM)胶囊(0.8 g/kg)I、CO(0.05、0.10、.2 g/kg)治疗,连续16周。检测空腹血糖、血清NO、NOS、血浆ET含量,取心脏计算心指数,并采用光镜观察其形态学改变。结果模型组大鼠空腹血糖升高,血清NO、NOS水平明显降低,血浆ET水平明显升高,心指数增加(P<0.05,P<0.01)。光镜检查显示模型大鼠心肌肥大,伴程度不等的间质水肿和组织细胞增生;心内膜或心包膜有轻度炎症及纤维化。应用ICO及JTTM后,糖尿病大鼠血糖降低,血清NO、NOS水平升高,血浆ET水平降低,心指数降低,心肌肥大程度减轻。结论ICO对糖尿病心脏病变有一定的保护作用。

星点设计-效应面法优化山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺

目的优选山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺,并对其进行质量评价。方法以卡波姆-940用量、凝胶剂p H值、甘油用量为考察因素,以凝胶剂的外观、涂展性、均匀度、离心性的综合评价为指标,采用三因素三水平星点设计-效应面法优选脂质体凝胶剂的制备工艺。结果山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的最佳制备工艺为卡波姆用量0.5%,pH值6.6,甘油用量15 g。根据优选的最佳工艺,平行制备3份凝胶剂,进行综合评分,综合评分结果分别为9.4、9.7、9.5。结论运用星点设计-效应面法优选出的山茱萸总环烯醚萜苷脂质体凝胶剂的制备工艺简单,方法可靠。

山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响

目的:观察山茱萸总苷对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞线粒体超微结构的影响,探讨其抗心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将原代培养3 d的心肌细胞采用液体石蜡封闭法建立缺氧/复氧模型,分为正常组、缺氧/复氧模型组(缺氧2 h/复氧1 h)及药物干预组(缺氧/复氧前24 h及缺氧同时给予山茱萸总苷预处理),药物浓度分别为0.1、1.0、10 g/L.。电镜下观察各组心肌细胞线粒体的形态。结果:与正常对照组比较,模型组心肌细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴溶解融合或有电子致密颗粒沉积,给予山茱萸总苷干预后,中、高剂量组心肌细胞超微结构损伤程度明显改善,肌纤维排列基本整齐规则、线粒体完整、嵴清晰及未见空泡形成,低剂量组与模型组差异不明显。结论:山茱萸总苷可以抑制缺氧/复氧损伤对乳鼠心肌细胞超微结构的破坏,保护线粒体,可能是通过阻断心肌细胞凋亡线粒体通路去实现对心肌细胞的保护作用。

山茱萸环烯醚萜苷对小鼠血管内皮细胞的作用

对山茱萸环烯醚萜苷类(Cornus iridoid glycosides,CIG)成分进行提取、富集和鉴定,并探究其对血管内皮细胞增殖、形态和凋亡的影响。通过超声提取CIG并经D101大孔树脂去除色素和糖等影响检测的成分,CIG提取物经HPLC-MS检测并与标准品比对和鉴定。通过细胞增殖实验、激光共聚焦显微镜观察和细胞凋亡实验探究CIG对小鼠血管内皮细胞(b.end.3)的影响。结果表明,0.5~50μg/mL CIG可不同程度地促进血管内皮细胞增殖活性,抑制因高糖引起的细胞萎缩和凋亡。山茱萸作为药食同源的中药材可在一定程度上降低血栓形成的风险。

超声波和溶剂法提取山茱萸中总皂甙的工艺研究

本文通过溶剂法和超声法对山茱萸中总皂甙的提取工艺进行了研究,以提取温度、提取时间、95%乙醇用量等为因素,选用L16(43×26)和L9(34)正交表进行试验。结果表明,超声波的提取效率高于溶剂提取,大大缩短提取时间,优化工艺条件是:提取温度为85℃,提取时间为120min,95%乙醇用量为50ml。在此条件下,总皂甙的提取效率较高,其水解产物人参二醇含量可达5.16mg/g。

不同产地山茱萸总皂苷及总环烯醚萜苷的地理变异分析

目的:对不同产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷进行含量测定,研究不同产地地理因子对其含量影响及之间的相关性,为山茱萸优良产区筛选及质量控制提供相关的理论依据。方法:采用分光光度法和高效液相色谱法对15个产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量进行测定,并利用SPSS 19.0软件分别对其含量与产地地理因子进行相关性分析和聚类分析。结果:15个产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量变化幅度分别为13.55 mg/g~26.65 mg/g、23.05 mg/g~32.68 mg/g,不同产地之间的活性成分含量差异显著,其中河南西峡样品中总皂苷和浙江淳安样品中总环烯醚萜苷含量高;相关性分析发现总皂苷的含量和产地与海拔呈现极显著的正相关,和经度呈现显著的负相关,环烯醚萜苷含量与环境因子的相关性不显著;聚类分析结果显示,总皂苷与总环烯醚萜苷在东西部产地含量存在明显差异,表现为西高东低的趋势。结论:不同产地的山茱萸总皂苷和总环烯醚萜苷含量不同,存在明显的区域特征、与海拔和经纬度呈现相关性,本研究为山茱萸选择优良的种植产地提供理论支持。

山茱萸分离提取物对脾淋巴细胞增殖的影响

观察山茱萸提取物总甙、第一部分多酚、第二部分多酚等对脾淋巴细胞增殖的影响 ,寻找山茱萸总甙中抑制免疫的有效成分 ,并初步探讨山茱萸总甙抗类风湿关节炎的作用机理。采用 3H TdR参入法测定各种提取物对鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果提示各部分对鼠脾淋巴细胞增殖皆有抑制作用 ,第二部分多酚作用最强。山茱萸总甙的抗类风湿关节炎作用可能与它抑制抗原特异刺激的T淋巴细胞增殖有关。

山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞免疫功能影响的实验研究

研究了从山茱萸中提取的山茱萸总甙对正常小鼠T淋巴细胞及其亚群和产生IL 2的影响 ,以期探讨山茱萸总甙的免疫抑制机理。结果表明 :山茱萸总甙不同剂量均可抑制T淋巴细胞增殖(P <0 0 1)、T淋巴细胞膜表面CD3的表达 (P <0 0 1)和抑制T淋巴细胞膜表面CD4、CD8的表达(P <0 0 5或P <0 0 1) ,中大剂量还可以提高CD4 /CD8的比值 ,说明山茱萸总甙抑制CD8的作用比抑制CD4的作用更明显。不同剂量的山茱萸总甙还可以抑制T淋巴细胞产生IL 2 (P <0 0 5或P <0 0 1)。抑制IL 2的产生可能是山茱萸总甙抑制机体免疫功能的主要机理之一。

山茱萸总苷对关节炎大鼠原代滑膜细胞培养上清趋化能力的影响

探讨山茱萸总苷抗类风湿关节炎的作用机理。采用改良的Boyden小室前导法检测CⅡ诱导的关节炎大鼠山茱萸总苷治疗组和模型组的原代滑膜细胞培养上清对关节浸润炎性细胞如中性粒细胞、骨髓巨噬细胞和淋巴细胞趋化能力,结果以实验组穿膜细胞数减去对照组穿膜细胞数表示。结果发现:山茱萸总苷治疗组的原代滑膜细胞培养上清对上述三种炎性细胞的趋化能力（穿膜细胞数）均显著低于模型组（P<0.01）。说明山茱萸总苷抑制关节滑膜细胞对炎性细胞的趋化,减少炎性细胞向关节滑膜的浸润是其抗关节炎作用的机理之一。

基于多元功效成分的山茱萸药材质量标准提升研究

建立山茱萸药材中环烯醚萜苷类及三萜酸类化学成分的含量测定方法,为山茱萸药材的质量标准提升提供技术支撑。采用HPLC-UV法,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为240 nm,建立同时测定莫诺苷、马钱苷、当药苷的含量测定方法;采用HPLC-ELSD法,以甲醇-0.5%乙酸铵（87∶13）为流动相,建立同时测定齐墩果酸、熊果酸的含量测定方法。结果显示在上述色谱条件下,莫诺苷、马钱苷、当药苷分别在质量浓度5.335~213.4 mg·L-1（r=0.999 9）,5.515~220.6 mg·L-1（r=1.000 0）,1.992~79.68 mg·L-1（r=1.000 0）线性关系良好,平均加样回收率均在98.49%~99.28%,RSD〈2%;齐墩果酸、熊果酸分别在质量浓度7.74~154.8 mg·L-1（r=0.996 4）,10.82~216.4 mg·L-1（r=0.999 6）线性关系良好,平均加样回收率均在98.11%~99.27%,RSD〈3%。表明所建立的方法简单快速,准确可靠,重复性好,可用于客观评价山茱萸药材的品质及其质量控制,为完善山茱萸药材现行质量标准提供了实验数据,对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。