维药瘤果黑种草子总皂苷镇咳祛痰及抗炎作用研究

目的研究探讨维药瘤果黑种草子总皂苷的镇咳、祛痰和抗炎作用。方法选择昆明种小鼠及健康新西兰种家兔为实验动物,采用小鼠浓氨水引咳法观察总皂苷的镇咳作用,小鼠气管苯酚红排泌法、家兔促进气管纤毛粘液实验法观察总皂苷的祛痰作用,二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足跖肿胀实验观察总皂苷的抗炎作用。结果总皂苷可明显延长小鼠咳嗽的潜伏期,其高剂量组可显著降低氨水致小鼠的咳嗽次数(P<0.01);总皂苷能明显增加小鼠气管酚红排泌量(P<0.05～0.01),增加家兔气管纤毛粘液流运动速度(P<0.01);总皂苷能明显抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀及角叉菜胶所致的足趾肿胀(P<0.01)。结论维药瘤果黑种草子总皂苷具有明显的镇咳、祛痰和抗炎作用。

瘤果黑种草子总皂苷提取工艺研究

目的研究瘤果黑种草子总皂苷的含量测定方法及提取工艺。方法采用比色法测定瘤果黑种草子总皂苷,并采用正交设计优选其提取工艺。结果对照品浓度在49.78～132.75μg/mL范围内线性关系良好(r=0.997 1),平均回收率为102.80%,相对标准偏差(RSD)为1.69%(n=6);瘤果黑种草子总皂苷的最佳提取工艺为8倍量的30%乙醇在70℃水浴中提取3次,1h/次。结论比色法用于测定瘤果黑种草子总皂苷含量简单可行、重复性好,提取工艺稳定可行。

黑种草子总皂苷对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究黑种草子总皂苷提取物(TSNG)对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、凋亡和自噬等生物学行为的影响。方法:将SiHa细胞分为空白对照组和不同浓度(0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.4、1.6、1.8 mg/mL)的TSNG作用组,以及10μmol/L羟氯喹(HCQ)干预组;四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的生长抑制率;划痕实验检测细胞的相对迁移率;流式细胞术Annexin VFITC/PI染色法检测细胞凋亡率;Hoechst染色观察细胞核凋亡现象;单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察细胞内自噬体数量;Western blot实验检测LC3-Ⅱ和p62蛋白表达。结果:与空白对照组相比,TSNG对细胞的生长有抑制作用且呈剂量效应关系(P<0.05或0.01);0.9、1.0、1.1 mg/mL TSNG处理组细胞相对迁移率分别为(20.40±2.49)%、(15.14±0.39)%、(5.05±1.04)%,均低于空白对照组的(36.63±2.52)%(P<0.01);1.0、1.2、1.4 mg/mL TSNG处理组细胞的凋亡率分别为(39.10±0.22)%,(68.37±0.58)%和(80.93±0.12)%,均高于空白对照组的(10.73±0.82)%(P<0.05或0.01);与空白对照组比较,TSNG处理组细胞核表现出凋亡现象细胞数量增多,且细胞内自噬体数量增加,LC3-Ⅱ和p62蛋白表达上升(P<0.05或0.01);相较于TSNG作用组,HCQ预处理组LC3-Ⅱ蛋白表达无显著变化(P>0.05)。结论:TSNG对SiHa细胞体外增殖、迁移表现出明显的抑制作用,并在诱导细胞凋亡的同时阻断细胞自噬流。

酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的工艺优化

为了提高黑种草总皂苷提取效果,本实验以黑种草总皂苷得率为评价指标,单因素考察酶制剂的选择、酶添加量、乙醇浓度、料液比、酶解超声时间、超声频率以及酶解温度,利用响应面法优化了酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的最佳工艺。结果表明,酶辅助超声法提取黑种草总皂苷的最佳工艺条件:酶解温度60℃,乙醇浓度54%,料液比为1∶37 g/mL,酶添加量为0.98%,超声频率为60 kHz,时间为30 min,实际得率为14.09%±0.12%,模型方程理论预测值为14.17%,相对误差小于3%说明该工艺方案可行条件。

黑种草子总皂苷滴丸质量标准研究

目的建立黑种草子总皂苷滴丸的质量标准。方法以黑种草皂苷A为对照品,采用薄层色谱法对滴丸中的黑种草子进行定性鉴别,采用比色法对滴丸中总皂苷的含量进行测定,采用高效液相色谱法对滴丸中黑种草皂苷A的含量进行测定。结果薄层鉴别图谱斑点清晰,阴性对照无干扰;总皂苷含量测定中平均回收率为102.6%,RSD=1.96%(n=6),滴丸中总皂苷平均含量为18.13%;黑种草皂苷A含量测定中平均回收率为103.2%,RSD=1.16%(n=6),滴丸中黑种草皂苷A平均含量为14.71%。结论本研究制定的质量标准方法准确可靠、简便易行,可用于黑种草子总皂苷滴丸的质量控制。

瘤果黑种草子总皂苷的抗炎和免疫调节作用

目的 考察瘤果黑种草子总皂苷(TSSN)的抗炎和免疫调节作用。方法 建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎症模型,采用Griess法检测NO分泌水平,ELISA法检测细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β含量,采用qRT-PCR方法考察TSSN对NF-κB信号通路相关靶点mRNA表达水平的影响;酶动力学实验检测总皂苷对环氧酶-2(COX-2)以及5-脂氧酶(5-LO)的抑制活性;通过MTS法及ELISA法检测TSSN对静息期淋巴细胞的影响,并以TSSN对刀豆蛋白(ConA)、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响,以及对T淋巴细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-γ的影响来考察TSSN的免疫调节作用。结果 在LPS诱导的RAW 264.7炎症模型中,TSSN能显著降低LPS诱导的RAW264.7分泌炎症介质NO和促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,显著抑制TNF-α、IL-6、IL-1β m RNA表达水平,抑制iNOS、NF-κB p65 mRNA表达水平;在12.5~200μg·ml-1剂量时能显著抑制COX-2活性,在1 000~4 000μg·ml^(-1)剂量时对5-LO也具有显著抑制作用;此外,TSSN对ConA、LPS分别诱导的小鼠T、B淋巴细胞增殖具有显著抑制作用,明显抑制T淋巴细胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6及IFN-γ。结论 TSSN具有较好的抗炎活性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。此外,TSSN具有较好的免疫调节作用,其机制有待进一步研究。

黑种草子总皂苷滴丸的制备工艺研究

目的:优选黑种草子总皂苷滴丸的制备工艺。方法:以滴丸的外观质量评分、丸重量差异变异系数和溶散时限的综合评分作为考核指标,通过单因素和正交试验对影响滴丸成型的因素进行考察,优选最佳制备工艺。结果:优选的最佳制备工艺为:以PEG4000∶PEG6000(5∶1)为基质,总皂苷提取物与基质配比1∶3,滴制温度80℃,冷却剂为二甲基硅油(运动黏度350 m Pa·s),冷却温度5℃,滴距10 cm,滴制速度30滴/min。结论:优选出的制备工艺稳定可行。

黑种草子总皂苷和总黄酮提取工艺优化

为了优选能同时提取黑种草子中的总皂苷和总黄酮的提取工艺,采用L9(34)正交试验法,通过考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数,以总皂苷和总黄酮含量为工艺选择的评价指标,进行了黑种草子提取工艺的研究。结果表明,最佳提取工艺为8倍量的60%乙醇回流提取2次,每次1 h。该提取工艺稳定可行,可用于黑种草子总皂苷和总黄酮的同时提取。

瘤果黑种草子总皂苷的长期毒性研究

目的:观察瘤果黑种草子总皂苷连续灌胃给药90天对大鼠产生的毒性反应。方法:给大鼠灌胃不同浓度(分别为35、157和700mg/kg)瘤果黑种草子总皂苷90天,分别于给药45天、90天及停药后17天处死10只大鼠进行血液学、血液生化学及组织病理学检查。结果:瘤果黑种草子总皂苷不同剂量组大鼠在给药及停药恢复期间外观体征、行为活动、体质量、摄食量、血液学、血液生化学及组织病理学检查均未见异常,与正常对照组比较差异均无显著性。结论:瘤果黑种草子总皂苷长期用药对大鼠无明显毒性。

HPLC-ELSD法测定黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A的含量

目的:建立测定黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法。色谱柱为Cosmosil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,ELSD的漂移管温度为65℃,气体流速为2.0L/min。结果:黑种草皂苷A的质量浓度在0.183～2.562mg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9990);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2%;平均加样回收率为99.93%,RSD=1.60%(n=6)。结论:该方法操作简便、重复性好、准确性高,可用于黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A的含量测定。