透骨消痛胶囊干预兔膝骨关节炎蛋白多糖与MMP-2、MMP-13表达的实验研究

目的:通过透骨消痛胶囊对兔膝骨关节炎软骨基质多糖与基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-13表达影响的实验研究,进一步探讨该药保护骨关节炎软骨基质的作用机制。方法:将72只新西兰大白兔随机分为空白对照组,模型对照组,奥泰灵组,透骨消痛胶囊低、中、高剂量组,每组12只。除空白对照组外,其余各组均采用改良Hulth法造模,造模后5周给予药物治疗,灌胃8周。甲苯胺蓝染色、AB-PAS染色观察软骨蛋白多糖的表达,Western Blot检测MMP-2、MMP-13的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组甲苯胺蓝染色、AB-PAS染色显著减弱,MMP-2、MMP-13表达显著升高。与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组甲苯胺蓝染色、AB-PAS染色均匀深染,MMP-2、MMP-13表达显著降低。结论:透骨消痛胶囊可通过下调软骨MMP-2、MMP-13表达,减缓软骨基质降解,降低软骨损伤程度,延缓骨关节炎病理进程。

透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠内质网应激影响的研究

目的:观察透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨内质网应激的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨关节炎的可能机制。方法:将30只清洁级SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,透骨消痛胶囊高、中、低剂量组,每组6只。除正常对照组外,其余各组采用质量分数为4%的木瓜蛋白酶注射建立大鼠膝骨关节炎模型。给药8周后,收集大鼠右侧股骨髁和胫骨平台,光镜检查软骨组织的形态学变化,利用原位末端标记法(Td T-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)检测软骨细胞凋亡情况,免疫组化检测软骨组织内质网应激蛋白激酶(PKR-like ER kinase,PERK)、真核启动因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,e IF2α)、转录活化因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、免疫球蛋白结合蛋白(immunoglobulin binding protein,Bip)、生长抑制DNA损伤基因153(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 153,GADD153)、软骨细胞功能基因Ⅱ型胶原蛋白(CollageⅡ)和转录因子SOX-9蛋白的表达。结果:透骨消痛胶囊对大鼠骨关节炎模型关节软骨的大体外观及HE染色均有明显改善,TUNEL结果显示其能够降低软骨细胞凋亡指数(P<0.01),免疫组化结果显示透骨消痛胶囊较模型对照组能够下调PERK、e IF2α、ATF4、Bip及GADD153蛋白表达,上调软骨细胞功能基因CollageⅡ和SOX-9的蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:透骨消痛胶囊可通过抑制内质网应激的信号转导,减少软骨细胞的凋亡数目,改善软骨细胞形态,促进软骨细胞代谢及软骨修复,以维持软骨结构的相对完整,从而延缓关节软骨退变。

从Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用

目的:从Wnt/β-catenin信号通路观察透骨消痛胶囊对大鼠膝骨关节炎关节软骨的保护作用。方法:60只健康清洁级2月龄雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组和透骨消痛胶囊组,每组20只。模型对照组和透骨消痛胶囊组采用质4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射,成功复制骨关节炎模型后,透骨消痛胶囊组给予透骨消痛胶囊287.5 mg·kg^(-1),正常对照组和模型对照组给予相同剂量的生理盐水。给药2个月后,采用Western blot法观察各组关节软骨中含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、Wnt-4、β-catenin和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达升高(P<0.05);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组ADAMTS-5、Wnt 4、β-catenin和MMP-13表达降低(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊对关节软骨的保护作用与其降低Wnt/β-catenin信号通路表达相关。

透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠软骨下骨Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、透骨消痛胶囊组,每组20只。除空白对照组外,其余大鼠采用改良Hulth法建造膝骨关节炎模型。空白对照组、模型对照组给予生理盐水灌胃,透骨消痛胶囊组给予10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃。干预后,置于麻醉下取材,经RT-PCR、Western Blot分别检测软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量变化。结果:RT-PCR、Western Blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著升高(P < 0.01);与模型对照组比较,透骨消痛胶囊组大鼠软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达显著降低(P < 0.01或P < 0.05)。结论:透骨消痛胶囊可通过调控改良Hulth法制备的膝骨关节炎大鼠模型软骨下骨中Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA与蛋白含量表达,从而延缓膝骨关节炎软骨下骨硬化。

透骨消痛胶囊干预骨质疏松性骨关节炎模型骨重建与炎症因子变化的研究

目的:分析透骨消痛胶囊对骨质疏松性骨关节炎模型骨重建与炎症因子的影响,为治疗骨质疏松性骨关节炎提供依据。方法:建立骨质疏松性骨关节炎大白兔模型,取模型兔与正常对照兔各6只比较,鉴定造模成功。再将正常对照组与模型对照组大白兔各12只用生理盐水灌胃,中药组大白兔12只用透骨消痛胶囊灌胃;维持4,8周时,每组各6只取材,检测血清骨重建关键因子、骨形成与骨吸收标志物以及股骨髁炎症因子蛋白。结果:中药组与模型对照组比较,碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和骨保护素(OPG)、破骨细胞异化因子(RANKL)活性显著降低,OPG/RANKL比值显著升高(P <0.05或P <0.01);白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α显著降低(P <0.01或P <0.05)。结论:透骨消痛胶囊能下调过度的骨重建速率,调节异常骨代谢水平,降低炎症因子水平,改善骨关节的软骨下骨与软骨变化,延缓骨质疏松性骨关节炎进程。

多成分综合优化透骨消痛胶囊的提取工艺

目的:对透骨消痛胶囊的提取工艺进行研究,筛选出最佳的工业化提取工艺。方法:采用L9(34)正交表,以浸膏率、阿魏酸、水晶兰苷、芍药苷含量为指标,以乙醇浓度、固液比、提取次数、提取时间为考察因素,优选川芎的提取工艺以及巴戟天和白芍两药材合并的提取工艺,并通过二者最终优化工艺的验证结果与改良工艺试验结果的综合比较,确定适合工业化生产的最佳提取工艺。结果:改良工艺后,指标成分含量变化较小,提取次数与乙醇浓度减少,总浸膏得率降低。因此,综合优化的提取工艺是3药材合并,用10倍质量分数为30%的乙醇加热回流提取2次,每次1.5 h。结论:综合优化的提取工艺合理、可行,适用于透骨消痛胶囊的工业生产。

透骨消痛胶囊对兔膝骨质疏松性骨关节炎模型软骨与软骨下骨结构的影响

目的:观察透骨消痛胶囊对骨质疏松性骨关节炎模型软骨与软骨下骨结构的影响,为探讨治疗该类型骨关节炎提供依据。方法:将18只新西兰大白兔分为正常组、模型组、中药组。除正常组外,其余2组先诱导骨质疏松,再建立膝骨关节炎模型。正常组与模型组给予生理盐水,中药组给予透骨消痛胶囊灌胃4周。HE和番红-固绿染色,光镜观察软骨结构;显微CT观察软骨下骨,分析骨小梁参数;扫描电镜观察软骨下骨微细结构。结果:模型组软骨损伤,基质蛋白多糖浅染,Mankin评分达中期损伤;软骨下骨骨小梁结构破坏,参数变化;胶原纤维等微细结构损伤。中药组软骨损伤减轻,基质深染,Mankin评分为早期损伤;软骨下骨骨小梁结构和参数改善;胶原纤维等微细结构改善。结论:透骨消痛胶囊能改善骨质疏松性骨关节炎模型软骨结构与基质病变,减轻软骨下骨微结构破坏,故可延缓该类型骨关节炎病理进程。

透骨消痛胶囊抑制大鼠骨关节炎软骨退变的实验研究

目的:探讨透骨消痛胶囊抑制骨关节炎软骨退变的机制。方法:将30只2月龄SPF级SD雄性大鼠按照随机数字表法分为空白对照组(10只)和模型组(20只)。模型组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型,按照随机数字表法分为模型对照组和透骨消痛胶囊组,每组10只。透骨消痛胶囊组用透骨消痛胶囊溶液(10 mL·kg^-1·d^-1)灌胃,空白对照组、模型对照组连续等剂量生理盐水灌胃,持续12周。观察大鼠股骨髁软骨的整体形态学变化情况,另使用HE染色和甲苯胺蓝染色观察大鼠软骨形态结构及软骨蛋白多糖的表达,并用ELISA法检测滑膜组织中炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β),以及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平。结果:HE染色结果表明,空白对照组关节软骨表面光滑平整,软骨细胞排列规则,层次清晰;模型对照组软骨表面粗糙,软骨细胞排列紊乱,软骨细胞异常分化;透骨消痛胶囊组关节软骨表面比模型对照组完整,层次较为清晰,软骨细胞形态较好。甲苯胺蓝染色显示,空白对照组软骨染色呈紫红色,染色较深且均匀;模型对照组软骨染色明显变浅;透骨消痛胶囊组软骨染色较模型对照组深,染色相对均匀。ELISA法检测结果显示,模型对照组滑膜组织中TNF-α、IL-1β、MMP-13水平均高于空白对照组(P <0.05),透骨消痛胶囊组低于模型对照组(P <0.05),透骨消痛胶囊组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:透骨消痛胶囊能有效抑制炎症反应所引起的关节软骨退行性病变,延缓骨关节炎病理进程。

透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠关节软骨Gαs、Gα(i)、Gα(pan)的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊对膝骨关节炎大鼠关节软骨G蛋白偶联信号传导系统的影响。方法:2月龄清洁级雄性SD大鼠36只,喂养1周后,随机分为空白组12只和造模组24只。造模组在第1,4,7天双膝关节腔注射0.2 mL质量分数为4%的木瓜蛋白酶。造模成功后,抽签法随机分为模型组和透骨消痛胶囊组,每组12只。透骨消痛胶囊组按照3.6 g·kg^(-1)·d^(-1)的剂量灌服透骨消痛胶囊,空白组、模型组给予等量生理盐水。12周后取关节软骨,采用Western blot技术检测关节软骨中Gαs、Gα(i)、Gα(pan)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组Gαs、Gα(pan)表达量下降,Gα(i)表达量上升,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,透骨消痛胶囊组Gαs、Gα(pan)表达量上升,Gα(i)表达量下降,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊可能通过激活G蛋白偶联信号传导系统,延缓关节软骨的退变。

透骨消痛颗粒防治骨性关节炎的计算药效学研究

目的:从分子水平验证透骨消痛颗粒治疗骨性关节炎疗效,为临床用药提供依据。方法:分子对接法和靶-配体空间分布,初步鉴定出透骨消痛颗粒中治疗骨关节炎疾病的有效成分群。结果:透骨消痛颗粒是通过抑制聚蛋白多糖酶的活性、降低骨内压和降低骨性关节炎细胞因子的产生等起作用,其中,有些化合物显示出多重激酶特性。结论:透骨消痛颗粒对骨性关节炎具有潜在的协同作用。