Toxic effects of acetochlor, methamidophos and their combination on nifH gene in soil

Toxic effects of two agrochemicals on nifH gene in agricultural black soil were investigated using denaturing gradient gel electrophoresis （DGGE） and sequencing approaches in a microcosm experiment. Changes of soil nifH gene diversity and composition were examined following the application of acetochlor, methamidophos and their combination. Acetochlor reduced the nifH gene diversity （both in gene richness and diversity index values） and caused changes in the nifH gene composition. The effects of acetochlor on nifH gene were strengthened as the concentration of acetochlor increased. Cluster analysis of DGGE banding patterns showed that nifH gene composition which had been affected by low concentration of acetochlor （50 mg/kg） recovered firstly. Methamidophos reduced nifH gene richness that except at 4 weeks. The medium concentration of methamidophos （150 mg/kg） caused the most apparent changes in nifH gene diversity at the first week while the high concentration of methamidophos （250 mg/kg） produced prominent effects on nifH gene diversity in the following weeks. Cluster analysis showed that minimal changes of nifH gene composition were found at 1 week and maximal changes at 4 weeks. Toxic effects of acetochlor and methamidophos combination on nifH gene were also apparent. Different nifH genes （bands） responded differently to the impact of agrochemicals： four individual bands were eliminated by the application of the agrochemicals, five bands became predominant by the stimulation of the agrochemicals, and four bands showed strong resistance to the influence of the agrochemicals. Fifteen prominent bands were partially sequenced, yielding 15 different nifH sequences, which were used for phylogenetic reconstructions. All sequences were affiliated with the alpha- and beta-proteobacteria, showing higher similarity to eight different diazotrophic genera.

Reversion Mutation in Dark Variants of Luminous Bacteria and Its Application in Gene Toxicant Monitoring

The luminous intensity of dark variant (S1) separated from photobacterium phosph oreum (A2) was 1/10 000 less than that of wild type. Ethidium bromide (EB) (0.6 mg/L), Mytomycin C (MC, 0.05 mg/L), 2 amino fluorene (2 AF, 1.0 mg/L) all cou ld strongly induce reversion mutation for S1 within 24 h and increase reversion ratio significantly. The results of experiments indicated that these revertants had stable genetic characteristic and the mutation may take place at gene levels . The mutagenesis to S1 caused by EB, MC and 2 AF was detected and it may be us ed as a new rapid, simple and sensitive method for gene toxicant monitoring.

PTA wastewater molecular toxicity detected with gene chip

The purified terephthalic acid （PTA） petrochemical wastewater molecular toxicity detected by use of Mouse Genome 430A 2.0 GeneChip was conducted in this research. The toxic dose to male mice was 0.03 g/（kg, d） of PTA in the wastewater. The mice liver total RNA was isolated as the temple for synthesis of eDNA and then the cDNA as the temple for synthesis of cRNA. Hybridizing the cRNA with the target genes on the gene chip, there were 232 genes expression levels up-regulated and 74 genes down-regulated discovered obviously. The foremost 40 genes for both the highest and the lowest expression levels involved endogenetic steroid and hormone metabolism, immune system, the leukocyte activity and inflammation, detoxification in liver, reproduction and growth hormone, regulation immune factors of anti-tumor and anti-infection and cancer to the mice sampled. The data suggest the PTA wastewater contained over 5 aromatics and their toxicities integrated were much higher than the pure chemical PTA. And the pure chemical PTA toxicities data cannot be used to evaluate the toxicity of the PTA wastewater instead.

5种β受体拮抗剂类药物中的N-亚硝基类杂质的含量研究

目的测定普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、艾司洛尔、比索洛尔原料药/制剂中N-亚硝基类杂质含量,明确其含量的关注阈值。方法采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术。以ACE Excel 3 C18-AR为色谱柱,以含0.01 mol/L乙酸铵的0.2%甲酸溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为0.60 mL/min,柱温为40℃,进样量为5μL;以可加热的电喷雾离子源为离子源,以全扫描-选择离子监测模式进行正离子扫描。采用该法对10家企业生产的15批β受体拮抗剂类药物原料药/制剂中N-亚硝基类杂质含量进行测定,并采用Discovery Studio软件对待测杂质进行毒性预测和关注阈值估算。结果5种β受体拮抗剂类药物中,N-亚硝基普萘洛尔、N-亚硝基美托洛尔、N-亚硝基阿替洛尔、N-亚硝基艾司洛尔、N-亚硝基比索洛尔检测质量浓度的线性范围分别为1.01~503.38、1.02~508.38、0.97~483.63、1.11~554.27、1.05~523.92 ng/mL(r>0.999),定量限分别为1.04、0.25、0.05、0.55、1.05 ng/mL,检测限分别为0.52、0.08、0.02、0.17、0.52 ng/mL,精密度、重复性、加样回收率、稳定性、耐用性试验的RSD均小于7.5%(n=6或n=5)。15批样品中,除1批样品外,其余批次均检出了N-亚硝基普萘洛尔(1.07~8.91 ng/mg)、N-亚硝基美托洛尔(1.43~3.37 ng/mg)、N-亚硝基阿替洛尔(1.33 ng/mg)、N-亚硝基艾司洛尔(0.19 ng/mg)、N-亚硝基比索洛尔(1.27 ng/mg)。经预测,上述5种杂质有不同程度的生育毒性、致突变性、致癌性,关注阈值分别为1.0、0.4、4.3、0.2、46.7 ng/mg。结论所建方法简单快捷、灵敏度高、专属性强,估算的关注阈值明确,可用于多种β受体拮抗剂类药物中N-亚硝基类杂质的含量控制。

红鲫胚胎发育过程中Sox8基因对壬基酚胁迫的响应

【目的】明确红鲫SRY相关高迁移率族盒蛋白8基因(Sox8)表达模式及壬基酚(NP)暴露对红鲫胚胎发育过程中Sox8基因表达的影响,为揭示NP胁迫下红鲫胚胎发育畸形的分子机制提供科学依据。【方法】运用RACE克隆红鲫Sox8基因cDNA全长序列,通过ProtParam、ProtScale、InterPro、PredictProtein、DeepTMHMM等在线软件进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测红鲫Sox8基因在各成体组织及不同胚胎发育阶段的表达情况,以及不同浓度NP暴露对红鲫胚胎期Sox8基因表达的影响。【结果】红鲫Sox8基因c DNA序列全长2163 bp,其开放阅读框(ORF)1176bp,共编码391个氨基酸残基;红鲫SOX8蛋白相对分子量为43798.30Da,理论等电点(pI)为6.90,脂溶指数为49.92,不稳定指数为66.04,总平均亲水性指数(GRAVY)为-1.026,其N端含有Sox_N二聚化结构域和HMG-box结构域;基于SOX8氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示红鲫与鲫的亲缘关系最近。红鲫Sox8基因在各成体组织中广泛表达,以脑组织中的Sox8基因相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05,下同);在红鲫胚胎发育过程中,Sox8基因的表达从受精后到14体节期呈逐渐下降趋势,但从21体节期开始Sox8基因相对表达量显著增高,直到孵化期始终维持在较高水平。在大多数情况下,NP暴露能显著影响红鲫胚胎发育过程中Sox8基因的表达,特别是14体节期后的发育阶段,NP暴露主要是不同程度地激活Sox8基因表达。【结论】Sox8基因表达在红鲫成体中具有组织特异性,且在胚胎发育过程中呈先降低后升高的变化趋势。NP暴露能显著影响红鲫胚胎发育过程中Sox8基因的表达,14体节期后Sox8基因表达水平升高可能是NP致畸红鲫胚胎的重要原因之一。

食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1的毒性研究

目的:考察食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后的体内毒性,探索安全剂量范围,为后续临床试验提供参考信息。方法:30只食蟹猴随机分成3组,包括溶媒对照组和低、高剂量(1.0×10^(8)、4.0×10^(8)pfu)组,每组10只,雌雄各半。采用肌肉注射给药,每周给药2次,连续给药6周,恢复期8周。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每次给药后1~2天观察注射部位症状,每周称量体重。分别在检疫期、首次给药后、给药期结束、恢复期结束的不同时间点进行安全药理(体温、血压、心电图)测定、临床病理(血液学、血凝、血清生化、尿生化)检查、免疫学(T淋巴细胞、细胞因子、免疫原性)测定、组织病理学检查和脏器称重。结果:给药后,动物未见异常症状、注射部位刺激性、体重和摄食量改变,未见安全药理和临床病理指标有意义的变化。与溶媒对照组比较,第41天,低剂量会引起动物CD3^(+)CD4^(+)T细胞比例升高,高剂量未见明显变化。第13至97天,低、高剂量均能引起动物产生抗载体结合抗体、抗抗体,以及个别动物检出hPD-1表达产物。证明药物在体内产生免疫活性和介导免疫原性。组织病理学检查显示,给药期结束时,低、高剂量组动物注射部位极轻度至中度混合细胞浸润,高剂量组动物坐骨神经极轻度髓鞘/轴突变性;恢复期结束时注射部位病变减为极轻度,坐骨神经病变未见恢复趋势。低、高剂量组动物未见组织脏器重量改变。结论:食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后,动物体内耐受良好,受试物未见毒性反应剂量(NOAEL)是1.0×10^(8)pfu。上述研究结果为药物开展临床试验提供了数据支持。

砷对斑马鱼胚胎发育和基因表达的影响

砷是已知的致癌剂和致畸物,长期砷暴露是导致人类疾病和损害野生动物健康的重要环境风险因素之一。尽管孕期遭受砷暴露的风险依然存在,但是环境浓度范围下的砷暴露如何影响胚胎发育的机理有待揭示。本研究以斑马鱼为模式动物,运用鱼类胚胎急性毒性测试方法、RNA-Seq深度测序和生物信息分析方法,研究亚砷酸盐(As^(3+))对斑马鱼早期胚胎发育的影响,确定与胚胎发育异常相关基因的表达变化,揭示As^(3+)影响胚胎发育的机理。结果表明:①依据斑马鱼早期胚胎小眼睛、小耳石、躯干弯曲和心包水肿形态变化,确定As^(3+)暴露120 hpf(hour post-fertilization,受精后的小时数)后半数效应浓度(EC_(50))为0.6 mg/L。②在As^(3+)暴露浓度为0.2 mg/L和1.0 mg/L条件下暴露72 hpf后,斑马鱼胚胎中分别有591和461个基因的表达水平发生变化。③与对照相比,As^(3+)暴露组中显著性差异表达基因主要涉及细胞外基质、环境刺激感知和光传导等生物学过程,还涉及参与糖、药物、卟啉和视黄酸代谢和细胞信号传导等生理生化过程。研究显示,As3+可能通过干扰代谢过程、影响细胞信号传导和细胞外基质组成,从而影响细胞迁移和分化,最终导致胚胎发育异常。

柱花草SgALMT1基因克隆与表达分析

为探索铝激活苹果酸转运蛋白(Aluminum-activated malate transporter,ALMT)在植物适应酸性土壤铝毒害中的重要作用,本研究以柱花草(Stylosanthes guianensis)为研究材料,克隆了柱花草SgALMT1基因,并进行了生物信息学、亚细胞定位及基因表达分析。结果表明:SgALMT1基因全长为1350 bp,编码450个氨基酸残基,蛋白分子量为50.6 kDa,包含6个跨膜结构域;亚细胞定位分析表明,SgALMT1蛋白定位在拟南芥原生质体细胞膜上,为膜蛋白。定量PCR结果表明,SgALMT1基因在柱花草叶中的表达量高于根中的表达量;铝处理增强了SgALMT1基因在柱花草根中的表达,表明SgALMT1基因可能参与了柱花草应对铝胁迫;另外,缺氮处理增强了SgALMT1基因在柱花草叶中的表达,而缺磷处理增强了SgALMT1在根中的表达。本研究结果为解析柱花草响应铝毒害和养分缺乏的机理提供了候选基因资源。

四唑虫酰胺对大型溞的急性毒性和毒理

四唑虫酰胺是新一代双酰胺类杀虫剂,具有广阔应用前景,阐明其环境安全性具有重要意义。在本研究中,评估了四唑虫酰胺对水生生物大型溞的生态毒性效应。研究结果表明,四唑虫酰胺对大型溞具有较高的急性毒性风险,其48 h-LC 50值为(0.096±0.010)mg·L^(-1)。在0.005 mg·L^(-1)和0.025 mg·L^(-1),四唑虫酰胺对大型溞的摄食行为和运动行为具有不同程度的抑制作用。此外,四唑虫酰胺导致大型溞体内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性显著升高,而乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)、谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferases,GST)和胰蛋白酶(trypsin)活性显著降低。转录组测序结果显示,随着暴露浓度的增加,四唑虫酰胺在大型溞体内诱导的差异表达基因数量逐渐增多。差异表达基因KEGG富集分析结果显示,不同剂量的四唑虫酰胺均显著影响了大型溞体内与代谢和蛋白质合成功能相关信号通路。关键差异基因筛选和验证结果表明,与抗氧化功能相关基因表达量在各四唑虫酰胺处理组均显著上调,而与解毒、消化和核糖体功能相关基因表达量在各四唑虫酰胺处理组均显著下调。本研究阐明了四唑虫酰胺对大型溞的急性风险,并揭示了亚致死浓度下,四唑虫酰胺对大型溞生理功能的影响,相关结果可为四唑虫酰胺在水环境中的环境安全性提供理论依据。

基因多态性对含奥沙利铂化疗方案治疗Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌疗效及毒副作用的影响

目的探讨GSTP1、XRCC1、ABCB1、MTHFR基因多态性对接受含奥沙利铂化疗方案Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌患者疗效及毒副作用的影响。方法回顾性收集2018年9月至2020年3月苏州大学附属第二医院接受含奥沙利铂化疗方案(XELOX、FOLFOX)的Ⅲ、Ⅳ期结直肠癌患者资料76例。采用单因素、多因素COX回归模型分析基因型与无进展生存期(PFS)、毒副作用的相关性。结果ABCB13435T>C位点C等位基因(TC/CC型)携带者的疾病进展风险显著高于TT基因型患者[HR=2.39,95%CI(1.05,5.50),P=0.038],Ⅳ期患者的疾病进展风险显著高于Ⅲ期患者[HR=8.11,95%CI(3.39,19.40),P<0.001];化疗方案、Karnofsky功能状态评分、肿瘤部位对疾病进展的影响不明显(P>0.05)。基因位点的突变与不良反应无相关性(P>0.05)。结论携带ABCB1 TC/CC型且接受含奥沙利铂化疗方案患者的疾病进展风险较高,这可能与接受此类化疗方案的Ⅳ期结直肠癌患者(TT型)有更长的PFS相关,而GSTP1、XRCC1、MTHFR基因多态性无显著影响。

酶在生物修复中的研究进展

综述了生物修复中的氧化还原酶(细胞色素P450、漆酶和过氧化物酶)和水解酶(脂肪酶、纤维素酶、酯酶和卤代烷烃脱卤酶),氧化还原酶通过使用NADP或NAD^(+)作为辅酶转移电子,这些酶介导的生化反应中产生的能量将染料、多环芳烃或农药等进行降解;水解酶通过断裂化学键如酯键、肽键和碳卤键等,将有毒的污染物转化为无毒的化合物。总结了提高酶生物修复效果的方法,如投加表面活性、酶固定化处理和基因工程改良增产等,分析了酶在生产与实际应用过程中存在的问题以及对未来的发展趋势进行了展望。

植物镉毒害的防控及相关基因研究概况

镉是一种有害重金属,属于I类致癌物,对动植物的健康生长都会产生威胁。随着工业、城市化的迅速发展,土壤中的镉积累越发严重,不利于粮食生产安全。近年,许多研究者在研究镉对植物生长发育、光合作用、体内酶活性等方面的毒害机制上已经取得了重要进展,但真正能应用到生产中的研究罕见,且许多植物研究力度浅,例如甘蔗。所以,系统了解植物镉毒害的防控及其基因研究概况,有利于促进低镉材料的选育进程。据此,本文综述了植物镉毒害的防控、镉相关基因位点发掘的概况、基因位点辅助选育低镉材料和植物镉相关基因的研究概况等方面,为低镉材料的选育提供重要的理论基础,有利于促进植物响应镉毒害修复研究和农业绿色增效的进程。

基于CiteSpace可视化分析微囊藻毒素的研究进展

为探究微囊藻毒素(MCs)研究领域的知识主题演化历程及研究热点,以中国知网(CNKI)中文核心期刊为数据来源,基于CiteSpace软件对MCs的研究动态进行文献计量分析。从年度发文量来看,MCs的研究受到学者大量、持续的关注,研究论文多发表于环境化学、生物学和生态学等领域的期刊,其中《水生生物学报》为载文量最多的期刊。关键词分析表明,MCs研究涉及内容较广,包括MCs毒性、检测、降解和时空分布等方面,其中MCs的生物降解及其毒性效应是研究的热点,MCs对草鱼器官及基因表达的影响是研究的前沿领域。MCs相关研究可分为3个阶段,1993—1999年研究处于初级阶段,以MCs的分离纯化、对肝脏的毒性效应和饮用水中MCs浓度研究为主;2000—2011年该领域研究热度提升,并呈现出多个研究方向,其中以MCs的生物降解和检测为主,并对MCs的毒性效应及环境分布相关领域进行了拓展性研究;2012—2021年继续对MCs含量的检测及其毒性效应进行深入研究。利用基因工程技术构建高效表达MCs降解基因的工程菌或建立稳定性好且降解效率高的微生物群落,研发加快生物降解的催化剂,研究环境相关浓度MCs复合污染的生态毒理效应及其作用机制是今后重要的研究方向。

附子中次乌头碱调控miR-134对心肌细胞hERG通道的影响

目的从miRNA-hERG途径探索双酯型生物碱对心肌细胞毒性的调控机制。方法采用全细胞膜片钳技术测定hERG电流,实时荧光定量PCR测定基因表达水平,蛋白质免疫印迹实验测定蛋白表达。结果3种双酯型生物碱均可降低hERG蛋白和基因表达水平,抑制心肌细胞hERG通道开放率,次乌头碱抑制作用最为显著且呈剂量依赖性。次乌头碱促进miR-134表达量上升最明显,抑制miR-134表达后hERG蛋白基因表达水平显著上升,hERG蛋白基因表达抑制率降低。结论通过对miRNA表达进行修饰,次乌头碱可抑制hERG蛋白基因表达水平及hERG通道开放,此抑制效果可能是附子心脏毒性的重要组成部分。

Selection Vector for Direct Cloning of Proof Reading Polymerase Chain Reaction Products Based on the Lethal <i>ccdB</i>Gene in <i>Escherichia coli </i>

Introducing PCR products into plasmids vectors is key for molecular techniques. Ideally cloning vectors are easy to construct, modify and propagate, neither require advanced techniques nor special equipment or reagents and efficiently incorporate PCR products at close to zero empty vector background. We provide an easy to engineer self-made cloning vector, neither requiring sophisticated tools or techniques nor advanced cloning knowledge. Through recombination we obtained the pUC18ccdB vector, carrying the ccdB suicide gene within the pUC18 backbone. When SmaI cleaved (within the ccdB) vector was T4 ligated with small (0.2 kbp) and intermediate (1.3 to 2.2 kbp) blunt end PCR-products and transformed into E. coli, the amount of clones with incorporated PCR product was comparable to commercial PCR-cloning kits and at a close to zero PCR product negative background. In conclusion we present a simple, versatile and cheap approach to an efficient “home made” PCR-cloning vector that allows integration of crude blunt end PCR products at close to zero background.

Expression of Genes Associated with Nickel Resistance in White Spruce (<i>Picea glauca</i>) under Nickel Stress: Analysis of AT2G16800 and <i>NRAMP</i>Genes

Heavy metals such nickel (Ni) can cause toxicity by 1) displacing essential components in the biomolecules, 2) blocking the functional group of molecules, or 3) modifying enzymes, proteins, the plasma membrane, and membrane transporters. The main objective of the present study was to investigate the effect of nickel (Ni) on gene expression of nitrate on gene expression with a focus on the genes coding for the high affinity Ni transporter family protein AT2G16800, and natural resistance-associated macrophage protein (NRAMP). Ni toxicity was assessed by treating seedlings with an aqueous solution of nickel nitrate salt [Ni(NO3)2] at the concentrations of 150 mg, 800 mg, and 1600 mg of nickel per 1 kg of dry soil. RT-qPCR was used to measure the expression of AT2G16800, and NRAMP genes in samples treated with nickel nitrates and controls. The results revealed that P. glauca is resistant to Ni based on lack of plant damage at all nickel concentrations. Ni has no effect on the expression of the AT2G16800 gene in needles or roots. However, it induced an upregulation of the NRAMP genes in roots at all the doses tested (150 mg/kg, 800 mg/kg, and 1600 mg/kg). On the other hand, Ni has no effect on the expression of the NRAMP gene in needle but the lowest dose of potassium (150 mg/kg) upregulated this gene in needle tissues.

DPYD基因表达与胃癌患者5-氟尿嘧啶敏感性及毒副反应的相关性

目的 观察二氢嘧啶脱氢酶基因(DPYD)表达与胃癌患者5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性及毒副反应的相关性。方法 选取2018年1月—2023年1月在广安市人民医院治疗的胃癌患者60例,取新鲜切除的肿瘤非坏死组织。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织DPYD表达强度,实时荧光定量聚合酶链反应检测DPYD mRNA表达,体外药敏试验检测胃癌原代细胞对5-FU的敏感性。术后均采用以5-FU为基础的综合化疗方案,化疗结束后统计化疗效果、毒副反应发生率及严重程度。比较不同DPYD表达强度患者5-FU敏感性;采用Pearson法分析DPYD mRNA表达与药敏指数的相关性;比较不同DPYD表达强度患者毒副反应。结果 60例患者的肿瘤组织中,DPYD低表达34例,高表达26例,高表达患者DPYD光密度值高于低表达患者(P <0.05)。DPYD低表达患者化疗总有效率、5-FU敏感率高于高表达患者(P <0.05)。DPYD mRNA表达与化疗效果(r=-0.664)、药敏指数(rs=-0.892)呈负相关(P <0.05)。DPYD低表达患者3、4级上消化道反应、神经毒性、骨髓抑制、皮肤感染发生率高于高表达患者(P <0.05)。结论 DPYD基因高表达与胃癌患者5-FU敏感性降低有关,但毒副反应更轻。

一株致病性临床型乳房炎源粪肠球菌SL22的分离与鉴定

为了解北疆某规模化奶牛场临床型乳房炎源粪肠球菌的耐药与毒力情况,采集了47份临床型乳房炎乳样进行细菌分离,通过生化鉴定及16S rRNA对粪肠球菌进行鉴定,进行了药敏试验及33种耐药基因检测,了解其耐药情况;通过小鼠LD50、病变观察及6种毒力基因检测,了解其致病性。分离鉴定出了1株粪肠球菌,命名为SL22;遗传进化树构建中,与粪肠球菌菌株MD48、MD60(GenBank登录号分别为MW5784.17.1、MW5784.16.1)同源性为92.00%;在哥伦比亚血平板上具有溶血现象,为α溶血;在耐药情况检测中,SL22对青霉素G、杆菌肽耐药,对万古霉素等药物敏感,含有4种耐药基因(qnrD、floR、aac(6’)-lb-cr、int I 1);在毒力测定中,SL22对小鼠的LD50约为1.6×10^(9)CFU/只,死亡小鼠肝脏、小肠出血明显,且含有4种毒力基因(gelE、cylA、ace、efaA)。本试验为奶牛乳房粪肠球菌感染的防治提供了参考。

浙江省稻瘟病研究进展

浙江省是我国长江中下游主要的粮食生产区,长期以来水稻生产受稻瘟病的严重影响。在过去的10年,浙江省在稻瘟病防控技术上面取得了很大进展。本研究回顾了浙江省稻瘟病菌优势种群的变化和优势小种的更新情况,总结了近10年已育成的203个品种的稻瘟病抗性变化趋势,归纳了稻瘟病抗病基因的克隆和功能研究,以及这些抗病基因结合分子标记辅助育种技术在水稻抗病育种中的应用情况。本文还展望了田间水肥的管理模式、抗稻瘟病基因聚合水稻品种选育和无毒基因在稻瘟病流行预测上的应用。

基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体在小鼠体内的毒性研究

目的评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在小鼠体内的毒性。方法(1)急性毒性研究中,40只C57BL/6N小鼠随机分为2组,分别为溶媒组和受试物组,单次尾静脉注射后,进行连续15 d临床症状观察、体重和摄食量测定,于第15天剖检。(2)长期毒性研究中,440只小鼠随机分为4组,分别设置溶媒组,受试物低剂量组(1×10^(13)vg·kg^(-1))、中剂量组(5×10^(13)vg·kg^(-1))和高剂量组(1.5×10^(14)vg·kg^(-1)),单次尾静脉注射后,对动物体重、摄食量、血液学、血清生化、免疫毒性及免疫原性等毒性指标进行测定。给药后4周和6个月时解剖,动物进行组织病理学检查,并在2、4周,3、6个月采用q PCR的方法检测GC304在动物各个脏器的分布和表达情况。结果(1)急性毒性研究中,动物临床症状、体重、摄食量未见异常,未见与GC304相关的大体病理学改变。(2)长期毒性研究中,动物临床症状、体重、摄食量、细胞因子和T淋巴细胞亚群未见与GC304相关的明显异常。GC304能够降低血浆中甘油三酯以及与抗药抗体相关的白蛋白/球蛋白比值下降,能够诱导抗AAV5结合抗体和中和抗体的产生,并持续至给药后6个月。给予GC304后,未检测到抗脂蛋白脂肪酶(LPL)抗体。组织病理学结果显示,小鼠给药后4周,注射部位出现与药物相关的炎性细胞浸润,至给药后6个月可见恢复。与药物相关的改变为脾脏生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多、腹股沟淋巴结生发中心活跃伴易染体巨噬细胞增多。qPCR检测结果显示,GC304在小鼠外周血及脏器广泛分布和表达,但在肝脏中分布和表达显著高于其他脏器。结论C57BL/6N小鼠单次静脉给予GC304后,主要在肝脏中表达和分布,并且动物耐受性良好,未见明显毒性反应,为该药物进入临床试验提供参考。