右旋松萝酸体外抗弓形虫速殖子的实验研究

目的探索右旋松萝酸在体外抗RH株弓形虫速殖子的效果。方法实验设右旋松萝酸组、乙酰螺旋霉素组、二甲基亚砜(DMSO)组及生理盐水对照组,前两组分别再设4个浓度组,于1ml弓形虫速殖子悬液(1×106个/ml)中分别加入终浓度为5、10、25和50μg/ml右旋松萝酸或乙酰螺旋霉素;后两组分别加入等体积的生理盐水和1%DMSO;每组15管。作用1、2和4h后,取弓形虫悬液涂片,台盼蓝染色,光镜观察记数。将各组作用4h的弓形虫悬液洗涤后,接种昆明小鼠,作再转种试验,观察弓形虫速殖子复苏情况。同时将洗涤后的虫体接种于制备的SD大鼠心肌成纤维细胞,观察虫体侵袭力。结果10、25和50μg/ml右旋松萝酸组作用4h,弓形虫速殖子台盼蓝着色率达100%,部分虫体肿胀,两端变圆,细胞质内出现颗粒,细胞核深染。各浓度的乙酰螺旋霉素组弓形虫速殖子变化与右旋松萝酸组相似,仅50μg/ml组作用4h后台盼蓝着色率达100%。再转种试验结果显示右旋松萝酸组仅5μg/ml组小鼠于接种后第8～9天死亡,腹腔液见大量弓形虫速殖子;其余各组小鼠大多存活至再次转种,且腹腔液均未见弓形虫速殖子。但乙酰螺旋霉素各浓度组小鼠均于接种后6～8d死亡,腹腔液见大量虫体及假包囊。右旋松萝酸5μg/ml组,弓形虫速殖子侵入大鼠心肌成纤维样细胞,会形成假包囊,其余组均为阴性。但乙酰螺旋霉素、生理盐水和DMSO组速殖子对大鼠心肌成纤维细胞均有不同程度感染。结论右旋松萝酸在体外有较强的抗弓形虫速殖子作用。

新疆阿勒泰地区绵羊弓形虫病的血清学调查

为了解新疆阿勒泰地区绵羊弓形虫病的感染情况以及感染弓形虫病与绵羊流产的关系,对阿勒泰地区6县1市的绵羊随机采集血清共565份,采用间接血凝试验进行了弓形虫感染的血清学检测。结果显示,阿勒泰地区各县(市)绵羊均有弓形虫感染,感染率高低不一,平均感染率为6.5%;在有流产史的绵羊中发现存在布鲁菌和弓形虫双重感染的情况,提示在预防和治疗绵羊流产时,除了要考虑布鲁菌感染的因素以外,还应考虑弓形虫感染这一因素。

弓形虫感染对孕妇妊娠结局的影响

目的 :探讨感染弓形虫对孕妇妊娠结局的影响。方法 :采用孕妇外周血及新生儿脐血进行弓形虫抗体IgM检测 ,比较正常孕产组与异常孕产组感染弓形虫抗体IgM阳性率之差异 ,比较孕妇IgM阳性组与IgM阴性组的不同妊娠结局分布。结果 :孕妇外周血及新生儿脐血的正常孕产组与异常孕产组弓形虫IgM抗体阳性率具有显著差异 ,P <0 .0 5 ;弓形虫IgM阳性组孕妇出现低体重儿、早产显著高于阴性组孕妇 ,P <0 .0 5 ,IgM阳性组孕妇出现的畸形儿及不良结局小计显著高于阴性组孕妇 ,P <0 .0 1。结论

弓形虫Prugniaud株诱导的对小鼠黑色素瘤抑制作用的体内实验研究

目的探讨弓形虫Prugniaud实验感染增强宿主的非特异性抗肿瘤效应,检测Prugniaud株单独感染或联合卡介苗(BCG)对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用。方法体内实验用绿色荧光标记的转基因小鼠每组9只,荷瘤后单独感染弓形虫Prugniaud株或联合BCG,比较肿瘤生长情况,计算抑瘤率,并用流式细胞仪检测各组小鼠肿瘤细胞的凋亡率。RT-PCR检测肿瘤组织中VEGF的mRNA的表达水平。结果 B16组、BCG/B16组、TG/B16组、TG/BCG/B16组小鼠瘤重分别为3.237±0.552g、2.461±0.320g、1.521±0.263g、1.069±0.444g,各组肿瘤凋亡率分别为7.42±2.09%、9.27±2.10%、23.32±4.37%、43.88±6.33%;光镜下TG/B16组和TG/BCG/B16组小鼠能明显抑制肿瘤细胞生长,并且VEGF120/β-actin和VEGF120/β-actin低于其他组(TG/B16:0.167±0.011,0.190±0.015);TG/BCG/B16:0.140±0.015,0.171±0.011)。结论弓形虫感染对小鼠黑色素瘤有抑制作用,降低血管内皮生长因子mRNA表达量,并且在BCG联合作用下效果得到增强。

弓形虫主要表面抗原 P30基因的原核融合表达及鉴定

目的在已建 P30克隆载体的基础上,进一步构建表达质粒,诱导以融合蛋白形式表达的能被免疫血清识别的 P30蛋白,并探索最佳表达条件。方法双酶切 P30克隆载体和空白表达质粒 PGEX-4T-1,连接后转化入 DH5α进行 PCR 筛选,酶切鉴定和测序验证。重新将重组质粒转化入表达宿主菌 BL21进行诱导。对比不同诱导时间的菌体蛋白 PAGE 图谱,并进行 Western blot鉴定。改变诱导物浓度和培养温度,优化出最佳表达条件。结果构建成功序列和读框正确的重组质粒并表达出特异性 P30抗原,该抗原能被抗弓形虫蛋白血清识别。表达产量在 IPTG 为0.1mM时较高,而培养温度影响不大。结论表达出的具有免疫原性的重组蛋白,经纯化和切割后,可为研究 P30在虫体入侵,诱发机体免疫反应中的作用及疫苗和诊断试剂的开发提供充足的条件。

148例孕妇弓形虫感染分析

对１４８ 例孕妇（妊娠八周至妊娠七个月），运用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测静脉血弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍ ａ ｇｏｄｉｉ， ＴＯ）抗体；即Ｔｏｘ－ＩｇＧ抗体和Ｔｏｘ－ＩｇＭ抗体，发现近年来有猫犬接触史（指现在或曾经养过猫犬的）孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史孕妇（Ｐ＜ ０．０５），两者有显著性差异。

阿里红多糖对小鼠腹腔巨噬细胞体外抗弓形虫感染细胞因子分泌的影响

目的探索新疆植物药阿里红粗多糖(fomes officinalis polysaccharides,FOPS)提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外抗弓形虫TgRH株速殖子感染细胞因子分泌的影响。方法建立刚地弓形虫RH速殖子与小鼠腹腔巨噬细胞接种比例为1∶5的体外感染模型,实验设空白对照组、感染对照组和高(400μg/ml)、中(200μg/ml)、低(100μg/ml)3个药物剂量的药物对照组及感染模型治疗组。以流式微球捕获芯片技术(cytometric bead array,CBA)检测各组细胞感染虫体和药物作用6、12、24、36、48 h培养上清中IL-6、IL-10、TNF、INF、IL-12p70及MCP-1细胞因子水平。结果各实验组培养上清中IL-10和INF在实验过程均无表达。空白对照组感染48 h时TNF-α、IL-12p70及MCP-1略升高。感染组IL-6随感染时间延长水平显著升高,至感染48 h达(881.05±6.99)pg/ml,与空白对照组比较差异有统计学意义(F=235.3,P<0.05);TNF-α至感染48h时达(292.30±2.63)pg/ml,高于空白对照组(F=52.45,P<0.05);MCP-1和IL-12p70至感染48 h时与空白对照组差异无统计学意义(F值分别为2.624和3.518,P均>0.05)。各剂量FOPS作用于空白小鼠腹腔巨噬细胞,培养上清中MCP-1和TNF-α随作用时间延长而显著升高,至24 h时达到高峰,之后下降。各剂量药物组与空白对照组在药物作用24 h时组间MCP-1和TNF-α水平差异有统计学意义(F分别为41.95和231.4,P均<0.05);TNF-α表达水平与药物浓度升高成正比,MCP-1在培养上清中表达水平为M-FOP>L-FOP>H-FOP>空白对照组。高剂量H-FOP作用于感染巨噬细胞36 h内IL-6表达均较低,48 h略有升高,M-FOP组和L-FOP组IL-6表达趋势与感染对照组相似,但各感染时间IL-6表达水平均低于感染对照组(F=461.9,P<0.05)。各药物组TNF-α表达水平于药物作用24 h时升高,36 h时显著降低,48 h又迅速升高,各药物组与感染对照组比较差异有统计学意义(F=163600,P<0.05)。高剂量H-FOP组作用24 h细胞培养上清中TNF-α为(1624.426±6.54)pg/ml,较感染对照组水平升高100倍以上,略高于M-FOP组和L-FOP组,而M-FOP组与L-FOP组差异无统计学意义(F=1.396,P>0.05)。各药物组MCP-1变化趋势同TNF-α,MPC-1表达水平随药物剂量升高而降低。各药物组对感染细胞MPC-1表达水平的影响显著强于对正常小鼠腹腔巨噬细胞的影响,其中L-FOP组药物作用24 h时感染细胞培养上清中MCP-1水平为(119.11±0.91)pg/ml,约为L-FOP药物对照组的2倍。结论阿里红多糖粗提物主要影响小鼠腹腔巨噬细胞TNF和MCP-1的表达,其中使TNF表达上调,时间持续至给药后24 h。而MCP-1的上调可能与阿里红多糖粗提物中的其他成分有关。