弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原的检测

目的：探索弓形虫感染早期诊断方法。方法：用快速ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染鼠血清中弓形虫循环抗原。结果：在轻、中、重３个感染组，分别于感染后ｄ４、ｄ４及ｄ３检测到弓形虫循环抗原。结论：感染虫体数量越多则弓形虫循环抗原测出时间越早，ＯＤ值亦越高。检测弓形虫循环抗原具有早期诊断价值。

弓形虫感染鼠尿中循环抗原的检测

用快速ELISA检测弓形虫感染鼠的尿液,在轻、中、重三个感染组分别在感染后第5、4、3d检测到弓形虫循环抗原。实验结果显示弓形虫循环抗原的浓度与感染天数相平行,这在国内为首次报道。用免疫印迹法分析感染小鼠尿中弓形虫循环抗原,其特异区带为75、67、55、43、30、28、22 kDa。

SPA-ELISA检测弓形虫感染鼠尿中的循环抗原

[目的 ]探索弓形虫感染早期诊断的简便方法。 [方法 ]用SPA ELISA检测轻度、中度和重度感染弓形虫鼠尿中弓形虫循环抗原 (TCA)。 [结果 ]轻度、中度和重度感染弓形虫 3组鼠尿中均检出TCA ,上述 3组分别于弓形虫感染后d6 、d3和d4显示阳性斑点。 [结论 ]SPA ELISA能检出弓形虫感染鼠尿中的弓形虫循环抗原 ,可用于弓形虫感染的早期诊断。

Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原适宜条件的筛选

目的筛选Vero细胞无血清培养制备弓形虫排泄-分泌抗原(ESA)的适宜条件。方法采用拉丁方析因设计。第一部分:在血清浓度为0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的培养基中,共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养3、6、12、24h时,改为无血清培养基,继续培养至第7天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。第二部分:在含1.0%血清培养基中共培养Vero细胞与弓形虫速殖子,分别于培养12、24、48、72h时,改为无血清培养基,继续培养至第7、9、11、13天,收集培养上清液,制备ESA,并检测蛋白含量。结果Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12或24h时,无血清培养基继续培养7d,制备的ESA蛋白含量显著高于其他血清浓度(0.5%、2.0%、4.0%)及含血清培养时间(3、6h)。Vero细胞与弓形虫速殖子在含1.0%血清培养基中共培养12、24h,无血清培养基继续培养至第13天,制备的ESA蛋白含量显著高于其他培养时间(48、72h)和无血清培养基继续培养时间(7、9、11d)。结论培养基的血清浓度以及含血清和无血清培养时间是影响体外制备ESA的重要因素。Vero细胞与弓形虫速殖子在1.0%血清浓度培养基中培养12h,无血清培养基继续培养13d,为制备ESA的适宜条件。

抗弓形虫M cA b的建立及应用研究

应用杂交瘤技术 ,建立了 5株分泌抗弓形虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中 1E9和 4C10 2株分泌的 Mc Ab效价达 1∶ 12 80 0。该 2株单克隆抗体均属 Ig G1亚类 ,其识别的弓形虫抗原分别为 P2 2、P2 8。1E9和 4C10 Mc Ab混合后与兔抗弓形虫抗体联合 ,进行双抗体夹心 EL ISA测定弓形虫的敏感性分别为 12 .5和 2 5个虫体 / m l。检测 146份有不良孕产史妇女血清 ,11份弓形虫循环抗原 ( CAg)阳性 ( 7.5 3% )。检测 11份自然流产物 ,1份 CAg阳性 ,该流产物转种小鼠后证实确含有弓形虫。 92份育龄妇女血清 1份弓形虫 CAg阳性 ( 1.0 9% )。有不良孕产史的妇女血清弓形虫 CAg阳性率明显高于育龄妇女血清阳性率 ( P<0 .0 5 )。弓形虫经 1E9、4C10 Mc Ab处理后对小鼠腹腔巨噬细胞攻击 ,感染率分别为 7.8%和 7.5 % ,而对照组感染率为 14.5 % ,证明该

利用弓形虫病人血清筛选弓形虫速殖子特异性抗原

目的筛选能引起人体免疫反应的弓形虫抗原标记。方法利用实验室保存的9份弓形虫病人血清标准品、6份阴性血清标准品,以及2份弓形虫病人血清国际标准品作为一抗,分别与刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株的可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)进行免疫印迹反应。结果发现STAg中有10条蛋白带与所用阳性血清均发生免疫反应;ESA中有4条蛋白带能与所有阳性血清发生免疫反应,这些蛋白与阴性血清均不发生免疫反应。其中分子量为30、35、49、50、54kDa的STAg抗原以及分子量为23、24、28kDa的ESA抗原能与所用阳性血清发生较强免疫反应。结论本实验结果将有助于寻找在弓形虫病人体内能够引起免疫反应的弓形虫诊断抗原和免疫保护性抗原,为弓形虫诊断试剂以及疫苗开发奠定初步基础。

弓形虫循环抗原诊断试剂的研究

目的 比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果 ,优选高效价的抗体诊断试剂。 方法 制备弓形虫的细胞质抗原 (C)、代谢抗原 (S)。用抗原C、C +S、S及活虫各免疫 2只家兔 ,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体 (多抗 )并制备酶标记抗体 ;用上述 4种多抗与多抗 -HRP组合成 16种双抗体夹心型ELISA ,检测人血清CAg和C、S抗原 ,评价试剂的敏感性 ;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验 ,评价试剂的特异性。结果 各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本 7例 ,阴性样本 8例 ,均未出现假阴性和假阳性反应 ,其OD均值的P/N比值依次为C +C组 33 5、S +S组 2 7 8、CS +CS组 2 1 2、P +P组 13 2 ;C和S抗原的最低检出量均为 0 5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。 结论 (1) 4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明 ,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性 ,其中以抗C抗体试剂最为满意。 (2 ) 16种组合形式的夹心ELISA ,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义 ,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分。

产妇弓形虫感染对新生儿影响的研究

目的 探讨孕妇弓形虫感染对胎儿的影响。 方法 采用酶免三联诊断法对 35 6例母婴配对标本进行血清学检测。 结果 产妇弓形虫感染率平均为 19.1% ,各单项检测分别为 CAg15 .2 %、Ig M2 .5 %、Ig G3.4% ;新生儿弓形虫感染率平均为 17.7% ,其脐血各单项检测分别为 CAg16 .9%、Ig M0 .3%、Ig G2 .2 %。CAg垂直传播率为 35 .2 % (19/5 4) ,Ig G垂直传播率为 33.3% (4/ 12 )。在 4例畸胎儿中 ,2例脐血弓形虫血清学阳性。 结论 孕妇感染弓形虫有 1/ 3机会可通过胎盘垂直感染胎儿 ,影响胎儿发育 ,重者致畸。

用ABC-Dot-ELISA检测兔弓形虫循环抗体的初步研究

应用ABC-Dot-ELISA检测感染兔弓形虫循环抗体并与ABC-ELISA检测结果进行了比较,结果表明:前者不仅具有与后者相同的敏感性、特异性及重复性,而且操作简易、快速,所需抗原量和待检血清量较少。用二法观察了6只兔于感染后3～90天内抗体的消长情况。此外,对弓形虫速殖子的纯化,可溶性抗原的制备及其在ABC-Dot-ELISA、ABC-ELISA中的应用条件进行了研究。

SPA-ELISA检测弓形虫感染者血清特异性抗体和循环抗原研究

目的 :检测弓形虫感染者血清中特异性抗和循环抗原 (CAg)。方法 :应用SPA ELISA检测血清标本 ,结果 :SPA ELISA检测特异性抗体和CAg的敏感性和特异性与常规ELISA相似 (P >0 .0 5 ) ,结论

不孕症夫妇弓形虫感染检测

目的:检测弓形虫在不孕不育夫妇的感染情况。方法:采用ELISA方法检测患者血清弓形虫CAg、IgMI、gG。结果:CAgI、gMI、gG阳性率分别为9.09%、16.67%、25.00%;弓形虫抗体阳性率为37.12%;弓形虫感染率为37.88%;男、女性弓形虫感染率分别为22.73%、53.03%,男女弓形虫感染率有显著性差异。夫妻双方同时感染的阳性率为15.15%;习惯性流产患者弓形虫感染率为60%。结论:弓形虫感染在不孕不育夫妇中较常见,女性感染率高于男性;习惯性流产患者感染率最高;因此要高度重视并及时治疗弓形虫感染。

弓形虫抗血清 IgG 的制备及其检测效果研究

目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗血清 IgG 的检测效果,优选高效价的抗体诊断试剂。方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S)。用抗原 C、C+S、S 及活虫(P)各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得 IgG 抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与对应的多抗-HRP 组合成4种双抗体夹心型 ELISA,检测人血清 CAg 和 C、S 抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性;采用捕获法检测人血清 IgM 抗体,比较4种多抗-HRP 的检测效果。结果各种 ELISA 夹心法同步检测 CAg 阳性标本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 比值依次为 C+C 组33.5、S+S 组27.8、CS+CS 组21.2、P+P 组13.2;C 和 S 抗原的最低检出量均为0.5μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。4种多抗-HRP 同步检测IgM 抗体阳性标本3例,阴性样本7例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 值最高的是抗 C-HRP。结论 4种抗体用于检测人血清 IgM 抗体、CAg、C 和 S 抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗 C 抗体试剂最为满意。(2)4种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫 C 和 S 抗原间存在着共同抗原成分。

蒿甲醚对实验兔弓形虫病的疗效观察

选用兔经腹腔感染ＲＨ株弓形虫速殖子，蒿甲醚（Ａｒｔ）疗效考核包括观察动物存活情况及血清中循环抗原（ＣＡｇ）的动态变化。结果显示，兔感染弓形虫后１ｄ即可测到ＣＡｇ，未治疗组兔血清ＣＡｇ于感染后４ｄ开始升高，７ｄ急剧上升达峰值，而后较快下降至低水平，到３０ｄ，只有部分兔血清ＣＡｇ开始转阴。而经Ａｒｔ治疗的动物，血清ＣＡｇ水平于感染后４ｄ即达高峰，然后很快下降，在７～２３ｄ相继全部转阴。另外，Ａｒｔ可１００％保护急性感染弓形虫兔免于死亡。表明检测ＣＡｇ有助于判断药物疗效。

临床疑似弓形虫病患者血清流行病学调查

目的了解临床不同症状可疑弓形虫病患者感染状况,为临床弓形虫病诊断提供参考依据。方法采用ELISA法对疑似弓形虫病患者血清进行抗体IgGI、gM和循环抗原(CAg)检测。结果在1677份血清样本中,抗体IgGI、gM和CAg阳性率分别为28.50%、13.00%和4.95%;不同症状患者中脑炎症状者IgG、IgM抗体阳性率最高,分别为36.14%、19.28%,其次为不明原因发热者;癫痫症状者CAg阳性率最高,为7.29%。患者治疗三个月后复查CAg和IgMI、gG,阴转率分别为78.94%、71.93%、43.75%,具有显著性差异。结论临床患者在出现脑炎、长期不明原因发热及癫痫症状时应考虑排除弓形虫感染。

1246例住院儿童弓形虫感染情况调查

目的 研究弓形虫感染与小儿疾病的关系。 方法 以 12 4 6例住院儿童为实验组 ,2 6 7名健康儿童为对照组 ,使用统一调查表问卷调查 ,同时采集静脉血 ,分离血清 ,采用双抗体夹心酶标一步法检测血清弓形虫循环抗原。 结果 实验组和对照组弓形虫循环抗原阳性率分别为 3.5 3%和 1.87% ,两组阳性率差异无显著性。早产儿、黄疸、新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)、肺炎、癫痫组弓形虫循环抗原均为阴性。上呼吸道感染、支气管炎、腹泻病组弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。喉炎 (包括喉炎、急性喉 -气管 -支气管炎 )、热性惊厥、哮喘 (包括支气管哮喘、喘息性支气管炎 )组弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较差异有显著性 (0 .0 5 >P>0 .0 1或 P≤ 0 .0 1)。 结论 虽然住院儿童与健康儿童血清弓形虫循环抗原阳性率差异无显著性 ,但某些疾病患儿弓形虫循环抗原阳性率与对照组比较 ,差异有显著性 ,提示弓形虫急性感染可能是这些疾病的一种病因。

弓形虫排泄分泌抗原对Lewis肺癌小鼠瘤体生长的抑制作用

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对Lewis肺癌小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T(Treg)细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成PBS组(14只)和Lewis组(34只)。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2×10^5个,PBS组注射等量无菌PBS。接种后第7天(D7),将PBS组小鼠分成PBS2组、PBS2+ESA组,每组7只;将Lewis组分成Lewis2组和Lewis2+ESA组,每组17只;PBS2+ESA组及Lewis2+ESA组小鼠腹腔注射100μL弓形虫ESA。ESA干预后7 d计算各组小鼠脾脏系数,检测Treg细胞数量变化,同时观察荷瘤鼠长期瘤体生长情况。结果 ESA干预后7 d,PBS2+ESA组[(0.66±0.09)%]和Lewis2+ESA组[(0.69±0.07)%]脾脏明显增大,脾脏系数与PBS2组[(0.30±0.02)%]和Lewis2组[(0.33±0.03)%]比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS2+ESA组[(1.28±0.14)%]和Lewis2+ESA组[(1.58±0.14)%]脾脏Treg细胞占脾细胞的比例均下降,与PBS2组[(2.06±0.07)%]和Lewis2组[(2.44±0.23)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。ESA干预后,瘤体生长延缓,在实验终点时,Lewis2+ESA组小鼠瘤体明显小于Lewis2组(P <0.05)。结论 ESA可下调荷瘤鼠脾脏Treg细胞占脾细胞的比例,抑制瘤体生长。

弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质质谱分析的初步研究

目的分析弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组学变化。方法16只同窝配对的C57BL/6J小鼠,随机分成弓形虫急性感染组和对照组,每组8只。弓形虫急性感染组每鼠腹腔感染经CF 11纤维素纯化的RH株弓形虫速殖子（1×104/ml）0.2 ml,对照组每鼠腹腔接种0.2 ml灭菌生理盐水。感染后4 d,处死全部小鼠,应用弱阳离子（WCX）纳米磁性微球捕获小鼠血清蛋白,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI TOF MS）技术检测两组小鼠血清蛋白质变化,并采用Autoflex analysis与Clin ProTools软件进行分析与比较。结果在分子量为1 000~16 000 Da区段,与对照组小鼠血清蛋白指纹图谱比较,弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质谱有13种蛋白表达差异有统计学意义,其中9种蛋白质表达上调,4种蛋白质表达下调。表达上调的多肽质荷比（m/z值）分别为1 932.76、1 976.85、2 090.53、5 004.5、5 776.01、5 803.05、5 847.99、5 877.51和7 501.58,表达下调的多肽m/z值分别为1 866.40、4 063.71、8 120.31和8 203.83。结论弓形虫急性感染小鼠血清蛋白质组发生显著改变,采用WCX纳米磁性微球联用MALDI TOF MS技术可检出弓形虫急性感染小鼠血清中的特异性蛋白标志物。

慢性头痛患儿血清弓形虫循环抗原、抗体检测及临床分析

目的检测慢性头痛患儿血清中弓形虫循环抗原、抗体的感染分布情况,以了解小儿慢性头痛与弓形虫感染的相关性。方法选择152例慢性头痛患儿作为病例组,45例健康体检者作为对照组,分别对其血清弓形虫循环抗原(Cag)、抗体(IgM、IgG)进行检测。结果慢性头痛患儿血清中弓形虫循环抗原抗体检测阳性率为67.10%,高于健康体检组(11.11%),2组阳性率差异有有统计学意义(P<0.01)。慢性头痛组以抗体IgG比例最高,为67.65%(69/102),其中单一IgG为36.27%(37/102),与其他抗原抗体比较,差异具有统计学意义(P<0.05);其次为IgM单独或与IgG、Cag共同存在占55.88%(57/102)。结论本研究提示进行弓形虫抗原抗体检测,对不明原因头痛尤其有宠物接触史的患儿明确病因,指导临床治疗,有一定的应用价值。

双抗体夹心ABC-ELISA检测弓形虫循环抗原方法的建立

为检测弓形虫循环抗原,以实现弓形虫急性感染的早期诊断,本研究建立了基于ABC(avidin biotin-peroxidase complex)放大系统的双抗体夹心ELISA方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA)并免疫动物,经3种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg)的单抗,以方阵滴定法确定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度,利用夹心法和ABC放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心ABC-ELISA方法,用该方法对人工感染犬血清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性,并应用于临床样品的检测。结果:获得了3株针对不同抗原表位的单克隆抗体,并对CAg有较高特异性。双抗体夹心ABC-ELISA反应条件:兔多抗包被浓度为3.7μg/mL,生物素标记3A5、3E5和10F5-3单抗在混合工作液中的浓度分别为0.1、0.13和0.12μg/mL。该ELISA方法对ESA最低检测限为11.9 ng/mL,并与隐孢子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蚴早期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA方法检测人工感染的犬,于感染后2 d血清即显示阳性,该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68份猪临床血样(其中包括2份标准阳性血清),检测结果与Nest-PCR结果一致。表明该双抗体夹心ABC-ELISA方法特异性强、敏感性高,可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。

猪弓形虫感染免疫胶体金试纸条的制备与初步应用

制备1种检测猪弓形虫血清循环抗原的免疫胶体金试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金溶液，标记抗弓形虫表面抗原sAG3（surfaceantigen3，sAG3）单克隆抗体（Anti-A—SAG3—7），用另1株抗弓形虫表面抗原sAG3单克隆抗体（Anti—A—SAG3—23）与羊抗小鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜（NC膜）上的检测线和质控线，制备并优化免疫胶体金试纸条检测条件。胶体金溶液的最适pH值为加入4uL 0．2mol／L K2CO3时的pH值。Anti—A-SAG3—7的最适标记量为12ug。最佳NC膜为Miltipore 135。T、C线抗体最佳包被质量浓度均为0．25g／L，T、C线抗体最佳包被体积均为8uL。试纸条的灵敏度达1：160，与猪囊虫阳性血清无交叉反应。稳定性试验表明，该试纸条置于室温至少可保存1个月有效，置于4℃可保存3个月有效。对广东某地区、吉林某地区猪场的各94份猪待检血清进行检测，分别有17，10份为阳性血清，样品阳性率为18．08％，10．63％。本研究制备的胶体金试纸条具有操作简单，敏感特异等优点，适合临床基层单位对猪弓形虫病的早期诊断及流行病学调查。