弓形虫感染家兔血液中虫体的动态观察

目的探明虫体在家兔血液中动态变化情况。方法用RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前后分别采集家兔血液,抗凝处理后,-40℃冻存备用,用实时定量PCR检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫DNA,依据对照计算虫体拷贝量,绘制感染后时间与血液中虫体含量的动态曲线图。结果雄兔弓形虫感染后4d血液中即可检测到虫体DNA,血液中虫体含量为217.887×103个/ml,血液中虫体含量在感染后8 d达到高峰期,血液中虫体含量为248.019×103个/ml,然后虫体含量逐渐下降,在感染后121 d雄兔血液中虫体密度为1.45×103/ml。结论弓形虫感染雄兔血液中虫体含量随感染后时间不同而变化。

弓形虫表面抗原SAG3基因的克隆与表达

目的克隆表达弓形虫RH株SAG3基因,为深入研究其结构及功能奠定基础。方法从弓形虫RH株基因组DNA中特异性扩增出编码SAG3基因的片段,相应酶切后克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建pET-SAG3重组质粒。将pET30-SAG3重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经EcoRⅠ、Hind III酶切及测序鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况。结果体外扩增的SAG3基因片段与目的片段大小相符约1 155bp,成功构建了重组表达质粒pET30-SAG3,SDS-PAGE、Western blot显示SAG3-His融合蛋白的分子量大小约为50kd。结论弓形虫表面抗原SAG3基因在大肠杆菌中成功表达,为进一步研究SAG3的结构和功能奠定基础。

环尾狐猴源弓形虫多位点基因的克隆、测序及基因分型

为确定引起广东环尾狐猴(Lemur catta)疑似弓形虫病的病原,从2只死亡的环尾狐猴体内无菌采集肺脏、肝脏、心、肾和脑等组织制作常规石蜡切片,HE染色。通过病理组织学观察,鉴定为弓形虫(Toxoplasma sp.)后,采用PCR-DNA测序分析方法对环尾狐猴源分离虫株(TgRTL1)的SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、L358、PK1、c22-8、c29-2和Apico基因位点进行PCR扩增、克隆和测序,采用DNAStar和MEGA5.05软件,将所获序列与网上下载的弓形虫RH株、ME49株和VEG株相应序列进行比对和同源性分析,并构建系统发育树。结果显示,从广东分离的环尾狐猴源弓形虫株,在10个遗传位点经PCR-DNA测序分析,确定该虫株的基因型为Toxo DB#3。本研究是对中国环尾狐猴源弓形虫采用多位点DNA序列分析进行基因型鉴定的首次报道,为进一步研究我国弓形虫流行病学、生物学特性以及弓形虫病的诊断提供了科学理论依据。

STAg和CT滴鼻免疫小鼠诱导的刚地弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）属专性细胞内寄生性原虫，人群感染极为普遍，全球约20亿人感染，2001—2004年中国人群血清阳性率高达7．88％。弓形虫感染在免疫缺陷、免疫抑制者可引起严重病变，孕期感染可经胎盘垂直传播致先天性弓形虫病。研制安全、有效、价廉的疫苗防治弓形虫感染乃当务之急。机体95％以上的感染发生在黏膜部位，皮下、肌肉接种疫苗不能有效诱导黏膜部位的免疫应答，只有从黏膜部位进行疫苗接种，才能有效预防黏膜感染。

弓形虫黏膜疫苗研究进展

弓形虫主要通过自然感染途径经口感染，引起人和温血动物的弓形虫病。弓形虫可能是世界上人类感染最普遍的寄生虫之一。弓形虫入侵宿主首先要通过黏膜组织的严密防御系统，即黏膜免疫系统，这是机体抗感染的第一道免疫屏障，诱导黏膜免疫应答。在共同黏膜免疫系统（CMIS）的作用下，全身多处黏膜相关淋巴组织（MALT）的免疫活性细胞被激活，黏膜部位产生大量的sIgA抗体，并形成庞大的免疫应答网络，发挥抗虫效应。该文将就近几年来弓形虫抗原诱导的黏膜免疫和黏膜疫苗的研究进行综述。