梅毒螺旋体体内诱生抗原Tp0462的表达鉴定及在临床血清学诊断中的应用评价

目的筛选鉴定并评价梅毒螺旋体（Tp）体内诱生抗原Tp0462的临床血清学诊断价值。方法提取TpNichols株全基因组，PCR扩增Tp0462，克隆构建重组质粒pET30a（＋）一Tp0462，转化至EcoliR05ett0（DE3）菌，大量诱导表达重组蛋白Tp0462并纯化、鉴定。18只新西兰兔随机平均分为活Tp接种组、紫外线照射灭活Tp接种组和未接种对照组，接种后不同时间点抽血分离血清，用ELISA鉴定Tp0462蛋白的体内诱生性特点。ELISA法（Tp0462．ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、梅毒初筛ELISA试验及快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）试验检测336份临床梅毒患者血清样本，初步评价该蛋白的诊断价值。结果重组质粒Tp0462-pET30a（＋）在E．coliRosetta（DE3）中最适的表达条件为0．5mmol／LIPTG，20℃，180rpm摇床诱导培养4h。活Tp接种组血清Tp0462特异性抗体水平从第2周起呈急剧上升趋势，至5周后趋于平稳，而灭活Tp接种组及未接种对照组血清Tp0462特异性抗体水平一直处于低水平。活Tp接种组Tp0462特异性抗体水平显著高于灭活Tp接种组及未处理组（P〈0．05），而灭活Tp接种组与未处理组相比，差异无统计学意义（P=0．256）。活Tp接种组、灭活Tp接种组Tp92抗体水平显著高于未处理组（P〈O．05），而活Tp接种组与灭活Tp接种组差异无统计学意义（P=0．127）。与TPPA相比，Tp0462-ELISA的灵敏度和特异度分别为91．7％和98．8％，符合率为95．2％，曲线下面积为0．997。Tp0462．ELISA与梅毒初筛ELISA试验的符合率为92．3％，Kappa值为0．846；与RPR试剂盒的符合率为83．9％，Kappa值为0．293。结论Tp0462在梅毒血清学诊断中具有较高的灵敏度和特异度，可以作为潜在的梅毒诊断候选蛋白。