老年可疑梅毒患者血清Tp15,Tp17,Tp45和Tp47抗体表达分析

目的分析老年可疑梅毒患者血清Tp15,Tp17,Tp45和Tp47抗体表达特征。方法性病门诊收集24例梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)阳性的老年可疑梅毒患者,同时收集35例老年二期梅毒患者和22例治疗10年以上的老年梅毒患者作为对照组,采用欧盟免疫印迹法检测各组患者血清抗梅毒螺旋体Tp15,Tp17,Tp45和Tp47 IgG表达情况。结果二期梅毒患者4种螺旋体特异性抗体均阳性。与老年二期梅毒患者相比,治疗10年以上的老年梅毒患者Tp17和Tp47 IgG抗体表达下降(P均<0.001);老年可疑梅毒患者与治疗10年以上的老年梅毒患者血清Tp15,Tp17,Tp45和Tp47 IgG抗体表达差异无统计学意义(P均>0.05)。结论梅毒治疗后Tp17和Tp47 IgG抗体表达下降;TPPA阳性的老年可疑患者可能是早年感染的梅毒患者。

TP17蛋白的重组表达及其在梅毒血清学诊断中的初步应用

目的通过基因工程技术获得梅毒重组蛋白TP17,并探索其在梅毒血清学诊断中的初步应用。方法以PCR扩增获得TP17基因,构建pET28b-TP17原核表达载体,将其转化到大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导蛋白表达,重组蛋白经镍柱纯化后,以飞行时间质谱和免疫印迹法进行鉴定。建立基于TP17的ELISA间接法,通过检测临床患者的血清标本,评价其与化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)的检测符合率。结果成功构建了原核表达载体pET28b-TP17,重组蛋白TP17以包涵体形式存在,分子量约20kD。质谱和免疫印迹分析表明重组蛋白为梅毒蛋白TP17,并且能够与梅毒阳性血清发生特异性反应。基于TP17的ELISA法与CMIA法和TPPA法的符合率均为99.2%(125/126),3种方法检测梅毒特异性抗体的差异无统计学意义。结论基因工程技术获得的重组蛋白TP17能够与梅毒阳性血清发生特异性反应,有良好的临床应用前景。

梅毒螺旋体TP17蛋白B细胞表位研究

目的:采用生物信息学方法预测梅毒螺旋体TP17蛋白B细胞表位,并验证TP17表位多肽与梅毒阳性临床血清的反应性。方法:用SOPMA、DNASTAR、SWISS-MODEL及IEDB数据库BepiPred-2.0等软件预测脂蛋白TP17的结构及B细胞表位。采用间接ELISA方法检测10份梅毒螺旋体阳性患者血清样本,与脂蛋白TP17及6段重叠多肽的反应性。结果:TP17蛋白6个线性B细胞表位为Thr27~Glu38、Leu53~Asp62、Thr66~Gln74、Lys75~Pro88、Leu107~Lys119以及Tyr132~Met145,预测的构象表位涉及的氨基酸为:Lys34-Ala35、Ala55、Pro88、Glu99、Pro136~Pro147、Thr154,这些抗原表位分散于TP17蛋白分段表达的6段重叠多肽(Tp17-1 Tp17-6)中的不同区域,ELISA结果显示这6段多肽均与梅毒患者阳性血清样本发生特异反应,OD_(450)值在0.59~1.45之间,S/N>2.1。结论:鉴定了TP17蛋白6个线性B细胞表位,该表位均与梅毒患者阳性血清发生特异反应。

TP-ELISA试剂盒3种外膜脂蛋白抗原联合应用对检测结果影响分析

目的通过对大连地区无偿献血者梅毒单试剂阳性和双试剂阳性血清标本中TP15、TP17、TP47抗体分别进行检测,分析梅毒A试剂所包被的这3种不同外膜脂蛋白抗原对检测结果的影响。方法收集大连市血液中心2017年11月—2018年11月梅毒A试剂单阳性标本36份和171份TP双试剂阳性标本,采用A试剂厂家3种分别包被不同外膜脂蛋白抗原的TP-ELISA试剂进行检测,所有阳性标本都进行电化学发光和TPPA确证实验,记录结果,并对数据进行统计分析。结果 1)TP单试剂阳性(A厂家)和双试剂阳性标本进行确认实验后,假阳性率分别为100%和10.83%(P<0.05)。2)单试剂阳性(A厂家)标本36份,3种抗体检测结果筛查频率P分别为:TP15-,TP47-,TP17-(P=0.17);TP15+,TP47-,TP17-(P=0.22);TP15-,TP47+,TP17-(P=0.56);TP15-,TP47-,TP17+(P=0.06);TP15+,TP47+,TP17-、TP15-,TP47+,TP17+、TP15+,TP47-,TP17+、TP15+,TP47+,TP17+频率P均为0。3)梅毒双试剂阳性标本(确认阳性)140份,3种抗体检测结果筛查频率P分别为:TP15+,TP47-,TP17-(P=0.01);TP15-,TP47+,TP17-(P=0.01);TP15+,TP47+,TP17-(P=0.04);TP15-,TP47+,TP17+(P=0.01);TP15+,TP47-,TP17+(P=0.01);TP15+,TP47+,TP17+(P=0.92);TP15-,TP47-,TP17-和TP15-,TP47-,TP17+频率P为0。4)梅毒单阳性的标本3种抗体检测结果两两进行χ~2配对检验,TP17和TP47 2种抗体的阳性检出率有差异(P<0.05);TP17和TP15 2种抗体的阳性检出率无差异(P>0.05);TP15和TP47 2种抗体的阳性检出率有差异(P<0.05)。5)梅毒双试剂阳性的标本(确认阳性)3种抗体检测结果两两进行χ^2配对检验均无差异(P>0.05)。结论 TP-ELISA检测试剂A包被的TP47外膜脂蛋白可能是引起其假阳性率升高的主要原因,针对TP47外膜脂蛋白在梅毒检测试剂A中的应用价值试剂厂家应该进行进一步的研究。

线形免疫分析方法检测一二期梅毒病人TP相关抗体

目的了解梅毒螺旋体(TP)外膜脂蛋白抗原TP15、TP17、TP42、TP47相关特异性抗体,在一期和二期梅毒病人血清中的检出状况,评价其在早期梅毒血清学诊断应用的意义。方法用线性免疫分析(Lineimmunoas-say)方法对24例一期梅毒病人,54例二期梅毒病人的血清进行检测,分析TP15、TP17、TP42、TP47相关特异性抗体与临床特征及传统血清学方法检测结果的关系。结果一期梅毒病人血清中,TP15、TP17、TP42、TP47的抗体阳性率分别为29.2%、100.0%、91.7%和95.8%,二期梅毒病人血清中TP15抗体阳性率为87.0%,TP17、TP42和TP47抗体均为100.0%。结论梅毒螺旋体外膜脂蛋白抗原特异性抗体产生与感染时间相关,TP17抗体出现最早,在一期和二期梅毒病人血清中,TP42和TP47抗体也均有高的阳性率,TP15抗体在二期梅毒病人血清中的阳性率较一期梅毒病人显著增高。

梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表达及临床抗体的检测

目的:克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体。方法:PCR扩增4个基因,构建原核表达质粒pET28a(+)/tp15、pET28a(+)/tp17、pGEX-6P-1/tp47和pGEX-6P-1/tp0453,经双酶切及测序鉴定,将获得的阳性克隆转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western blot分析鉴定,利用亲和层析方法对4个蛋白进行纯化。将四个纯化的蛋白固定到NC膜上,利用immuno-slot blot方法对梅毒病人血清进行检测。结果:经鉴定表明成功构建四个原核表达质粒。SDS-PAGE电泳及Western blot分析结果显示四个重组蛋白大小正确。immuno-slot blot实验显示四个蛋白能与梅毒病人血清特异性结合。结论:成功克隆、表达和纯化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白,四个蛋白可以与梅毒病人血清特异性结合,为进一步建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定基础。