电脉冲介导的Tpo基因转移对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用

目的 应用电脉冲介导的重组人血小板生成素 (rhTpo)基因的体内转移 ,探讨其对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用。方法 应用基因重组技术 ,构建真核细胞高表达质粒pcDI Tpo ,将 2 0 0 μgpcDI Tpo质粒注入正常及实验性血小板减少小鼠的股四头肌内 ,随后给予 10 0V、1Hz、40ms电刺激 6次 ,用RT PCR及Westernblot方法观察rhTpo基因在正常小鼠骨骼肌内的表达 ,ELISA法测定小鼠血浆Tpo水平。用细胞计数板计数小鼠外周血血小板。结果 成功构建了真核细胞高表达质粒pcDI Tpo。将pcDI Tpo转染小鼠后 ,在小鼠的骨骼肌内有rhTpomRNA及蛋白的表达 ,血浆Tpo水平由 (2 5 0± 76 )ng L升高至 (1185± 2 6 4)ng L。正常小鼠的外周血血小板由 (2 5 9± 2 7)× 10 9 L最高升高至 (6 40± 31)× 10 9 L ;注射卡铂后 ,转pcDI Tpo组小鼠的血小板最低下降至 (138± 2 4)× 10 9 L ,比转pcDI空载体组 [(98± 19)× 10 9 L]和单纯注射卡铂组 [(92± 16 )× 10 9 L]最低值高 ,同时血小板恢复时间提前 ,第 14天已恢复至 (2 38± 2 6 )× 10 9 L。结论 应用电脉冲介导的基因转移方法 ,可使rhTpo基因在小鼠骨骼肌内有效地表达 。