鸡源大肠杆菌1型菌毛菌株粘附鸡呼吸道上皮的电镜观察

用电子显微镜观察了鸡大肠杆菌 (O78) 1型菌毛在不同温度中的表达情况。细菌在营养肉汤中 37℃培养 4 8h可表达大量的菌毛 ,而 18℃培养 4 8h则缺乏菌毛。扫描电镜观察结果 ,37℃培养的鸡大肠杆菌可大量粘附鸡呼吸道上皮粘膜 ,而 18℃培养的同种菌则不能粘附 ,表明鸡大肠杆菌粘附鸡呼吸道上皮的过程由

一氧化碳和尼古丁对大鼠气管粘膜表面结构影响的扫描电镜观察

用香烟雾中的一氧化碳和尼古丁作用于幼年大鼠后，以扫描电镜观察了气管粘膜表面结构的变化。发现一氧化碳及尼古丁均使气管粘膜上皮表面的纤毛肿胀增粗、密度降低、出现倒伏和脱落；并促使杯状细胞增生。另外一氧化碳和尼古丁混合作用时出现了大面积的纤毛粘着和局部出现聚集成群的杯状细胞。

反式-BPDE诱发人胎气管上皮细胞p53基因突变的研究

目的 :探讨苯并 (a)芘在人肺癌发生中的作用。方法 :用苯并 (a)芘的代谢产物反式 -BPDE ,作用于体外培养的人胎气管上皮细胞 8～ 1 2周后 ,用PCR -SSCP方法检测 p53抑癌基因第 6,7,8外显子的点突变情况。 结果 :经反式 -BPDE处理的人胎气管上皮细胞 ,p53第 7,8外显子有点突变 ,而这些细胞都未出现典型的转化细胞形态特征的改变。结论 :反式 -BPDE可诱发人胎气管上皮细胞 p53基因点突变 ,此抑癌基因的点突变早于细胞形态学的改变。

小鼠鼻腔及气管黏膜上皮细胞的构成和纤毛反应性比较研究

目的比较小鼠鼻腔及气管黏膜上皮细胞的构成以及纤毛摆动频率对外源性刺激的反应性。方法 采用酶消化法获取小鼠鼻腔及气管黏膜纤毛细胞,观察纤毛细胞的得率以及ATP和苯扎溴铵对纤毛摆动频率的影响;采用免疫组化染色及扫描电镜观察鼻腔及气管黏膜上皮的细胞构成。结果 ①培养细胞中小鼠鼻甲的纤毛细胞得率可达(45±5)%,气管组织仅有(15±5)%;②免疫组化染色鼻腔及气管黏膜上皮细胞均有乙酰化α-tubulin阳性表达,鼻腔的纤毛细胞层更连续,细胞更密集;③100μmol/LATP均能引起鼻甲及气管的纤毛摆动频率增加,增加率分别为235.06%和118.49%;0.005%苯扎溴铵均能使2个部位的纤毛摆动频率下降,降至原有频率的50.31%和8.27%。2组频率比较差异均有统计学意义,P值分别为0.013和0.004;④扫描电镜观察,鼻腔黏膜上皮中纤毛细胞的比例(90%)明显高于气管上皮纤毛细胞比例(30%～40%)。结论 小鼠鼻腔和气管黏膜上皮中纤毛细胞的比例存在明显差异;2个部位的纤毛摆动频率对外源性刺激的反应程度存在明显差异;从纤毛细胞的数量上看,鼻腔远远高于气管,其中鼻甲是个不容忽视的丰富资源。

鸡气管黏膜上皮基底细胞的分选与鉴定研究

鸡气管黏膜上皮细胞是IBV和其他禽病原体感染的重要靶细胞。气管黏膜上皮细胞种类多样,不同细胞对病原感染敏感性有差异,研究与比较IBV感染不同种类气管黏膜上皮细胞特性有助于弄清IBV分子感染机制。利用流式细胞仪技术,使用基底细胞特异性抗体从鸡气管黏膜上皮细胞中分选出基底细胞。通过基底细胞培养形态的观察、生长曲线的绘制和特异性免疫荧光的鉴定,成功获得能够稳定生长繁殖的高纯度的鸡气管黏膜基底细胞,为今后IBV或其他相关研究奠定技术基础和提供了良好的种子细胞。

肺部接种鸡毒霉形体导致雏鸡气管上皮病变的扫描电镜观察

７日龄ＳＰＦ雏鸡肺部接种ＭＧ后，连续３周，取气管用扫描电镜观察粘膜上皮的变化。接种后第７天和第１４天，见到各接种组均有气管粘膜水肿；卡他性病变见于Ｉｃｌ菌株接种后第７天和第１４天时；第２１天各接种组气管粘膜均处于上皮修复和纤毛再生状态。以纤毛退行与否的量化标准评价了粘膜上皮的病变程度，各接种组中Ｉｃｌ菌株诱发的病变最为严重。电镜观察到的气管病变情况与其它实验检测结果相对应。

锌离子抑制气管移植后上皮细胞凋亡的实验研究

目的:利用小鼠异体异位气管移植模型,研究锌离子(Zn2+)对气管移植后上皮细胞凋亡及其促发的闭塞性细支气管炎综合征的抑制作用,为临床实践提供理论依据。方法:采用成年近交系雄性小鼠,平均体质量(21±0.5)g。BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体,建立气管异位移植模型,每组16只。对照组:移植术后生理盐水灌胃。锌离子(Zn2+)组:移植术后3.5%葡萄糖酸锌0.15mL(Zn2+2.5mg/kg)灌胃,1次/12h;环孢菌素A(CsA)组:移植术后口服环孢菌素A10mg·kg-1·d-1;联合用药组:移植术后葡萄糖酸锌0.15mL(Zn2+2.5mg/kg)灌胃,1次/12h并口服环孢菌素A10mg·kg-1·d-1。术后7d和14d每组随机处死8只小鼠。对每组受体鼠移植气管上皮细胞脱落和管腔闭塞进行评估。使用Tunel法检测上皮细胞的凋亡情况并计算凋亡指数。采用免疫组织染色方法检测上皮组织中Caspase-3的表达情况。结果:Zn2+组、CsA组及联合用药组的上皮细胞脱落和管腔闭塞程度较对照组明显减轻(P<0.01),联合用药组与Zn2+组、CsA组间差异有统计学意义(P<0.01),同时发现各组上皮细胞脱落和管腔闭塞程度存在正相关性(r=0.445,P<0.01)。通过计算凋亡指数(apop-tosis index,AI)发现,Zn2+组、CsA组、联合用药组的移植气管上皮细胞凋亡程度低于对照组(P<0.05),联合用药组与Zn2+组、CsA组间差异有统计学意义(P<0.05)。通过计算Caspase-3表达指数(caspase-3 express index,CEI)发现,Zn2+组、CsA组、联合用药组的Caspase-3阳性表达的气管上皮细胞数目明显低于对照组(P<0.01),联合用药组与Zn2+组、CsA组间差异有统计学意义(P<0.01)。同时发现各组上皮细胞AI和Caspase-3表达指数(CEI)之间有正相关性(r=0.394,P<0.01)。结论:气管移植后管腔闭塞程度随上皮细胞的脱落增多而加重,说明气管上皮细胞的破坏丢失是导致管腔闭塞的因素之一。气管移植后上皮细胞凋亡数目随Caspase-3表达增多而增加,说明Caspase-3与气管移植后上皮细胞凋亡之间关系密切。锌离子(Zn2+)可以通过抑制Caspase-3的表达起到抑制气管上皮细胞凋亡的作用,并可以与CsA起到协同作用。

组织工程气管上皮组织体外构建的研究

目的:体外构建气管上皮组织,为气管组织工程奠定基础。方法:利用消化法获得气管上皮细胞、成纤维细胞,体外扩增后作为种子细胞,在胶原上接种气管上皮细胞、成纤维细胞,体外构建活性双层气管上皮组织,并行组织学检测。结果:复合培养的组织学苏木精-伊红(H-E)染色切片显示成纤维细胞构成的薄层结缔组织上有气管上皮细胞形成的上皮细胞层。结论:利用胶原成功地在体外构建出了气管上皮组织。

猴气管上皮杯状细胞的异质性

用8种植物凝集素与猕猴气管上皮进行反应,表明杯状细胞间存在异质性,其异质性表现在分泌粘蛋白糖链组成的差异上。所有杯状细胞的分泌粘蛋白中,均含有不等量的末端α-D-半乳糖、α-D-甘露糖和唾液酸,以及不等量的次末端β-D-半乳糖和/或β-D-半乳糖-(1→3)-N-乙酰基半乳糖胺。仅部分杯状细胞分泌粘蛋白中含有不等量的α-L-岩藻糖。猴气管杯状细胞分泌粘蛋白糖链的组成与人有很大差异。

反式-BPDE诱发人胎气管上皮细胞H-ras癌基因点突变的研究

用苯并[a]芘的代谢物反式-BPDE,作用于6例体外培养人胎气管上皮细胞,2至6周后,用PCR结合限制性内切酸酶切片段多态性分析法,检测H-ras癌基因12位点密码子的点突变情况。结果显示,经反式-BPDE处理的气管上皮细胞,都有H-ras癌基因第12位点密码子的点突变,其中部分细胞还同时伴有起始密码子上游24bp处的另一个CCGG序列的点突变,而这些细胞都未出现典型的转化细胞的形态特征的改变。提示癌基因的点突变早于细胞形态学的改变。

利多卡因对大鼠气道黏膜表面结构的影响

目的:探讨利多卡因对大鼠气道黏膜表面结构的影响。方法:将25只Wistar大鼠随机分为正常对照组5只、利多卡因组20只,经大鼠气管穿刺注入利多卡因,并在2、24、48、72h4个时间点处死大鼠5只。取气管后1/3段的腹侧部,做扫描电镜观察大鼠气道黏膜表面结构。结果:利多卡因组均出现不同程度的黏液分泌增加,黏稠度增加,纤毛倒伏、粘着在一起、排列紊乱、部分断裂缺失。结论:利多卡因可对大鼠气道黏膜表面结构造成损害,但其可自我修复。

阿米卡星对大鼠气管黏膜的影响及氨溴索的干预作用

目的观察气管内注射阿米卡星对大鼠气管黏膜表面细微结构的影响,并通过氨溴索气管内给药干预,观察氨溴索对大鼠气管黏膜修复过程的影响。方法将280只Wistar大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、阿米卡星组和氨溴索组。在2、12、24、48及72 h共5个时间点每组随机取大鼠各12只,其中6只大鼠气管切开插管,行肺泡灌洗,回收灌洗液(BALF)行细胞计数;另6只大鼠处死后取气管做扫描电镜观察。结果各处理组BALF白细胞计数均较正常对照组有不同程度的升高。气管黏膜纤毛肿胀,纤毛倒伏,相互粘贴,排列紊乱,部分纤毛顶端膨大成球、多形结节。阿米卡星组BALF白细胞计数最高,纤毛受损最严重;生理盐水组BALF白细胞计数最低,纤毛受损最轻;而氨溴索组BALF白细胞计数低于阿米卡星组,其纤毛形态变化与阿米卡星组相似,但损坏程度较轻,修复较快。结论阿米卡星可对大鼠气道黏膜表面结构造成损害,氨溴索可减轻损害,促进气管黏膜的修复。

聚酯聚丙烯复合人工气管重建气管的实验研究

目的：探讨微孔聚酯聚丙烯复合人工气管重建气管的效果。方法：将１７只犬分成２组，在手术切除部分颈段气管后，Ｉ组（１２只）用６ｃｍ长的人工气管作置换，采用可吸收性合成（ｍａｘｏｎ）缝线吻合１１只，用聚丙烯（ｐｒｏｌｅｎｅ）缝线吻合１只。Ｉ组（５只）用４ｃｍ长的人工气管作置换，其中３只用ｍａｘｏｎ缝线吻合，２只用ｐｒｏｌｅｎｅ缝线吻合。结果：２组实验犬经术后最长３６９天的观察，存活并保持人工气管通畅者１４只（８２．４％），其中Ｉ组９只、Ｉ组５只。Ｉ组中３只因发生吻合口漏于术后１４～１５天死亡。本组人工气管有利于内壁长入成纤维细胞和被覆纤维结缔组织。术时应用舌骨下肌层严密包覆移植材料，术后未见人工气管发生漏气。２组中各１只采用ｐｒｏｌｅｎｅ缝线吻合犬分别在移植６５天和３６９天扫描电镜检查见有纤毛柱状上皮长入。

IL-17A对小鼠气管移植后早期气道上皮细胞的影响

目的 通过建立小鼠原位气管移植模型,探讨气管移植早期IL-17A对气道上皮细胞的影响.方法 选取19～ 21 g清洁级雄性C57BL/6小鼠（n=50）和BALB/c小鼠（n=20）,供受体按体质量配对后随机分为5组,对照组：正常C57BL/6小鼠（n=10）;A组：C57 BL/6（n=10） →C57BL/6（n=10）;B组：BALB/c（n=10） →C57 BL/6（n=10）;C组：BALB/c（n=5）→C57 BL/6（n=5）,注射anti-IL-17A中和抗体;D组：BALB/c（n=5）→C57 BL/6（n=5）,注射IgG;A、B组进一步随机分为3天、14天亚组（n=5）.术后第3天,采用实时荧光定量PCR技术检测A、B组移植气管中IL-17A mRNAⅡ表达水平,使用流式细胞技术检测气管引流淋巴结中γδ T细胞的比例.术后第14天,分别采用HE、Masson染色,观察各组移植气管组织病理学改变.结果 术后小鼠无死亡.术后第3天,B组移植气管组织中IL-17AmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）;B组小鼠气管引流淋巴结中γδ T细胞占CD3＋T细胞的比例明显高于A组（P＜0.05）.术后14天移植气管组织病理学检查提示：A组气道纤毛柱状上皮结构完整,黏膜下层无纤维组织增生;B、D组气道上皮由柱状变为扁平状上皮并部分脱落,黏膜下层纤维组织增生明显;C组气道纤毛柱状上皮结构较完整,黏膜下层可见纤维组织增生.4组小鼠气管管腔闭塞率分别为（31.21 ±2.82）％、（42.45±2.21）％、（39.04±1.98）％、（40.67±1.54）％,A、B组相比差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 IL-17A在气管移植免疫排斥的早期发挥重要作用,并介导气道上皮的损伤.

镍钛合金支架联合自体心包重建长段气管的动物实验

目的完善镍钛合金支架联合自体心包重建长段气管的手术流程,评价治疗效果及研究术后并发症。方法选取健康巴马香猪12只,体质量18-25 kg;取猪心尖周围心包组织包裹镍钛合金支架重建长段（6 cm）气管缺损。观测术后实验动物的生存状况及术后并发症,气管镜观察人工气管管腔新生上皮的性质及生长速度。结果 2只动物于术后早期分别死于感染和出血,7只于术后2-4个月因管腔中段增生、痰栓堵塞死亡;42周有3只动物存活,但有呼吸困难症状。术后1、2、3、4、5个月新生上皮平均爬行长度分别为1、3、5、7、10 mm;气管镜检查吻合口狭窄发生率分别为0（0/10）、0（0/9）、0（0/4）、33.3%（1/3）、33.3%（1/3）,管腔中段瘢痕增生发生率分别为20%（2/10）、66.7%（6/9）、75.0%（3/4）、66.7%（2/3）、100%（3/3）。术后7个月,气管镜发现人工气管中段的瘢痕增生较前有生长停滞、软化和缩小的趋势,呼吸道症状稍有缓解。尸检均可见人工气管中段瘢痕增生明显;病理检查示管腔中段增生为坏死组织和纤维组织。结论镍钛合金支架联合自体心包重建气管能保障气管管腔通畅,且支持气管上皮再生;人工气管内壁增生、继发痰栓堵塞是实验动物死亡的主要因素。

小鼠气管–支气管上皮细胞的气–液界面培养

目的建立一种小鼠气管–支气管上皮细胞气–液界面(ALI)培养及纤毛摆动频率测量的方法,最大程度还原气道上皮的生理功能。方法利用1 mg/mLⅪⅤ型链蛋白酶冷消化的方法获取BALB/c小鼠气管–支气管上皮细胞,筛选出最佳消化时长以保证所得细胞的数量及活力。差速贴壁法去除成纤维细胞后,接种于Ⅰ型鼠尾胶原预包被的Transwell小室,用不同培养基进行增殖期和ALI分化期培养。结果采用链蛋白酶冷消化12 h、14 h和16 h所得细胞数目分别为(1.78±0.33)×10^5、(1.93±0.26)×10^5和(2.01±0.28)×10^5,经台盼蓝染色活细胞率分别为(96.86±0.25)%、(94.73±1.63)%和(86.87±5.95)%。1周左右细胞铺满小室,继续ALI培养2~3周后光学显微镜下可见纤毛节律性摆动,电镜及免疫荧光均证实纤毛结构。培养所得细胞纤毛摆动频率与小鼠气管在体纤毛摆动频率与一致。结论本实验建立的气管–支气管上皮细胞分离、ALI培养及纤毛摆动频率测量体系简便、稳定、高效、可靠,为探索气道疾病的致病和治疗机制创造了基础,亦可为其他物种气道上皮和(或)其他器官上皮的培养提供参考依据。