榭皮黄酮通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路增强5-氟尿嘧啶对HepG2的化疗作用

目的研究榭皮黄酮(quercetin,Qu)影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组(不含任何药物的培养基孵育细胞24 h)、单独Qu组(含40μg/ml Qu的培养基孵育细胞24 h)、单独5-FU组(含50μmol/L 5-FU的培养基孵育细胞24 h)、Qu+5-FU联合处理组(含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同孵育细胞24 h)、单独Traf6抑制剂C25-140组(2μmol/L C25-140的培养基孵育细胞8 h)、C25-140+Qu+5-FU组(C25-140预处理细胞8 h,然后含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同处理细胞24 h)。采用CCK8法检测细胞活力,采用倒置显微镜记录细胞克隆数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot检测剪切的半胱氨酸蛋白酶-7(cleaved-caspase 7,Cle-caspase 7)、Clecaspase 3、剪切的聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,Cle-PARP)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,Traf6)、磷酸化转化生长因子-β活化激酶1(phosphorylation transforming growth factor-β-activated kinase 1,p-TAK1)和磷酸化核转录因子(phosphorylation nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)蛋白的表达水平。结果Qu(40μg/ml)、5-FU(50μmol/L)和Qu+5-FU组细胞相对活力分别为(82.3±3.1)%、(53.7±4.1)%和(42.4±4.4)%,均显著低于对照组的(100.0±3.4)%,差异有统计学意义(t=5.83、9.54、14.65,P均<0.05);Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞克隆数分别为534±26、236±25、115±42,均显著低于对照组的701±32(P均<0.05),且Qu+5-FU组显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(t=31.74,P<0.001;t=11.34,P=0.008)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组和Qu+5-FU组HepG2细胞凋亡率[(18.9±4.2)%vs(21.4±4.1)%vs(35.7±3.6)%vs(4.6±1.5)%]、Cle-caspase 7(0.11±0.02 vs 0.22±0.03 vs 0.32±0.03 vs 0.05±0.02)、Cle-caspase 3(0.13±0.02 vs 0.18±0.03 vs 0.28±0.03)和Cle-PARP(0.15±0.02 vs 0.24±0.03 vs 0.41±0.03 vs 0.08±0.02)表达水平均显著高于对照组,且Qu+5-FU组显著高于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。Qu(40μg/ml)组、5-FU(50μmol/L)组、Qu+5-FU组HepG2细胞Traf6(0.28±0.02 vs 0.19±0.03 vs 0.11±0.03 vs 0.38±0.02)、p-TAK1(0.23±0.02 vs 0.11±0.03 vs 0.04±0.03 vs 0.38±0.02)和p-NF-κB(0.28±0.02 vs 0.13±0.03 vs 0.05±0.02 vs 0.44±0.03)蛋白相对表达量均显著低于对照组,且Qu+5-FU组均显著低于Qu(40μg/ml)组和5-FU(50μmol/L)组(P均<0.05)。与对照组相比,C25-140组、Qu+5-FU组和Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞相对活力[(73.4±4.1)%vs(65.8±3.6)%vs(47.7±3.9)%vs(100±3.1)%]和细胞克隆数(456±26 vs 413±25 vs 305±42 vs 763±32)显著降低,细胞凋亡率[(24.4±4.1)%vs(29.9±3.7)%vs(51.2±3.7)%vs(3.9±5.2)%]显著升高(P均<0.05);与Qu+5-FU组比较,Qu+5-FU+C25-140组HepG2细胞活力和克隆数显著降低,细胞凋亡率显著升高(P均<0.05)。与对照组相比,Traf6 mimics组HepG2细胞相对活力[(152.4±6.3)%vs(100±3.5)%]、细胞凋亡率[(5.3±3.2)%vs(3.8±2.1)%]和细胞克隆数(978±26 vs 783±32)均显著升高(P均<0.05),Qu+5-FU组和Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞相对活力[(65.8±4.3)%vs(100±3.5)%;(79.4±4.9)%vs(100±3.5)%]和细胞克隆数(454±25 vs 783±32;623±42 vs 783±32)显著降低,细胞凋亡率[(34.7±4.4)%vs(3.8±2.1)%;(24.4±3.5)%vs(3.8±2.1)%]显著升高(P均<0.05)。与Qu+5-FU组相比,Traf6 mimics+Qu+5-FU组HepG2细胞活力和克隆数显著升高,细胞凋亡率显著降低(P均<0.05)。结论Qu通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路协同诱导5-FU对肝细胞癌的化学治疗作用。

Pellino1 SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF-κB信号转导的影响

目的:研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子-6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)介导的核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号转导的影响。方法:构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素(ubiquitin,Ub)质粒共转染至HEK-293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的磷酸化和NF-κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF-κB信号通路的影响。结果:与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF-κB P65的核转位,转染使Pellino1SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF-κB信号激活。结论:Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,最终促进TRAF6介导的NF-κB信号通路的激活。

基于NF-κB信号通路的玉屏风散加味含药血清对RLE-6TN细胞炎症反应的影响

目的观察玉屏风散加味含药血清对大鼠肺上皮Ⅱ型细胞RLE-6TN炎症反应的影响,基于核因子(NF)-κB信号通路探讨其作用机制。方法采用脂多糖诱导RLE-6TN细胞炎症反应,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松血清组和5%、10%、20%中药血清组,分别以不同血清干预细胞24 h。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,荧光染色检测细胞活性氧(ROS)含量,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量,RT-qPCR检测细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA表达,Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κBp65、IκBα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBαmRNA表达显著降低(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著升高(P<0.01);与模型组比较,20%中药血清组和地塞米松血清组细胞RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),IκBαmRNA表达显著升高(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论玉屏风散加味含药血清可减轻RLE-6TN细胞炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

GCG干预LMP1激活的NF-κB信号转导通路中的靶分子

为阐明在鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma,NPC)细胞中茶多酚干预EB病毒潜伏膜蛋白 1(latentmembraneprotein 1,LMP1)激活的NF κB信号转导通路中的靶分子 ,采用EBV阴性及阳性的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE1 LMP1细胞 ,利用噻唑蓝 (MTT)法 ,观察表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对CNE1和CNE1 LMP1细胞生存率的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对NF κB活性的作用 .利用间接免疫荧光法 ,观察EGCG对NF κB (p6 5 )核移位的影响 ,再分别提取CNE1和CNE1 LMP1的胞浆及胞核蛋白 ,通过蛋白质印迹分析EGCG抑制NF κB (p6 5 )的核移位后胞浆及胞核蛋白中NF κB (p6 5 )的变化 .采用蛋白质印迹分析EGCG对IκBα的磷酸化水平的影响 .采用瞬间转染及报道基因法观察EGCG对EGFR启动子活性的影响 ,并用蛋白质印迹分析EGCG对EGFR自身磷酸化的作用 .结果表明EGCG对鼻咽癌细胞的抑制作用有剂量依赖性 ,并可抑制NF κB的活性 .EGCG能抑制NF κB (p6 5 )的核移位 ,并抑制IκBα的磷酸化 .EGCG对NF κB信号通路下游的靶基因EGFR的启动子活性及自身磷酸化都有抑制作用 .由上述结果可以推断 ,EGCG对信号转导通路上的NF κB、NF κB (p6 5 )、IκBα、EGFR多个靶点分子具有干预作用 .LMP1是EB病毒编码的蛋白质 ,因此 。

基于NF-κB信号转导通路探讨加味补阳还五汤对肺纤维化小鼠的治疗作用

目的探讨加味补阳还五汤对肺纤维化小鼠的治疗作用及加味补阳还五汤各剂量组在小鼠肺组织中NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。方法BALB/cJ小鼠120只随机分成6组:对照组、模型组、强的松组(40.0 mg/kg)、加味补阳还五汤低、中、高剂量组。模型组、强的松组、加味补阳还五汤各剂量组小鼠使用博莱霉素构建肺纤维化模型,建模成功后,强的松组及加味补阳还五汤各剂量组给予醋酸强的松混悬液(0.32 mg/mL)以及各剂量的加味补阳还五汤(10、20、40 mg/mL)灌胃,连续14 d。试验结束后,处死小鼠,获取肺组织进行小鼠肺泡炎级别、肺纤维化级别评分,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及免疫组织化学法测定肺组织核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA和蛋白水平,Elisa法检测肺组织HYP、IL-4、TNF-α蛋白水平。结果与对照组比较,模型组肺泡炎级别评分、肺纤维化级别评分、肺组织NF-κB p65 mRNA和蛋白、HYP、IL-4、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,强的松组、加味补阳还五汤各剂量组肺泡炎级别评分、肺纤维化级别评分、肺组织NF-κB p65 mRNA和蛋白、HYP、IL-4、TNF-α蛋白表达降低(P<0.05),且随着加味补阳还五汤给药剂量的增加,肺泡炎级别评分、肺纤维化级别评分、肺组织NF-κB p65 mRNA和蛋白、HYP、IL-4、TNF-α蛋白表达逐渐降低(P<0.05);与强的松组相比,加味补阳还五汤低、中剂量组肺泡炎级别评分、肺纤维化级别评分、肺组织NF-κB p65 mRNA和蛋白、HYP、IL-4、TNF-α蛋白表达升高(P<0.05);高剂量组肺泡炎级别评分、肺纤维化级别评分、肺组织NF-κB p65 mRNA和蛋白、HYP、IL-4、TNF-α蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论加味补阳还五汤可以抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化,其机制与加味补阳还五汤抑制NF-κB p65活化,继而抑制炎症因子及纤维因子的表达有关。

TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响

目的构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响区域。方法采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证。结果成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应。结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应。

miR-146a-5p抑制TRAF6/NF-кB信号通路影响滋养细胞的炎症反应

目的:探讨微小核糖核酸(miR)-146a-5p与子痫前期的关系及作用机制。方法:对体外培养绒毛膜癌细胞JEG-3,经脂多糖(LPS)诱导后,与空白对照组相比,检测在LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p和TRAF6的表达。设计分组分为control组、LPS组、miR-146a-5p mimic组、miR-146a-5p inhibitor组。通过QPCR定量检测各组JEG-3细胞中miR-146a-5p以及白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)的mRNA水平;利用Western Blot检测JEG-3细胞内TRAF6/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:(1)miR-146a-5p mimic组的miR-146a-5p表达明显高于其余3组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,LPS诱导的JEG-3细胞中miR-146a-5p的表达量增加,TRAF6表达量明显下调(P<0.05)。(3)与对照组比较,加入miR-146a mimic后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显下降(P<0.05),加入miR-146a inhibitor后IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),与LPS组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)Western Blot结果显示加入miR-146a mimic后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达较对照组明显下降;加入miR-146a inhibitor后JEG-3细胞内TRAF6、NF-κB蛋白的表达则明显升高。结论:miR-146-5p可能通过抑制TRAF6/NF-κB信号通路影响子痫前期母胎界面的炎症反应。

五味子乙素介导Traf6/NF-κB信号通路抑制心肌细胞肥大实验研究

目的:研究五味子乙素抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导心肌细胞肥大的作用及其机制。方法:原代培养心肌细胞,用LPS(1 mg/L)诱导心肌细胞肥大,考察IκBα抑制剂BAY11-7082和不同剂量五味子乙素对心肌细胞肥大的影响。采用计算机图像分析系统观察细胞大小;考马斯亮蓝法分析细胞总蛋白量;ELISA试剂盒检测白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)表达量;免疫印迹技术检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)和Traf6/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果:与LPS诱导组相比,五味子乙素和BAY11-7082均可以抑制LPS诱导的心肌细胞肥大,体现在蛋白含量降低,细胞体积减小,ANP蛋白表达降低(P<0.05);五味子乙素还能够降低炎症反应,表现在细胞外液中炎症因子IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),Traf6、p65蛋白表达量降低(P<0.05)及IκBα蛋白水平升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。此外,高剂量五味子乙素与BAY11-7082对心肌细胞肥大的保护作用相近。结论:五味子乙素能抑制LPS诱导原代心肌细胞肥大,对心肌细胞的保护作用主要通过抑制Traf6/NF-κB信号通路的活化来实现。

NF-κB信号转导通路和肿瘤发生、转移关系的研究进展

大量研究表明,NF-κB信号转导通路可以促进肿瘤的发生。许多炎症因子、致癌剂、促癌剂和肿瘤微环境都可以激活NF-κB。NF-κB蛋白本身和其调控的蛋白与肿瘤的发生、增殖、抗凋亡、侵袭、血管生成和转移有关。在多种肿瘤中NF-κB都处于持续性激活状态。本文就NF-κB信号通路和肿瘤发生和转移之间关系的研究新进展做一综述。

DOR-β-arrestin1-Bcl-2/NF-κB信号转导通路在溃疡性结肠炎发病机制中的研究

溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）是慢性非特异性肠道炎性疾病，其在临床上有长期性、慢性、难治性和易复发的特点。肠道微环境改变后，易感人群肠道中菌群突破肠上皮屏障，使DOR-β-arrestinl-Bcl-2和NF-κB信号转导通路异常活化，分泌大量炎性细胞因子，导致T淋巴细胞在肠黏膜内过度集聚，凋亡抵抗增加，破坏肠道免疫稳态，最终导致UC发生。

TRAF6在B淋巴瘤细胞系NF-κB和AP-1信号传导通路中的作用

目的利用人B淋巴瘤细胞系模型探讨TRAF6在调控NF-κB和AP-1信号系统中的作用。方法将融合有黄色荧光素(YFP)的功能缺失型TRAF6(DN-TRAF6)质粒和小干扰RNA-TRAF6质粒转染至人类B淋巴细胞系,过夜培养后经流式细胞仪或G418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法研究TRAF6对NF-κB通路中IκBα磷酸化和转录因子(P65,P50和c-Rel)向细胞核内转移以及AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和转录因子(C-FOS,C-JUN,ATF和CREB)向细胞核内转移等的影响。结果B细胞过度表达DN-TRAF6或转染小干扰RNA-TRAF6均可抑制IκBα和JNK的磷酸化水平以及P65、P50、c-Rel和c-Fos、C-JUN的核内转录。结论TRAF6可选择性地作用于人B淋巴细胞的NF-κB和AP-1信号传导系统中部分激酶,在上述两条信号系统活化中起重要作用。

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。

腰椎间盘突出症Pfirrmann分级与NF-κB信号转导通路相关性研究

目的:探讨Pfirrmann分级与腰椎间盘突出症患者血清NF-κB蛋白水平及相关炎性因子含量的相关性。方法:根据Pfirrmann分级,选取腰椎间盘突出症患者60例(观察组)及健康自愿者15例(正常对照组)。正常对照组为Ⅰ级组,观察组(Ⅱ~Ⅴ组)分为4组各15例。LISA法检测患者血清NF-κB蛋白及炎性因子IL-6、MMP-3含量。结果:PfirrmannⅤ级组患者腰腿痛VAS评分及ODI指数明显高于Ⅱ~Ⅳ级组(P﹤0.001);Pfirrmann I级组患者血清NF-κB蛋白及炎性因子IL-6、MMP-3含量明显低于PfirrmannⅡ~Ⅴ级组(P﹤0.001);PfirrmannⅤ级组患者血清NF-κB蛋白及炎性因子IL-6、MMP-3含量明显高于Ⅱ~Ⅳ级组患者(P﹤0.05)。Pfirrmann分级与患者血清NF-κB蛋白及炎性因子IL-6、MMP-3含量呈显著正相关(P﹤0.01)。结论:NF-κB蛋白及炎性因子IL-6、MMP-3与椎间盘的退行性改变有关,其含量越高椎间盘退变越严重。

IKK/NF-κB信号转导通路与危重病

NF κB可调节众多的基因转录 ,尤其是涉及炎症和急性应激反应的基因转录 ,从而启动一系列的细胞级联和全身性反应 ,并最终导致器官功能不全 ,提示IKK NF κB信号转导通路在危重病中有重要的作用。

颠倒散对玫瑰痤疮小鼠炎症反应及IL-6/STAT3/NF-κB通路的影响

目的探讨颠倒散(DDS)对玫瑰痤疮小鼠炎症反应、白细胞介素-6(IL-6)/信号转导子及转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路的影响。方法皮内注射LL37建立玫瑰痤疮小鼠模型,随机分为模型组、DDS低剂量(DDS-L,0.5 g/mL DDS)、中剂量(DDS-M,1 g/mL DDS)、高剂量(DDS-H,2 g/mL DDS)组及DDS-H+重组IL-6蛋白(rIL-6)组(2 g/mL DDS+0.1 mg/kg rIL-6),并以皮内注射相同部位生理盐水的小鼠为对照组,每天1次,干预7 d;干预结束后,对小鼠注射部位皮肤红斑进行评分及面积测定;收集皮损组织,ELISA检测IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),HE染色观察皮损组织病理学变化,甲苯胺蓝检测肥大细胞浸润,免疫组化检测CD4 T阳性细胞数,Western blot检测IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠注射部位皮肤组织损伤严重,皮肤红斑评分及红斑面积增加,皮损组织中IL-6、IFN-γ及TNF-α水平增高,肥大细胞浸润数、CD4 T阳性细胞数增加,IL-6、STAT3及NF-κB蛋白表达显著增加(P均<0.05);与模型组比较,DDS-L组、DDS-M组、DDS-H组病理损伤不同程度减轻,皮肤红斑评分及红斑面积减小,皮损组织中IL-6、IFN-γ及TNF-α水平降低,肥大细胞浸润数、CD4 T阳性细胞数减少,IL-6、STAT3及NF-κB蛋白表达显著降低(P均<0.05),不同剂量DDS组间比较,差异有统计学意义(P均<0.05);rIL-6逆转了对DDS-H对玫瑰痤疮小鼠的保护作用。结论DDS减少玫瑰痤疮小鼠的炎症反应,可能与抑制IL-6/STAT3/NF-κB通路有关。

遍在蛋白调节NF-кB信号转导通路的研究进展

NF-κB信号通路参与了多种基因的转录调控和很多重要的生理和病理过程。遍在蛋白在其中的不同的阶段发挥了不同的作用。一方面通过遍在蛋白化IκB,促使其被26S蛋白酶体识别而降解,从而释放出NF-κB进入核内,调控相应基因的表达;另一方面通过遍在蛋白化TRAF6来激活TAKI,然后进一步活化IKK。后一种途径为了解NF-κB信号通路的调控提供了新的线索,并为遍在蛋白功能的研究开辟了新的方向。

安肠汤通过TRAF6/IRAK1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠的抑制作用研究

目的:从TRAF6/IRAK1/NF-κB信号通路角度观察安肠汤对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用及机制。方法:选择60只实验大鼠,除空白组10只外,其余各组均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid sol,TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型,造模成功大鼠分为模型组,美沙拉嗪组,安肠汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组、模型组灌胃生理盐水,美沙拉嗪组采用美沙拉嗪混悬液灌胃,安肠汤各剂量组给予对应剂量安肠汤灌胃。给药14天后处死各组大鼠。观察各组大鼠结肠病理改变;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平;Western blot法检测结肠组织中TNF受体关联因子6重组蛋白(recombinant tnf receptor associated factor 6,TRAF6)、白细胞介素1受体相关激酶(recombinant interleukin 1receptor associated kinase 1,IRAK1)、磷酸化细胞核因子NF-κB抗体(phosphorylated nuclear factor NF-κB antibody,p-NF-κB)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白的表达;通过定量聚合酶链反应测定大鼠结肠组织中TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组结肠黏膜病理受损严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,结肠组织中TRAF6、IRAK1、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达上调(P<0.05)。与模型组相比,安肠汤各剂量组和美沙拉嗪组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05);结肠组织中TRAF6、IRAK1、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达下调(P<0.05)。结论:安肠汤对TNBS诱导的UC大鼠有治疗作用,其作用可能与其调节TRAF6/IRAK1/NF-κB通路及相关炎症因子,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤有关。

TLRs/IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路介导神经炎症参与神经病理性痛的研究进展

TLRs/IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路参与炎症形成和免疫应答,并且其介导的神经炎症在神经病理性痛的发生发展中起着至关重要的作用,这将为药物干预神经病理性痛提供新的治疗靶点。为此,本文就TLRs/IRAK1/TRAF6/NF-κB信号通路介导的神经炎症参与神经病理性痛的研究进展进行综述,为临床治疗神经病理性痛提供依据。

紫草素通过调节RANKL/RANK/TRAF6及其介导的NF-κB/MAPKs信号通路与氧化应激来改善激素性骨质疏松

目的评估紫草素对激素诱导的大鼠骨质疏松的影响及其潜在机制。方法不同浓度紫草素处理RAW264.7细胞系,CCK8实验评估紫草素对细胞活力的影响;将细胞分为5个组:对照组、地塞米松(骨质疏松诱导剂)组、地塞米松+重组人甲状旁腺(抗骨质疏松剂)组、地塞米松+紫草素0.3μmol·L^(-1)组,及地塞米松+紫草素1.2μmol·L^(-1)组,通过TRAP染色及骨吸收面积测定评估紫草素对破骨细胞功能影响。构建地塞米松诱导大鼠骨质疏松大鼠模型,并分为5个组(n=8):地塞米松组、地塞米松+重组人甲状旁腺素组、地塞米松+紫草素0.3μmol·L^(-1)组与地塞米松+紫草素1.2μmol·L^(-1)组,设置正常对照组,分别给予:0.9%NaCl6 mL·kg^(-1),每3天PTH 20μg·kg^(-1),每天紫草素0.5 mg·kg^(-1)(0.3μmol·L^(-1)),每天紫草素2 mg·kg^(-1)(1.2μmol·L^(-1)),0.9%NaCl 6 mL·kg^(-1)共3周;ELISA检测血清I型胶原蛋白(CTX)、血清组织蛋白酶K(Cathepsin K)及氧化应激相关指标变化;HE染色检测大鼠骨结构变化,双能X线扫描检测大鼠骨密度(BMD)变化;Western blot及免疫荧光检测紫草素体外对NF-κB/MAPKs信号通路的影响,Western blot及qRT-PCR检测RANKL相关蛋白及mRNA表达,Western blot检测紫草素对RANKL/TRAF6的阻断作用。结果1.2μmol·L^(-1)紫草素对细胞存活率影响最小;紫草素降低了TRAP阳性细胞数量(P<0.05);紫草素降低了骨吸收面积(P<0.05);紫草素降低了CTX及Cathepsin K表达(P<0.05),且1.2μmol·L^(-1)紫草素组降低更显著(P<0.05);紫草素提高了大鼠股骨BMD(P<0.05),且1.2μmol·L^(-1)紫草素组上升更显著(P<0.01);紫草素可以逆转地塞米松引起的骨小梁减少与变薄;紫草素提高了大鼠体内SOD及GSH表达水平(P<0.05),并降低了MDA表达水平(P<0.05);紫草素体外抑制NFκB通路相关蛋白磷酸化;紫草素抑制RANK、RANKL、TRAF6、c-fos及NFATc1蛋白和mRNA表达;且紫草素阻断RANKL诱导剂促进TRAF6表达。结论紫草素可以通过抑制RANKL/RANK/TRAF6及其介导的NF-κB/MAPKs信号通路来改善大鼠激素诱导的骨质疏松。