SCL／TAL-1基因沉默对EPO诱导的K562细胞红系分化的影响

目的通过RNA干扰技术降低SCL／TAL-1mRNA的表达，探讨SCL／TAL-1在K562细胞红系分化中的作用。方法以EPO诱导白血病细胞系K562细胞向红系分化为模型，将靶向SCL／TAL-1基因的特异性短发夹RNA（shRNA）慢病毒质粒pTRIP—dU3-RNAiTALh—EF1a—GFP转染K562细胞，RT—PCR检测其SCL／TAL—l和红系相关基因RhD、血型糖蛋白A（GPA，即CD253a）、CD47mRNA表达水平变化，流式细胞术分析红系分化抗原CD71、CD253a的表达，并以空载体质粒pTRIP—dU3-RNAi—luc—EF1-GFP转染的K652细胞为对照。结果①通过慢病毒转染系统将含SCL／TAL．1shRNA的质粒及空载体质粒转染K562细胞48h，绿色荧光蛋白（GFP）＋细胞占总细胞的95％以上，表明感染率达到95％以上。②RT—PCR结果显示转染特异性shRNA的K562细胞SCL／TAL-1mRNA表达水平比空载体对照明显下调（P〈0．05），红系抗原CIM7和RhDmRNA水平也比对照组明显下调（P〈0．05），GPA有所下降，但没有CIM7和RhD下降程度大。③流式细胞术检测到SCL／TAL-1低表达组红系分化抗原CD71、CD235a表达降低，表达率分别是10．4％、76．5％，而在对照组的表达率分别为94．3％、83．6％。结论研究结果提示转录因子SCL／TAL．1参与了红系定向分化。