活动性肺结核患者血清ATG3和FOXO3水平变化对患者病情进展及预后评估的相关性分析

目的分析活动性肺结核患者血清中自噬相关基因3(ATG3)和叉头转录因子O亚型3(FOXO3)表达水平变化以及与患者病情进展及预后的关系。方法以2019年9月~2022年9月于本院就诊的91例活动性肺结核患者(观察组)为研究对象,另选取同时期于本院体检的91例健康体检者作为对照组;酶联免疫吸附法检测血清中ATG3和FOXO3表达水平;利用Spearman相关分析活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度之间的相关性;采用Logistic回归分析影响活动性肺结核患者预后的因素;采用ROC曲线分析血清中ATG3和FOXO3表达水平对活动性肺结核患者预后评估的价值。结果与对照组相比,观察组血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与轻症组相比,重症组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降(P<0.05);与预后不良组相比,预后良好组患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著升高(P<0.05);预后良好组与预后不良组患者ESR、PCT、CRP、TNF-α、INF-γ和IL-2相比差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平与患者病情严重程度呈负相关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,ESR、CRP、ATG3和FOXO3为影响活动性肺结核患者预后不良的因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清中ATG3和FOXO3表达水平联合预测活动性肺结核患者预后较ATG3和FOXO3单一指标预测效果更优(P<0.05)。结论活动性肺结核患者血清中ATG3和FOXO3表达水平显著下降,且与活动性肺结核病情严重程度相关,二者联合对活动性肺结核患者预后具有较高的评估价值。

YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

联合检测外周血TIRAP、FOXO3a、HBP预测脓毒症患者近期预后的价值及意义

目的探讨联合检测外周血TOLL/白介素-1受体相关蛋白(TIRAP)、叉头蛋白转录因子3a(FOXO3a)、肝素结合蛋白(HBP)对脓毒症患者近期预后的预测价值。方法回顾性收集2020年1月—2022年12月本院205例脓毒症患者的临床资料,根据28 d生存情况分为生存组157例、死亡组48例。统计两组外周血TIRAP、FOXO3a、HBP及急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分。分析TIRAP、FOXO3a、HBP与APACHEⅡ、SOFA评分的相关性。采用Logistic回归方程分析TIRAP、FOXO3a、HBP交互作用对脓毒症近期预后的影响。评价TIRAP、FOXO3a、HBP联合预测脓毒症近期预后的价值。结果死亡组入院第1、3、7天外周血TIRAP、HBP水平及APACHEⅡ、SOFA评分高于生存组,FOXO3a水平低于生存组(P<0.05);入院第1天,脓毒症死亡患者TIRAP、HBP水平与APACHEⅡ、SOFA评分呈正相关,FOXO3a与APACHEⅡ、SOFA评分呈负相关(P<0.05);TIRAP×FOXO3a×HBP在脓毒症近期预后中存在交互作用(P<0.05);入院第1天外周血TIRAP+FOXO3a+HBP联合预测预后的曲线下面积(AUC)大于TIRAP+FOXO3a、TIRAP+HBP、FOXO3a+HBP,预测效能更佳(P<0.05)。结论脓毒症预后不良患者外周血TIRAP、HBP水平升高,FOXO3a水平降低,其水平变化与病情严重程度、近期预后有关,联合检测其水平可提高近期预后的预测效能。

Foxp3在小鼠肺发育中的动态表达及意义

目的:通过分析叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)在小鼠肺发育过程中的表达及其与肺发育相关标志物之间的关系,探讨Foxp3在肺发育中的可能作用。方法:根据小鼠肺发育的进程,选取胎鼠及新生鼠分为6组,分别于孕17.5 d及出生后1、4、7、14、21 d留取肺组织,HE染色观察肺组织形态,免疫组织化学染色检测CD31含量并观察肺微血管密度。qRT-PCR检测Foxp3及肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)、血管生成素-1(angiopoietin 1,Ang-1)mRNA表达,蛋白质印迹法检测Foxp3及SP-C、VEGF-A、Ang-1蛋白表达。结果:肺组织内Foxp3 mRNA在孕17.5 d小管期表达最高,后呈现不断减少趋势。SP-C mRNA在小鼠出生后1 d表达最高,随后逐渐减弱,直至肺泡化晚期。VEGF-A、Ang-1 mRNA在孕17.5 d表达最高,之后呈现不断减少趋势,最终趋于稳定。Foxp3蛋白在小管期已有表达,且在小管期及囊泡期表达最高,其后逐渐趋于平稳,VEGF-A及Ang-1在小管期及囊泡期表达亦最高,后逐渐减少;SP-C表达于出生后1 d达到最高,随后逐渐减少,并于肺泡化中晚期趋于平稳。相关性分析显示,Foxp3与SP-C、VEGF-A及Ang-1存在相关性(r分别为0.661、0.630和0.738)。结论:Foxp3在胎肺期及出生后早期呈现动态表达,Foxp3在小管期及囊泡早中期的高表达与SP-C、VEGF-A及Ang-1呈正相关,提示Foxp3可能促进肺泡上皮细胞及肺血管内皮细胞的增殖,参与肺发育过程。

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

颅脑损伤术后颅脑感染血清NLRP3、SAA及NFκB的临床意义

目的探讨血清寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、淀粉样蛋白A(SAA)及核转录因子(NFκB)在颅脑损伤术后颅脑感染中的诊断价值。方法选择2020年6月至2022年6月江苏省如皋市人民医院接诊的70例颅脑损伤患者为研究对象,根据感染情况将感染者设为感染组(n=19),未感染者设为对照组(n=51),分析血清NLRP3、SAA及NFκB在颅脑损伤术后颅脑感染中的诊断价值。结果感染组患者血清NLRP3、SAA及NFκB水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);NLRP3、SAA及NFκB水平:轻度感染<中度感染<重度感染,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者血清NLRP3、SAA及NFκB水平显著高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示,血清NLRP3预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.634,灵敏度为63.43%,特异度为67.40%,截断值为114.02 pg/mL;血清SAA预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.715,灵敏度73.50%,特异度为69.00%,截断值为30.99 mg/L;血清NFκB预测颅脑损伤术后颅脑感染的AUC为0.914,灵敏度为81.40%,特异度为70.00%,截断值为38.27μg/mL,联合检测较单独检测特异度、准确度更高(P<0.05)。结论血清NLRP3、SAA及NFκB在颅脑损伤术后颅脑感染患者中均异常高表达,且三指标联合检测颅脑损伤术后颅脑感染诊断效能更高,临床应用价值高。

HPV DNA负荷量、辅助性T细胞17、FoxP3+调节性T细胞及炎症因子与高危型HPV感染的相关性分析

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)DNA、辅助性T细胞17(Th17)、叉头状转录因子3阳性(FoxP3^(+))调节性T细胞(Treg)及宫颈灌洗液中炎症因子与高危型HPV感染的相关性,为高危型HPV感染防治提供新思路。方法将2020年9月至2021年2月该院收治的高危型HPV感染患者100例纳入研究作为研究组,然后将其中50例高危型HPV16/18阳性患者作为HPV16/18组,50例其他12种高危型阳性病例作为其他亚型组。另外,选取同期体检的健康女性作为对照组(n=50)。比较研究组和对照组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中炎症因子[白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A]水平,比较HPV16/18组和其他亚型组各项指标水平,比较不同宫颈病变患者各项指标水平。分析各项指标与高危型HPV感染、宫颈病变的相关性,以及对宫颈病变患者高危型HPV感染的诊断价值。结果研究组HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平均高于对照组(P<0.05),HPV16/18组各项指标水平均高于其他亚型组(P<0.05)。不同宫颈病变患者各项指标水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA负荷量、FoxP3^(+)Treg、Th17及宫颈灌洗液中IL-10、TNF-α、IL-17A水平与高危型HPV感染分型(HPV16/18=1,其他亚型=2)均呈负相关(P<0.05),与宫颈病变(宫颈上皮内瘤变Ⅰ级=1,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级=2,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级=3,宫颈癌=4)均呈正相关(P<0.05)。各项指标联合诊断高危型HPV16/18阳性的曲线下面积(AUC)为0.911(95%CI:0.837~0.959),大于各指标单独诊断。结论高危型HPV感染患者HPV DNA负荷量、Th17、FoxP3^(+)Treg及炎症因子水平异常,与高危型HPV感染分型、宫颈病变密切相关,而且HPV DNA负荷量与Th17、FoxP3^(+)Treg、炎症因子相关,各项指标联合检测可为临床防治高危型HPV持续感染提供可靠依据。

2型糖尿病周围神经病变患者血清FOXO3a、PDGF表达及临床意义

目的 探究2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清叉头盒O类转录因子-3a(FOXO3a)、血小板源性生长因子(PDGF)表达及临床意义。方法 选取2020年12月—2022年12月中部战区总医院接收的110例2型糖尿病患者作为研究对象。根据是否并发DPN将患者分为无并发症组(NDPN组)和周围神经病变组(DPN组),分别有45和65例,随机选取同期在该院体检的健康人群30例作为对照组(NC组)。采集受试者的一般资料及血脂、血糖等相关生化指标。采用酶联免疫吸附试验检测3组受试者血清FOXO3a、PDGF水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清FOXO3a、PDGF水平对2型糖尿病发生DPN的预测价值。结果 各组年龄、病程比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。各组性别构成、体质量指数、舒张压、收缩压、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、肌酐、尿素氮水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组与DPN组动脉粥样硬化、视网膜病变、降压药使用史、注射胰岛素、服用二甲双胍构成比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹C肽、踝肱指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NDPN组、DPN组糖化血红蛋白、空腹血糖水平较NC组高(P <0.05),DPN组运动神经传导速度、感觉神经传导速度水平较NDPN组低(P <0.05)。NDPN组、DPN组FOXO3a、PDGF水平较NC组高(P <0.05),DPN组FOXO3a、PDGF水平较NDPN组高(P <0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清FOXO3a、PDGF以及联合诊断糖尿病患者是否发生DPN的曲线下面积分别为0.695(95%CI:0.590,0.779)、0.636(95%CI:0.539,0.726)、0.732(95%CI:0.639,0.812),敏感性分别为80.00%(95%CI:0.733,0.848)、92.31%(95%CI:0.856,0.977)、89.23%(95%CI:0.838,0.954),特异性分别为55.56%(95%CI:0.438,0.654)、33.33%(95%CI:0.238,0.452)、51.11%(95%CI:0.416,0.597)。结论 2型糖尿病DPN患者体内血清FOXO3a、PDGF水平异常,提示其与2型糖尿病周围神经病变发生、发展有相关性。

组织内TRIM3及FoxO1表达与原发性肝癌患者病理特征及预后间的关系分析

目的探讨组织内三重基序蛋白3(TRIM3)及叉头转录因子O家族1(FoxO1)表达与原发性肝癌(PHC)患者病理特征及预后间的关系。方法回顾性分析2018年1月—2019年12月南京医科大学附属淮安第一医院收治的119例PHC患者的临床资料。比较PHC患者肝癌组织与癌旁组织中的TRIM3、FoxO1表达,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的病理特征,比较不同TRIM3及FoxO1表达PHC患者的预后。结果PHC患者肝癌组织中TRIM3、FoxO1阳性率(46.22%、42.02%)显著低于癌旁组织(75.63%、79.83%)(P<0.05)。TRIM3阳性患者肿瘤大小<5 cm、高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于TRIM3阴性患者(P<0.05),FoxO1阳性患者肿瘤大小<5 cm、单发、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的占比显著高于FoxO1阴性患者(P<0.05)。肝癌组织内TRIM3阳性患者、TRIM3阴性患者3年生存率分别为61.82%、31.25%,差异有统计学意义(Log Rank=10.242,P=0.001);FoxO1阳性患者、FoxO1阴性患者3年生存率分别为60.00%、34.78%,差异有统计学意义(Log Rank=6.978,P=0.008)。结论组织内TRIM3及FoxO1表达与PHC患者病理特征及预后显著相关,可作为评估PHC患者病情及预后的重要指标。

甲状腺乳头状癌组织中肿瘤转移相关基因1、叉头翼螺旋转录因子3水平变化与临床病理特征及淋巴转移的关系

目的:探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)、叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)淋巴转移患者中的作用及临床意义。方法:选取手术治疗的111例PTC患者为研究对象,收集患者的癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察组织中MTA1、FOXP3表达情况;采用多因素Logistic回归风险模型分析影响PTC淋巴转移的因素。结果:111例PTC组织标本中,MTA1的阳性表达率(MTA1阳性例数/癌组织总例数)为78.38%(87/111)高于癌旁组织17.12%(19/111),FOXP3在PTC组织中的阳性表达率(FOXP3阳性例数/癌组织总例数)为70.27%(78/111)高于癌旁组织13.51%(15/111),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman等级相关分析结果显示MTA1与FOXP3表达呈正相关(r=0.532,P=0.000);PTC患者癌组织中MTA1与FOXP3表达与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05);单因素分析结果显示淋巴转移患者与未转移患者在性别、病灶数、包膜侵犯、TNM分期、脉管侵犯、MTA1及FOXP3等病理特征方面比较有统计学差异(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示性别、病灶、TNM分期、包膜侵犯及MTA1、FOXP3表达均是影响PTC淋巴转移的危险因素(均P<0.05)。结论:MTA1、FOXP3在PTC患者癌组织中表达均升高,其表达水平与包膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期有关,可作为评估PTC淋巴转移的有效指标。

FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^(-1)DAPT,作为0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^(-1)DAPT、1.0mg·L^(-1)Dox和1.0mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT,作为0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组。Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平,CCK-8和Western blotting法检测0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞的IC50值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平,Western blotting法检测0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白(P-gp)、Notch1和Hes1蛋白表达水平。结果:与空白对照和si-NC组比较,si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),增殖活性和IC50值降低(P<0.05或P<0.01),细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与1.0 mg·L^(-1)Dox组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性,其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关。

排毒保肾丸对糖尿病肾病大鼠炎症小体NLRP3表达及NF-κB信号通路的影响

目的:探究排毒保肾丸对糖尿病肾病(DKD)大鼠炎症小体核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:48只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、排毒保肾丸组、阳性对照组(氯沙坦组)。模型组、排毒保肾丸组和氯沙坦组建立DKD大鼠模型,饲以高脂高糖饲料并腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)。排毒保肾丸组、氯沙坦组分别灌胃排毒保肾丸、氯沙坦,对照组、模型组灌胃给予等量生理盐水,连续8周。8周后测定尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,处死大鼠并留取肾脏组织。ELISA检测血清IL-6、IL-1β及TNF-α含量;HE染色观察肾脏组织形态学改变;Masson染色观察肾脏组织纤维化改变;免疫组化染色及Western blot检测NLRP3、NF-κB p65、天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾脏组织损伤严重,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著增加(均P<0.05);与模型组相比,排毒保肾丸组和氯沙坦组肾脏组织损伤减轻,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论:排毒保肾丸能够有效改善DKD损伤,抑制机体炎症反应,可能通过抑制炎症小体NLRP3表达和NF-κB信号通路发挥保护作用。

黄芪莪术药对调控Akt/FoxO3a信号通路对胃癌前病变的影响研究

目的 基于蛋白激酶B(Akt)/叉头状转录因子O亚族3(FoxO3a)通路探究黄芪-莪术药对逆转胃癌前病变的机制。方法 取48只雄性Wistar大鼠,随机选择12只作为正常组,其余大鼠采用甲基硝基亚硝胍(MNNG)复合造模法建立胃癌前病变模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黄芪-莪术组、叶酸组,每组10只。正常组和模型组给予蒸馏水灌胃,黄芪-莪术组给予黄芪-莪术水煎浓缩液3.6 g/kg灌胃,叶酸组给予叶酸1.8 mg/kg灌胃,均1次/d,连续灌胃10周。观察大鼠日常生活情况、体重、精神状态,HE染色观察胃黏膜组织病理形态,RT-PCR法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、Beclin1、LC3-Ⅱ、p62 mRNA表达情况,Western blot法检测胃组织中Akt1、FoxO3a、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠体重、食量、活力下降,精神变差;胃黏膜见腺体增大,腺体间细胞增生,少量炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。与模型组比较,黄芪-莪术组和叶酸组大鼠精神、食量及活力均有好转;胃黏膜腺体细胞排列较为整齐紧密,未见出血、炎症细胞浸润;胃组织中Akt1、p62 mRNA相对表达量和Akt1、LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Beclin1、FoxO3a、LC3-ⅡmRNA相对表达量和FoxO3a蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论 黄芪-莪术药对可一定程度逆转大鼠胃癌前病变,其可能是通过影响Akt/FoxO3a信号通路,激活增强体内自噬系统从而清除胃癌前病变细胞实现的。

敲低NOD2通过调控(p)NF-κB/STAT3改善肝细胞癌细胞炎症反应

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)对肝细胞癌(HCC)细胞炎症反应的影响和机制。方法 培养HCC细胞。Western blot检测NOD2在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)建立NOD2的敲低RNA(siNOD2组)用来抑制NOD2的表达,阴性对照为siNC组,使用这二者处理HCC细胞。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB P65、STAT3、NOD2的表达,并检测磷酸化的(p-)NF-κB P65以及磷酸化的(p-)STAT3的表达水平。ELISA法测定培养HCC细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。在siNOD2处理HCC细胞的基础上,用NF-κB/STAT3的激活剂重组人Lipocalin-2(rhLipocalin-2)蛋白进行处理(siNOD2+rhLipocalin-2组),检测细胞增殖率、凋亡率和炎症因子水平。结果 与正常肝细胞相比,HCC细胞中NOD2的表达水平显著上调(P<0.05)。与siNC组相比,siNOD2组的NOD2、p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著下调、细胞增殖率降低,细胞凋亡率增高,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均下调(均P<0.05)。而与siNOD2组相比,siNOD2+rhLipocalin-2组的p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著上调,细胞增殖率增高,细胞凋亡率降低,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均上调(均P<0.05)。结论 敲低NOD2通过调控NF-κB/STAT3通路抑制HCC细胞的炎症反应,该结果为HCC治疗提供了一个新的潜在靶点。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

T盒转录因子3和5基因多态性与指长比的关联性

目的:分析T盒转录因子3/5(TBX3/TBX5)基因5个位点(rs2242442、rs1061651、rs8853、rs11067101、rs6489956)多态性与指长比(2D∶4D)间的关联性。方法:采用体质测量法和多重PCR检测法,分析799名宁夏汉族大学生双手2D∶4D及TBX3和TBX5基因位点多态性的分布特征及其间的关系。结果:宁夏大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性;TBX3和TBX5基因5个位点基因型、等位基因频率在不同性别间的差异均无统计学意义;不论男性还是女性,5个SNPs位点多态性与2D∶4D均无显著关联。结论:宁夏汉族大学生群体2D∶4D存在显著性别差异,尚未发现TBX3和TBX5基因位点多态性与2D∶4D的形成有关。

LncRNA HAGLR激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体对胫骨骨折愈合的影响

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)HAGLR对胫骨骨折(TF)小鼠的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达和骨折愈合的影响并探讨机制。方法体外对成骨细胞MC3T3-E1沉默HAGLR,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,qPCR法检测骨碱性磷酸酶(BALP)和骨钙素的表达。Western blot法检测RUNX2、磷酸化RUNX2(p-RUNX2)以及NLRP3、半胱天冬酶1(Caspase1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。通过小鼠TF手术建立TF小鼠模型,在模型小鼠体内过表达HAGLR,并在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2或加入炎症小体抑制剂MCC950。qPCR法检测HAGLR和RUNX2的表达,Western blot法检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达。microCT测量小鼠骨痂体积(MBV),称量小鼠的全长胫骨湿重。结果沉默HAGLR导致MC3T3-E1细胞活力降低且凋亡率增加(P<0.05),且RUNX2、p-RUNX2、BALP和骨钙素表达量均降低(P<0.05),NLRP3、Caspase1、ASC、IL-1β的表达量都增加(P<0.05)。与健康组织比较,TF小鼠体内HAGLR和RUNX2表达量降低(P<0.05)。过表达HAGLR促进TF小鼠体内的HAGLR和RUNX2表达,并增加MBV和全长胫骨湿重以及IGF-1的表达量(P<0.05)。在过表达HAGLR的基础上沉默RUNX2导致TF小鼠的MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达量都降低(P<0.05)。而在过表达HAGLR的基础上加入NLRP3炎症小体抑制剂MCC950导致MBV、全长胫骨湿重和IGF-1表达又增加(P<0.05)。结论LncRNA HAGLR通过激活RUNX2并抑制NLRP3炎症小体促进TF的愈合。

槲皮素调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对大鼠分泌性中耳炎的作用机制

目的 探究槲皮素(quercetin, Que)对大鼠分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)的作用及机制。方法 选取雄性SD大鼠48只,随机性分为对照组(Control)、模型组(Model)、Que组(100 mg·kg^(-1))、Que+p38 MAPK激动剂组(100 mg·kg^(-1)Que+2 mg·kg^(-1)Anisomycin),每组各12只。除Control组外,其余各组大鼠均采取腹腔注射卵清蛋白复制分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠进行相应干预21 d。给药干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠中耳组织形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IFN-γ、IL-4水平;实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路相关mRNA及蛋白表达变化。结果 与Control组相比,Model组大鼠表现中耳内黏膜层增厚,伴有大量炎性细胞浸润,血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IL-4增加,IFN-γ降低(P <0.01),中耳黏膜组织p-p38MAPK/MAPK、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达水平均明显升高(P <0.01)。与model组相比,Que能够明显改善中耳内黏膜增厚,抑制炎性细胞浸润,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、IL-4及中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路mRNA和蛋白表达,升高IFN-γ(P <0.05或P <0.01)。与Que组相比,Anisomycin能够逆转Que对SOM大鼠的保护作用。结论 Que能够有效改善SOM发生、发展,其机制与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路介导的炎性反应相关。

理气活血方调控MCP-1/JAK2/STAT3信号通路对慢性下肢缺血大鼠血管病变的影响

目的基于趋化活化蛋白因子-1(MCP-1)/Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探讨理气活血方对球囊损伤糖尿病股动脉慢性下肢缺血大鼠的干预作用。方法选取清洁级雄性SD大鼠50只,随机取10只作为假手术组,给予普通饲料喂养和血管内导丝穿刺操作,不损伤股动脉;余40只大鼠通过高脂高糖饲料喂食和链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法构建糖尿病模型,然后在糖尿病模型基础上,应用血管内球囊损伤股动脉及髂动脉缩缝方法建立慢性下肢缺血模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、理气活血方高剂量组、理气活血方低剂量组,每组10只。辛伐他汀组给予辛伐他汀片1.80 mg/kg灌胃,理气活血方高、低剂量组分别给予理气活血方8.10 g生药/kg和4.05 g生药/kg灌胃,假手术组和模型组给予等容积纯净水灌胃,均1次/d,连续4周。全自动生化分析仪检测血糖、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,HE染色观察血管病理形态,电镜下观察股动脉内皮的病理形态,Real-time PCR和Western blot法分别检测股动脉中MCP-1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达情况。结果模型组大鼠血糖及血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α水平均明显高于模型组(P均<0.05),辛伐他汀组与理气活血方高、低剂量组大鼠血清TC、TG、IL-6、TNF-α水平均明显低于模型组(P均<0.05)。病理观察,模型组大鼠血管内膜增厚,内皮血管平滑肌细胞增生,管腔狭窄,血管内皮拉伤,可见内弹力板、中膜断裂损伤;辛伐他汀组与理气活血方高、低剂量组大鼠内皮血管平滑肌细胞增生减少,管腔狭窄明显减轻,内皮损伤和断裂的内膜部分修复,裸露的内皮有部分覆盖。模型组大鼠股动脉中MCP-1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量均明显高于假手术组(P均<0.05);理气活血方高、低剂量组大鼠股动脉中MCP-1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论理气活血方能够改善慢性下肢缺血大鼠的血管功能,机制可能与抑制MCP-1/JAK2/STAT3信号通路,下调炎症因子的表达相关。

外周血FOXO3a、VCAM-1水平评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值

目的探讨外周血叉头盒O类转录因子-3a(Foxo3a)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)评估2型糖尿病患者心血管病风险的价值。方法前瞻性选择2020年3月至2022年3月青岛市城阳区人民医院收治的2型糖尿病患者120例作为研究组,将同期体检的正常者50名作为对照组。采集所有入组者外周血,检测并对比两组FOXO3a、VCAM-1水平。将120例2型糖尿病患者按有无发生心血管疾病分为CVD组(n=45)及非CVD组(n=75),统计CVD组和非CVD组的一般资料、VCAM-1、FOXO3a水平等差异。采用单因素、多因素分析两组影响2型糖尿病患者发生心血管疾病的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)评估外周血FOXO3a、VCAM-1水平预测2型糖尿病患者发生心血管疾病的价值。结果研究组患者VCAM-1水平(3.25±0.69)ng/mL,高于对照组[(1.76±0.59)ng/mL],FOXO3a水平为0.42±0.06,低于对照组(0.91±0.24),差异均有统计学意义(P<0.05)。CVD组体重指数≥24 kg/m2占比、有心血管疾病家族史占比、收缩压≥140 mmHg占比、VCAM-1、甘油三酯、总胆固醇水平为66.67%、57.78%、62.22%、(4.02±1.02)ng/mL、(2.67±0.52)mmol/L、(5.36±1.02)mmol/L,均高于非CVD组[33.33%、37.33%、41.33%、(3.06±0.98)ng/mL、(2.01±0.50)mmol/L、(4.12±1.01)mmol/L],FOXO3a水平0.33±0.09,低于非CVD组(0.54±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logisitic回归分析发现,体重指数≥24 kg/m2、有心血管疾病家族史、收缩压≥140 mmHg、VCAM-1≥3.817 ng/mL、FOXO3a≤0.440、甘油三酯≥2.338 mmol/L、总胆固醇≥4.483 mmol/L均是导致2型糖尿病患者发生心血管病的危险因素(P<0.05)。经过ROC曲线分析证实,VCAM-1、FOXO3a、甘油三酯、总胆固醇可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测,曲线下面积分别为0.735、0.936、0.893、0.833。结论2型糖尿病患者外周血VCAM-1、FOXO3a水平存在异常表达,可用于2型糖尿病患者发生心血管病的预测。