bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的 :探讨 b FGF和 TGF-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响。方法 :采用 MTT法分别测定了 b FGF和 TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及 DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓干细胞分化能力的影响。结果 :0～ 40 ng/ m L范围内 ,b FGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖 ,且具有浓度和时间依赖性 ,而 TGF-β促增殖作用较弱 ;两者联合作用 ,促增殖作用无显著提高 ,而促分化作用显著增强 ,不仅细胞形态明显改变 ,而且碱性磷酸酶活性显著提高 ,DSP、DMP-1呈阳性表达 ,向成牙本质细胞样细胞分化。结论 :b FGF和 TGF-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用 ,为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。

TGF-β_1对人牙髓细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜动态观察

目的 :探讨 TGF- β1 信号转导过程与人牙髓细胞内钙〔( Ca2 +) i〕的关系。方法 :体外培养人牙髓细胞经钙荧光指示剂 Fluo- 3负载后 ,用激光扫描共聚焦显微镜测定 TGF- β1 影响前后的人牙髓细胞内钙随时间变化情况。结果 :TGF- β1 ( 0 .1ng/ L)使人牙髓细胞内钙先升高后降低 ,最后维持在比加药前稍高的静息钙水平上。结论 :通过 TGF-β可引起牙髓细胞内 Ca2 +水平的显著变化 ,证明 Ca2 +参与了人牙髓细胞 TGF-β1

TGF-β3作用下人牙髓细胞内Smad2、Smad3蛋白表达水平的变化

目的:探讨TGF-β3对人牙髓细胞内Smad2、Smad3蛋白表达的调控作用和差异。方法:取生长良好的第5代人牙髓细胞,分为实验组和对照组,实验组用5ng/mLTGF-β3刺激并培养6、12、24、48h,对照组不予刺激。提取各组总蛋白质,分别用Smad2、Smad3抗体进行Western印迹杂交。结果:与对照组相比,Smad3在TGF-β3刺激后6h、12h,其蛋白表达量无明显变化,而在刺激后24h表达量明显下降,刺激48h后表达十分微弱;Smad2在对照组以及刺激后各时间组,其蛋白表达量无显著变化。结论:人牙髓细胞内存在Smad2、Smad3蛋白的表达,TGF-β3对二者表达的调控方式有所不同,刺激后期Smad3表达水平的下调可能与TGF-β3负反馈调节自身的信号有关。

转化生长因子-β受体在人牙髓中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子β受体在人牙髓中的表达和牙髓细胞对 Ｔ Ｇ Ｆβ作用的反应机理。方法：用免疫组化方法检测转化生长因子βⅠ型受体（ Ｔβ Ｒ Ｉ）和Ⅱ型受体（ Ｔβ ＲⅡ）在健康及龋坏人牙髓中的表达。结果：转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体在成牙本质细胞层强阳性表达，其中Ⅰ型受体较Ⅱ型受体表达量多，两种受体在成牙本质细胞层下方的富细胞区及中心部牙髓有表达或弱表达，龋坏牙髓与正常牙髓有相同的反应模式。结论：转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体在健康及龋坏人牙成牙本质细胞及牙髓其它细胞皆有表达，提示成牙本质细胞及牙髓其它细胞在牙髓损伤修复过程中具有重要作用。

转化生长因子β3诱导人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞的分化（英文）

背景:转化生长因子β3与肝素联合作用后对人乳牙牙髓干细胞的增殖和矿化能力的作用目前仍有待研究。目的:探讨转化生长因子β3对人乳牙牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的作用。方法:采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养,获得人乳牙牙髓干细胞;对体外培养的第3代人乳牙牙髓干细胞单独加入25μg/L重组转化生长因子β3、10 U/mL肝素,或者二者联合进行培养;通过Q-PCR和Western-blotting方法,分别检测乳牙牙髓干细胞中牙本质涎磷蛋白基因及牙本质涎蛋白表达的情况;通过碱性磷酸酶试剂盒检测乳牙牙髓干细胞碱性磷酸酶活性的改变。结果与结论:乳牙牙髓干细胞在诱导体系中生长状态良好。25μg/L转化生长因子β3+10 U/mL肝素联合作用组的碱性磷酸酶活性明显增强,与转化生长因子β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比差异有显著性意义(P<0.01);转化生长因子β3+肝素联合作用组的茜素红染色呈强阳性,Q-PCR和Western-blotting结果均显示,转化生长因子β3+肝素联合作用组的牙本质涎磷蛋白mRNA和蛋白表达均明显升高。结果可见在转化生长因子β3与肝素联合作用的诱导下,可促进乳牙牙髓干细胞分化为成牙本质样细胞。

Er∶YAG激光制洞对牙髓的生物学效应

目的观察Er∶YAG激光制洞对兔牙髓组织的影响。方法分别用Er∶YAG激光和普通牙钻于兔前牙唇面制备V类洞,常规窝洞垫底充填。术后即刻和72h处死动物并分离实验牙,HE染色观察兔牙髓的形态学改变。术后72h,免疫组化S-P法检测转化生长因子β1(TGF-β1)在牙髓中的表达。结果术后即刻和72h Er∶YAG激光组与普通牙钻组均可见牙髓轻度炎性反应;术后72h激光组及普通牙钻组均可见成牙本质细胞内及其下方牙髓细胞内TGFβ1的表达,两组比较差异有显著性(P<0.05),激光组牙髓组织内TGF-β1的中强阳性表达率(90%)高于普通牙钻组(30%)。结论与普通牙钻组比较,Er∶YAG激光制洞对牙髓组织未见有明显损伤;Er∶YAG激光辐射可能具有促进牙髓组织修复的潜能。

转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

背景:转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化能力对比相关研究甚少。目的:探讨相同质量浓度转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞成骨向分化的作用及其初步机制。方法:采用酶解组织块法从新西兰大白兔牙髓组织中分离培养牙髓干细胞;将第3代牙髓干细胞分为空白组、骨形成蛋白2(80μg/L)组和转化生长因子β3(80μg/L)组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;培养第7,14天行碱性磷酸酶活性定量检测,Runt相关转录因子2、骨涎蛋白免疫细胞化学染色,RT-qPCR法检测成骨相关基因的表达;培养第14,21天进行茜素红染色观察矿化结节形成能力。结果与结论:①骨形成蛋白2组和转化生长因子β3组的牙髓干细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性均高于空白组(P<0.05);转化生长因子β3组第7天碱性磷酸酶活性高于骨形成蛋白2组(P<0.05);②转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组Runt相关转录因子2、骨涎蛋白表达均高于空白组(P<0.05),其中转化生长因子β3组第7天Runt相关转录因子2蛋白表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);③转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx基因表达量高于空白组(P<0.05),第7天转化因子β3组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2基因的表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);④转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组矿化结节较空白组明显;⑤结果表明,转化生长因子β3与骨形成蛋白2均能促进牙髓干细胞增殖和成骨向分化;转化生长因子β3对牙髓干细胞成骨早期促进作用优于骨形成蛋白2。

载TGF-β3甲基丙烯酰化肝素对牙髓干细胞成骨分化能力的影响及其机制

目的:探讨载转化生长因子β3(TGF-β3)甲基丙烯酰化肝素(HepMA)对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化能力的促进作用,阐明其可能的作用机制。方法:体外分离培养人牙髓干细胞(hDPSCs)并通过流式细胞术进行细胞鉴定。合成光固化HepMA水凝胶,利用扫描电子显微镜观察材料表面形态特征。合成载不同浓度(20、40、60、80和100μg·L^(-1))TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA),采用其浸提液分别培养hDPSCs 1、3和5 d,同时设对照组,采用CCK-8法筛选出载TGF-β3的最适浓度。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各时间点TGF-β3-HepMA中TGF-β3的累积释放量并绘制药物释放曲线。hDPSCs分为对照组、HepMA组和载最适浓度TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA)组,加入含有相对应浸提液的培养基培养24 h,配制成骨诱导液分别诱导hDPSCs 7、14和21 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色法检测各组细胞ALP染色及钙结节形成情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中成骨相关因子mRNA表达水平。结果:分离培养的hDPSCs在光学显微镜下观察呈长梭形;流式细胞术检测,培养的hDPSCs中CD105和CD90呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,验证本研究中分离培养的细胞为hDPSCs。扫描电子显微镜(SEM)观察,HepMA平均孔径为50~70μm。ELISA法检测,TGF-β3在7 d内呈突释阶段后缓慢释放,21 d左右达到平衡。CCK-8法检测,与0μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组比较,20、40和60μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组hDPSCs增殖率呈剂量依赖性升高(P<0.05),故载TGF-β3的最适浓度为60μg∙L^(-1)。成骨诱导7和14 d时,与对照组和HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中ALP染色面积最大且染色颜色最深,14 d时细胞中ALP染色较7 d时更加明显;成骨诱导21 d时,与对照组和HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中茜素红染色的矿化钙结节面积最大。RT-qPCR法检测,培养7和14 d时,与对照组比较,HepMA组和TGF-β3-HepMA组细胞中Runt相关转录因子2(Runx2)、ALP、骨钙桥素(OCN)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中Runx2、ALP、OCN和COL-ⅠmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:载TGF-β3的HepMA能够提高hDPSCs成骨分化能力,其机制可能与上调成骨相关因子的表达有关。

人牙髓细胞内Smad2、3在转化生长因子β_1信号转导中的作用

目的 探讨人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子 β1 (transforminggrowthfactor β1 ,TGF β1 )信号转导过程中的作用。方法 原代培养人牙髓细胞 ,用激光共聚焦显微镜观察TGF β1 刺激初期牙髓细胞内Smad 2、3由胞质向胞核转位的现象 ,同时采用Westernblot方法检测刺激后期Smad 2、3蛋白表达的变化。结果 TGF β1 刺激 2h内 ,Smad 2、3在胞质中表达渐弱 ,在胞核内表达渐强 ,呈现由胞质向胞核逐步转位的趋势。Smad 2蛋白总量在TGF β1 刺激前后几乎无变化 ,而Smad 3在刺激后 2 4h表达量明显下降 ,48h后表达十分微弱。结论 Smad 2、3可能是人牙髓细胞内TGF β1 的信号转导分子。TGF β1 刺激初期Smad 2、3通过发生转位参与转导TGF β1 信号至核内 ,刺激后期Smad 3表达水平的下调可能与TGF β1