Enzymes activity of intestinal grafts after liver small bowel transplantation in rats

OBJECTIVES: To investigate the activity alterations of enzymes in intestine grafts after liver/small bowel transplantation in rats and the relations of these changes to immune rejection of grafts. METHODS: A model of liver/small bowel transplantation (LSBT) was established in closed colony SD and Wistar rats. The activity of enzymes including triphosphatase (ATPase), alkalinophosphatase (AKP), acytelcholinesterase (AchE), oxidesynthase (NOS) and monoamine oxidase (MAO) in bowel grafts was studied histochemically at regular postoperative intervals. RESULTS: The activity of enzymes in the wall of the grafts disappeared eventually in isolated small bowel transplantation (SBT) rats. In contrast, the activity in LSBT rats remained and recovered postoperatively. CONCLUSIONS: The rejection in grafted intestine could be prevented or delayed in LSBT rats. The changes in the activity of enzymes and neurons might be used to detect the rejection and function of the graft.

大鼠小肠移植模型的建立与改进

目的 为研究小肠移植排斥反应提供良好的动物模型。方法 选用SD大鼠进行一期同种异体异位节段性小肠移植。结果 模型稳定后 4 0次小肠移植的术后 5天存活率达 90 %。结论良好的血管吻合方法以及输血、补液、保温等围手术期处理是提高手术成功率的关键。

大鼠同种异体在体异位节段小肠移植模型的建立

目的:为研究抗小肠移植排斥治疗提供良好的动物实验模型。方法:选用大鼠进行同种异体异位节段性小肠移植。结果:共施行96只移植手术,模型稳定后的56只小肠移植5天成活率为85.71％。结论:本模型制作成功率较高,适合小肠移植排斥研究。

力肽及精氨酸在大鼠移植肠缺血再灌注损伤治疗中的作用

目的 探讨 L -精氨酸 (L - Arginine,L - Arg)和力肽在大鼠小肠移植 (small bowel transplantation,SBT)缺血再灌注损伤中的治疗作用和协同效应 .方法 将 6 4只大鼠随机分为 4组 ,对照组 (n=16 )行虚拟手术 ,给予普通饲料喂养 ;s TPN组 (n=16 )行同系小肠移植 (syngeneic SBT) ,接受传统的肠外营养 ;d TPN组 (n=16 )行同系小肠移植 ,接受力肽强化的全胃肠外营养 (total parenteral nutrition,TPN) ;a TPN组 (n=16 )行小肠移植 ,给予加用 L - Arg和力肽的肠外营养 .各组于术后 2 0 m in和术后 8d(POD8)取材 .结果 小肠移植术后 2 0 min,移植肠中度缺血再灌注损伤表现 ,移植肠粘膜一氧化氮 (nitric oxid,NO)水平降低 ,丙二醛 (malondialde-hyde,MDA)含量升高 .术后 8d,a TPN组移植肠粘膜 NO水平高于对照组及 d TPN组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,d TPN组及 a TPN组移植肠粘膜谷氨酰胺 (glutamine,Gln)含量均高于 s TPN组 (P<0 .0 1,P<0 .0 1) ,a TPN组较显著 ;d TPN组及 a TPN组移植肠的绒毛高度、粘膜厚度均明显大于 s TPN组 .结论 大鼠在接受同系异体小肠移植术后 ,力肽强化的肠外营养液可促进移植小肠粘膜结构的修复 ,L- Arg可增强力肽对移植肠粘膜修复的作用 .

小剂量FK506预处理对大鼠小肠移植缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的 :研究小剂量FK5 0 6预处理对大鼠小肠移植缺血再灌注 (ischemia/reperfusion ,I/R)损伤中细胞凋亡的影响 .方法 :建立大鼠小肠移植I/R损伤模型 ,FK5 0 6预处理方式为大鼠浅麻醉后按 0 .3mg·kg-1 剂量通过尾静脉注射 ,自然环境恢复 6h后行异位节段性小肠移植术 ;免疫荧光细胞化学方法检测移植肠凋亡细胞 ;免疫组化方法测定移植肠中热休克蛋白 70 (HSP70 )表达 .结果 :小肠移植I/R损伤造成小肠粘膜细胞凋亡增加 ,小剂量FK5 0 6预处理可有效减少I/R损伤引起的细胞凋亡 ,荧光强度定量分析表明 ,同虚假手术组相比 ,I/R组各时相点荧光强度明显增强 (0 .5 ,6 .0 ,2 4 .0h ,P<0 .0 1 ) ;FK5 0 6预处理组各时相点荧光强度与I/R组相比明显减少 (0 .5h ,P <0 .0 5 ;6 .0h ,P <0 .0 5 ;2 4 .0h ,P <0 .0 1 ) ;虚假手术组无HSP70表达 ,I/R组再灌注后 0 .5和 6 .0h未见HSP70表达 ,2 4 .0h可见有少量HSP70表达 ,FK5 0 6预处理组再灌注后 0 .5h即可见有少量HSP70表达 ,6 .0h时表达增多 ,再灌注后 2 4 .0h ,HSP70表达至高峰 .结论 :小剂量FK5 0 6预处理可有效减少I/R引起的细胞凋亡 ,减轻大鼠移植肠的缺血再灌注损害 ;

甘露醇对大鼠小肠移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨甘露醇对大鼠小肠移植缺血再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)损伤的保护作用及其作用机制.方法:建立大鼠小肠移植I/R损伤模型.雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组和甘露醇处理组.对I/R损伤后不同时间(0.5,1,1.5 h)的小肠标本进行组织病理学观察并检测小肠组织中超氧化物歧化酶(SOD,U/mgprot)和丙二醛(MDA,nmol/mgprot)的含量.结果:不同时间点I/R组小肠绒毛高度和黏膜厚度低于假手术组(P<0.01)和甘露醇处理组(P<0.05).不同时间点I/R组(16.24±4.56,18.50±2.89.19.42±2.21)MDA水平高于假手术组(10.26±1.72,P<0.01)和甘露醇处理组(11.24±1.51,14.03±3.12,16.06±3.62;P<0.05);而SOD水平低于假手术组和甘露醇处理组(398.36±18.81,363.16±16.29,325.66±14.58 vs 447.97±16.94;422.30±17.41,385.09±19.11,346.15±14.10;P<0.01或P<0.05).结论:甘露醇可通过清除氧自由基的方式对移植小肠缺血再灌注损伤起到保护作用.

T淋巴细胞疫苗抗大鼠小肠移植排斥反应的实验研究

目的 :研究特异性T淋巴细胞疫苗接种对大鼠小肠移植排斥反应的影响。 方法 :利用FK344 N大鼠的脾细胞免疫Wistar大鼠 ,取后者脾细胞活化制备T细胞疫苗 ,对小肠移植受者的Wistar大鼠进行免疫 ,以大鼠小肠移植后的存活时间、混合淋巴细胞培养、微量细胞毒测定对该方法抗大鼠小肠移植排斥反应加以证实。 结果 :和对照组相比较 ,T淋巴细胞疫苗接种使小肠移植大鼠的存活期明显延长 (P <0 .0 1) ,混合淋巴细胞培养和微量细胞毒实验结果也具有显著差异 (P <0 .0 1)。 结论 :T淋巴细胞疫苗接种能显著延长异品系大鼠小肠移植的存活期 。

不同冷保存时间对大鼠移植小肠形态学改变及对移植术后受体存活的影响

目的研究不同冷保存时间对大鼠移植肠所致的形态学改变,以及对移植术后受体存活的影响。方法SD大鼠随机分成对照组(假手术组,L组,n=6)、冷缺血3h组(L3组,n=6)、冷缺血6h组(L6组,n=6)、冷缺血12h组(L12组,n=6)、冷缺血18h组(L18组,n=6)。建立大鼠原位节段性小肠移植模型。各组热缺血时间均为2-3min,除对照组外其余各组按相应时间在乳酸林格液中进行冷保存(4℃),再灌注后1h取材。HE染色及电镜下观察小肠组织的损伤,并记录各组大鼠生存时间。结果HE染色下各组小肠均有不同程度的损伤,如出现不同程度的绒毛缩短、绒毛脱落;黏膜层变薄,肌层水肿增厚;基质层断裂等,这些损伤随保存时间延长而加重。电镜下表现为:小肠微绒毛排列不整齐,随着冷缺血时间延长,微绒毛出现脱落;线粒体、肌细胞逐渐出现水肿;血管内皮CAP窗孔增大;小肠上皮基质层断裂;此外,在L12组出现凋亡小体,L18组凋亡小体明显增多。术后生存分析显示:随冷保存时间增长,移植术后大鼠存活率下降(P<0.05)。结论供肠在乳酸林格液中保存,冷保存时间在6h以内最适于小肠移植;保存超过18h则不适于作小肠移植供体。

152例大鼠原位全小肠移植的外科技术总结

目的：总结大鼠原位全小肠移植的外科手术方法。方法：雄性F344和Lewis大鼠分别为供体和受体。供肠切取范围包括全小肠、门静脉及肠系膜上动脉。供肠肠系膜上动脉与受体肾下腹主动脉端侧吻合采用连续外翻锁边缝合方法,供体的门静脉与受体的左肾静脉端端吻合采用Cuff套管方法,切除受体自体小肠,断端与供体肠吻合重建消化道。供、受体术中均补液4~6 ml。结果：共进行152次移植手术,其中正式实验120次,供体手术时间（60±10）min,受体手术时间（100±15）min,移植肠热缺血时间（30±5）min,78.3%大鼠术后存活超过2周,病理检查证实移植肠病变符合排斥反应特点。结论：供肠获取、血管吻合术、术中血容量维持、保温是大鼠原位全小肠移植术的关键。

改进技术的大鼠异体全小肠移植术

目的：为了减少并发症，提高成活率，通过改进外科技术，建立成功的大鼠小肠移植模型。方法：１９６只大鼠施行异位全小肠移植，术前缩短禁食时间，补充能量，术中静脉输液，保持血压稳定，以增加对手术的耐受性；减少对供肠的机械和缺血性损伤，改善供肠生机；重建供肠血管采用腹主动脉－腹主动脉吻合及门静脉－左肾静脉套管法吻合，缩短热缺血时间，保证供肠血供充足与回流通畅。结果：９８只接受小肠移植大鼠的存活率为８９％，最长存活已超过２９６天。结论：改进外科技术后的大鼠小肠移植术具有并发症少、存活率高的特点，并且稳定。

大鼠异位节段小肠移植模型建立的体会

目的 为研究抗小肠移植排斥反应提供稳定、操作简单、良好的动物模型.方法 选用SD大鼠进行一期同种异体异位节段性小肠移植.结果 模型稳定后60 例小肠移植的术后3d存活率达90%.结论 熟练和完善的外科操作、良好的血管吻合、充分的补液及术后的复温和保温处理是提高手术成功率的关键.

诱导血红素氧合酶-1对小肠移植缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨诱导血红素氧合酶-1(HO-1)是否可减轻大鼠小肠移植缺血再灌注损伤及其机制。方法:SD大鼠分成3组:Ⅰ组:血晶素(Hemin)组(n=20);Ⅱ组:Hemin+卟啉锌(ZnPP)组(n=20);Ⅲ组:生理盐水组(n=20)。建立小肠移植缺血再灌注损伤模型。移植后6、12、24、48h分别从各组随机取5只大鼠,切取移植小肠进行HO-1活性测定,普通病理学检查及细胞凋亡检测。结果:术后各时段Ⅰ组HO-1活性均显著强于Ⅱ组及Ⅲ组(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组比较无显著差异(P>0.05)。各组移植肠缺血再灌注损伤以术后12h最为明显。Ⅰ组表现轻度,而Ⅱ组和Ⅲ组表现中度缺血再灌注损伤。术后各时段Ⅰ组细胞凋亡数少于Ⅱ组和Ⅲ组,差别有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:诱导HO-1可通过抑制细胞凋亡而减轻移植肠缺血再灌注损伤。

大鼠小肠移植模型中血管吻合技术的探讨

目的比较大鼠小肠移植中两种不同的血管吻合方法,改进吻合技术,提高大鼠小肠移植的成功率。方法雄性SD大鼠做供体,雄性Wistar大鼠做受体,建立大鼠异位小肠移植模型120例,分为对照组和实验组两组,每组60例,对照组采用经典两点固定双线连续缝合方法,实验组采用一点固定单线连续缝合方法,将供体腹主动脉、门静脉分别与受体腹主动脉、下腔静脉做端侧吻合。比较两组血管吻合时间、血管并发症及3天存活率的差异。结果对照组血管吻合总时间(53.42±4.16)分钟,实验组(42.31±3.72)分钟,实验组明显短于对照组(P<0.01);实验组吻合方法较对照组更易出血,但对照组误缝对侧的可能性更大,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01);而两组吻合口并发症比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组3天存活率为57.1%,实验组为78.9%,实验组显著高于对照组(P<0.05)。结论一点固定单线连续缝合法吻合时间明显缩短,不易发生对侧误缝,提高了小肠移植大鼠的生存率。

HO-1修饰的BMMSC对大鼠小肠移植免疫功能的影响

目的探讨在小肠移植排斥反应中血红素加氧酶-1(HO-1)是否能增强骨髓间充质干细胞(BMMSC)对移植免疫功能的影响。方法建立异位大鼠小肠移植排斥反应模型,实验分为生理盐水组(NS)、BMMSC组和HO-1/BMMSC组,经阴茎背静脉给予输注BMMSC和HO-1/BMMSC,观察术后各组移植小肠组织病理、调节T细胞(Tregs)、自然杀伤细胞(NK)及细胞因子的改变。结果小肠移植急性排斥反应模型组术后5天发生轻至中度的急性排斥反应,术后7天发生中至重度的急性排斥反应,术后第10天发生重度的急性排斥反应。HO-1/BMMSC处理组与BMMSC处理组相比,显著提高了BMMSC保护移植小肠的作用;并且NK细胞活性显著下降而Tregs水平显著升高;细胞因子白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)显著上升而白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)则显著降低。结论 HO-1/BMMSC能够更好地发挥移植免疫抑制作用,HO-1可增强BMMSC抑制小肠移植急性排斥反应大鼠体内免疫功能的作用。

经门静脉途径输注骨髓细胞后大鼠小肠移植的排斥反应及细胞因子相关改变

目的经受体大鼠门静脉途径输注供体大鼠的骨髓细胞,观察受体大鼠小肠移植排斥反应状况及生存时间,并分析其细胞因子的改变与病理学改变之间的关系。方法取雄性BN大鼠30只为供体、雌性Lewis大鼠30只为受体建立异位节段小肠移植模型,随机分为3组:BN-Lewis组(对照组)、BN-Lewis+FK506组(FK506组)、BN-Lewis+BM(P.V.injection)+FK506组(PV组);对各组作生存时间分析,并于术后7、14、30、60和90 d制作移植小肠的病理切片评估排斥反应程度;分别于术后7、14、21、30 d留取受体血清,ELISA法测定血清中IL-2、IL-10水平。结果与对照组、FK506组相比,PV组受体大鼠存活时间明显延长(P<0.01);对照组大鼠术后第14天即已出现严重的急性排斥反应,而FK506组急性排斥反应发生时间延迟至第30天;PV组在术后30 d之内均未见严重的急性排斥反应。各组移植后受体IL-2浓度均增加,但PV组的IL-2增高幅度明显低于对照组和FK506组(P<0.01);移植后受体大鼠血清IL-10浓度也均增加,但PV组IL-10升高幅度大于对照组和FK506组(P<0.01)。结论骨髓细胞经门静脉输注能明显延长小肠移植物的生存时间,外周血清IL-2、IL-10浓度变化与排斥反应相关。

大鼠肝肠联合移植IL-2、IL-4及IFN-γ基因表达的研究

目的:检测细胞因子白细胞介素2(IL-2)、IL-4和干扰素γ(IFN-γ)在大鼠肝/小肠移植中的变化规律,从细胞因子角度探讨大鼠肝肠联合移植免疫耐受机理。方法:建立大鼠肝肠联合移植(LSBTx组)和单独小肠移植(SBTx组)模型,每组取6只受鼠观察生存期,每组另取6只大鼠于移植后5 d、7 d收集小肠移植物,术后14 d单独收集LSBTx组小肠移植物,分别进行组织病理学检查,同时采用RT-PCR方法检测移植物中IL-2、IFN-γ和IL-4等细胞因子的mRNA表达。结果:LSBTx组大鼠均获得长期存活(>28 d),SBTx组大鼠中位生存期12.7 d。组织学提示SBTx组大鼠死于严重排斥反应,而LSBTx组至术后14 d移植肠排斥反应已明显缓解,SBTx组术后5 d、7 d移植肠排斥反应评分高于LSBTx组,存在显著性差异(P<0.05)。两组间不同时段IL-2基因表达水平未见显著性差异(P>0.05),SBTx组术后5 d IL-4基因表达高于LSBTx组(P<0.05),SBTx组术后5 d、7 d IFN-γ基因表达也高于同时段的LSBTx组(P<0.05)。结论:移植物中IL-2基因转录水平并不能反映术后移植排斥反应强度;术后早期IL-4水平的下调与免疫耐受有关;持续低水平的IFN-γ表达是肝脏诱导小肠耐受的重要原因之一。

显微镜下大鼠小肠移植模型的建立

目的 在传统的小肠移植 (SBT)模型基础上建立一个操作简便、并发症少、稳定和实用的大鼠小肠移植模型。方法 供、受体手术均在显微镜下进行。切取供肠的范围包括全小肠、门静脉 (PV)及其带肠系膜上动脉(SMA)的腹主动脉 (AO)袖。动脉吻合采用供体带SMA的AO袖与受体的AO端侧吻合 ,静脉吻合采用供体的PV与受体的下腔静脉 (IVC)端侧吻合 ,移植肠近端结扎远端造瘘。结果 在大量预实验的基础上共进行正式实验 33次 ,手术成功率为 84 .8% ,供体手术时间控制在 6 0min以内 ,受体手术时间控制在 10 0min以内。结论 完全在显微镜下建立大鼠SBT模型具有手术视野清晰、术中操作定位准确、局部创伤小、手术时间短、并发症少、存活率高、模型稳定和实用等优点 。

改良三袖套法建立大鼠原位全小肠移植模型

目的简化大鼠原位全小肠移植术式,建立符合生理条件、稳定的动物模型。方法取32只封闭群雄性SD大鼠为供、受体,进行同种同基因原位无造瘘全小肠移植,腹主动脉、门静脉的吻合改良为三袖套法。结果手术成功率为87.5%(28/32),供肠热缺血时间0 min,冷缺血时间(32±5)min。术后7 d受体存活率100%。结论改良的大鼠原位全小肠移植三袖套血管吻合法缩短供肠冷缺血时间,吻合口无出血,提高了手术成功率。此方法操作简单,为研究小肠移植后急、慢性排斥反应,移植物抗宿主反应以及肠道功能的良好模型。

建立肝肠联合移植大鼠模型及移植肝对小肠的免疫保护作用

目的:建立新型肝肠联合移植大鼠模型,并研究移植肝是否对移植肠具有免疫保护作用。方法:肝肠联合移植切取移植物时,保留门静脉完整性,利用供体胸段下腔静脉在门静脉侧壁上建立一袖套,并安置套管。受体手术时,将此袖套与受体门静脉残端套管法吻合。动脉重建通过供体肠系膜上动脉与受体右肾动脉端端吻合。免疫保护作用通过术后病理学检查评估。结果:用此法建立肝肠联合移植大鼠模型手术无肝期显著缩短,与Kamada双套管法肝移植无肝期相同,血流动力学影响小,手术成功率高。术后7、14天异基因小肠移植组出现重度排斥反应,而肝肠联合移植组仅表现为中度排斥。结论:用该方法建立一期大鼠肝肠联合移植模型方便可行,且成功率高。肝肠联合移植时移植肝对移植小肠具有免疫保护作用。

未成熟DC体外扩增诱导大鼠小肠移植免疫耐受的实验研究

目的:通过体外扩增培养大鼠未成熟DC,采用术前预先输入受体体内的方法,了解未成熟DC诱导小肠移植免疫耐受的可行性。方法:体外应用不同细胞因子(GM-CSF或GM-CSF+TGFβ1)培养骨髓和肝脏来源的未成熟DC,阴茎背静脉输入Wistar大鼠体内,1周后建立SD→Wistar同种异基因大鼠并列式小肠移植模型。术后监测移植小肠的免疫排斥反应强度。结果:术后第3、5、7天移植肠出现不同程度排斥反应。结论:大鼠未成熟DC细胞能够诱导小肠移植免疫耐受。