细胞体外侵袭实验中Transwell plate染色技术改良

细胞体外侵袭实验主要应用于肿瘤细胞侵袭和转移能力研究。该实验经常使用Transwell plate通过matrigel穿膜侵袭实验来检测肿瘤细胞的侵袭潜能。但在具体实验中获得真实、最佳实验结果图象并借以说明问题并非简单。

Transwell法检测细胞侵袭迁移能力实验中的影响因素

对常用于检测细胞侵袭迁移能力的Transwell检测方法进行分析总结,旨在提高Transwell方法检测细胞侵袭迁移能力的一致性与稳定性。以肺癌细胞为例,对Transwell检测细胞侵袭能力中常遇到的部分细节问题进行分析,对实验中的影响因素提出应对策略,给予相应解决方案。实验发现,在Tranwell实验中,细胞种类、Transwell孔径、基质胶浓度、细胞接种数量、染色等细节问题均为该实验的关键点;并根据分析得到细胞侵袭及迁移实验中关键的影响因素,提出应对方案,可以有效提高实验结果重复性及稳定性。

Transwell侵袭实验测定M受体对胆管癌细胞侵袭的影响

目的 探讨Transwell体外侵袭模型适用于胆管癌侵袭性研究的实验条件和方法.观察M受体兴奋剂及拈抗剂对胆管癌侵袭力的影响.方法 将不同浓度（0.5×10^5/mL、1.0×10^5/mL、1.5×10^5/mL、2.0×10^5/mL）的胆管癌细胞200μL置入Transwell小室侵袭模型,分别培养12 h、24 h、36 h、48 h,观察不同浓度细胞在不同时间穿透基质凝胶多空滤膜的细胞数.选取最适浓度的胆管癌细胞与匹罗卡品共同加入 Transwell 的上室,调整小室内匹罗卡品浓度分别为0 mmol/L、0.1 mmol/L、0．3mmol／L、0．5mmol／L，培养最适时间后染色计数小室膜上的细胞数。调整浓度分别为0．01mmol／L、0．01mmol／L、0．05mmol／L、0．1mmol／L的阿托品对应匹罗卡品浓度分别为0、0．3mmoL／L、0．3rrmaol／L、0．3mmol／L与胆管癌细胞共同加入Transwell小室培养后染色计数。结果随着作用时间及细胞浓度的增加，穿透基质胶的细胞数随之增多，但当时间超过36h，细胞浓度大于1．0×10^5／mL时增长趋于平稳。加入匹罗卡品后，对照组与实验组比较差异有统计学意义（P〈0．05），实验组高中低浓度之间的差异无统计学意义。单阿托品组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。加入匹罗卡品及阿托品后，单阿托品组与实验组比较，差异有统计学意义（P〈0．05），低中高浓度组之间差异无统计学意义。结论36h的侵袭时间和1．0×10^5／mL的细胞浓度最能体现不同药物或试剂对胆管癌细胞的侵袭能力的影响，而受细胞浓度和侵袭时间的影响较小。胆管癌细胞可能存在M受体，并且在胆管癌的浸润和转移中具有重要作用。

茯苓酸对小鼠黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:研究茯苓酸(pachymic acid,PA)对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。方法:采用CCK8法和细胞克隆形成实验检测不同浓度(20、40、80μmol/L)PA对B16细胞增殖的影响;细胞划痕和Transwell小室实验观察PA对B16细胞迁移和侵袭能力的影响;Western Blot法和免疫荧光法检测PA对B16细胞的上皮-间质转化相关蛋白表达的变化。结果:PA可以明显抑制B16细胞增殖,并呈一定的浓度依赖性关系(P<0.01);PA干预24 h后可以显著抑制B16细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);40μmol/L的PA能上调B16细胞的E-cadherin蛋白表达(P<0.05)并下调Vimentin蛋白的表达(P<0.05);免疫荧光法检测显示40μmol/L的PA可明显降低B16细胞Vimentin蛋白的表达。结论:PA可以抑制B16细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调B16细胞的E-cadherin蛋白表达,降低Vimentin蛋白表达,从而抑制B16细胞的上皮-间质转化有关。

不同免疫状态侵袭性肺曲霉菌病患者实验室指标分析

目的:分析不同免疫状态侵袭性肺曲霉菌病患者实验室指标表达状况。方法:选取树兰(杭州)医院呼吸与危重症医学科病房2020年1月至2022年12月收治的44例侵袭性肺曲霉菌病患者,评价患者的基础免疫状况,根据免疫状态分为两组:免疫低下组(n=27)、免疫正常组(n=17),对比不同免疫状态侵袭性肺曲霉菌病患者实验室指标表达情况。结果:经分析不同免疫状态侵袭性肺曲霉菌病患者实验室指标发现:与免疫正常组相比,免疫低下组CD3^(+)T细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞减少,IFN-γ、IL-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、CD8^(+)T细胞、半乳甘露聚糖(GM)、(1,3)-β-D-葡聚糖(BG)水平升高(P<0.05)。结论:不同免疫状态侵袭性肺曲霉菌病患者临床表现不同,免疫低下患者临床症状/体征主要表现为咳嗽、发热、湿啰音等,实验室指标较免疫正常患者显著异常,患者预后大多不良,治愈率较低,且患者预后不良受多种因素共同影响,临床应针对不同免疫状态患者的疾病特征和预后状况,采用有效的措施干预,以促进患者预后恢复。

使用Corning~ Transwell~渗透支持物进行趋化性或侵袭试验的优化考虑

趋化性和侵袭试验对于研究伤口愈合、细胞分化、细胞通讯、胚胎发育和肿瘤转移是有帮助的。由于这些生物体系的复杂性，对建立结构清晰、具重现性的研究模型进行优化是必不可少的。尽管已有对于已知的化学诱导物、细胞接种密度和孵育时间的资料可用，但是对于特定的模型系统所知信息仍然有限。以下内容着重讨论使用通透性支持物进行趋化性和侵袭试验时，优化实验和获取精确结果所需要考虑的重要因素。

白皮杉醇对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其诱导凋亡作用的实验研究

目的:探究白皮杉醇对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及相关的作用机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞迁移能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞侵袭能力的影响;采用DAPI染色法检测不同浓度白皮杉醇对SKOV-3细胞凋亡的影响;采用Western blot实验检测SKOV-3细胞核增殖抗原(Ki67)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)和活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)的表达水平。结果:白皮杉醇能够明显抑制SKOV-3细胞的增殖能力,明显降低SKOV-3细胞的迁移能力和侵袭能力;明显提高SKOV-3细胞的凋亡水平;白皮杉醇干预后,SKOV-3细胞Ki67和Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达显著升高。结论:白皮杉醇能够有效抑制SKOV-3细胞的增殖、迁移和侵袭,并能够诱导SKOV-3细胞凋亡。

乳香提取物调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结直肠癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的研究乳香提取物对人结肠癌细胞HCT-116增殖和侵袭转移的影响及可能的作用机制。方法体外培养人结肠癌细胞珠HCT-116,使用不同浓度乳香提取物乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)分别作用于细胞相同时间后,以CCK-8实验、Transwell细胞侵袭实验、划痕实验检测其对细胞增殖和侵袭转移的影响,以Western blotting、荧光定量PCR等方法探究其对细胞侵袭转移相关蛋白、mRNA表达的影响。结果AKBA可抑制人结肠癌细胞HCT-116的增殖、迁移能力,且呈剂量依赖(P<0.05);AKBA可抑制C-Myc、β-catenin的蛋白和mRNA表达,且呈剂量依赖(P<0.05)。结论AKBA可以抑制人结肠癌细胞HCT-116的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。这可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

苦参碱诱导SMMC-7721细胞分化过程中侵袭转移相关指标的实验研究

目的 :研究苦参碱诱导人肝癌SMMC 772 1细胞分化过程中对其侵袭转移能力的抑制作用。方法 :SMMC 772 1细胞体外培养 ,0 5 g/L、0 8g/L、1 0 g/L浓度的苦参碱分别处理细胞 ,通过生长曲线测定、细胞形态观察、细胞粘附试验、运动试验、侵袭试验全面观察苦参碱对该细胞株的生长增殖、形态变化、侵袭转移等各方面的诱导分化作用。结果 :经 0 8g/L和 1 0g/L浓度的苦参碱处理后 ,SMMC 772 1细胞的生长增殖明显减缓 ,恶性细胞形态逐渐向成熟细胞分化 ,肿瘤细胞与FN的粘附力、细胞穿膜运动力、对基底膜的降解力等侵袭转移相关指标均受到显著抑制。结论 :苦参碱是一种较好的诱导分化剂 ,不仅抑制细胞的生长增殖 ,诱导细胞形态分化 ,而且从细胞的粘附、运动、降解等多环节全面抑制SMMC 772 1细胞的侵袭转移能力。

采用体外侵袭实验分离侵袭性人原代肾细胞癌细胞

目的:体外分离肾细胞癌原代侵袭性和非侵袭性细胞。方法:消化法或植块法对32例临床新鲜肾细胞癌进行原代培养。在预实验确定铺胶浓度、消化回收时间的基础上,采用涂有M atrigel的Transwell对3例原代培养的肾细胞癌细胞进行体外侵袭实验,分离回收侵袭性和非侵袭性细胞。结果:(1)原代培养成功率为90.6%(29/32)。(2)以1.0 mg/m l、20μl/孔对Transwell铺胶,固定细胞悬液密度(5×105/m l),第5天消化回收细胞较为理想。非侵袭性细胞散在生长,侵袭性细胞多呈克隆样生长。侵袭性细胞倍增时间为36.1 h,非侵袭性细胞为50.6 h。结论:Transwell可体外快速分离及回收、培养不同侵袭性的肾癌原代细胞群。用原代肿瘤细胞进行体外侵袭实验代表性好,但难以突破肿瘤细胞的有限生存期。

关于重症新型冠状病毒肺炎继发侵袭性真菌感染实验室诊治建议

新型冠状病毒肺炎传染性强,发病率高,重症患者病死率高。重症新冠肺炎患者具备侵袭性真菌感染发生的高危因素,且已有重症病例出现继发或合并真菌感染报告。对重症新冠肺炎患者应积极进行侵袭性真菌感染相关的微生物学、血清学及分子生物学检查,及时发现合并或继发真菌感染,开展针对性抗真菌治疗,降低患者病死率。

侵袭性肺部真菌感染的实验室检测方法

近年来,侵袭性肺部真菌感染的发病率逐年上升,并逐渐成为导致患者死亡的重要原因之一。由于侵袭性肺部真菌感染临床表现缺乏特异性,早期诊断困难,且病情易被基础病掩盖,造成误诊﹑漏诊而延误治疗。精准的实验室诊断是实现精准临床诊疗的前提和基础。该文对目前侵袭性肺部真菌感染常用实验室检测方法,包括标本直接镜检、组织病理学检查、真菌培养、抗原检测、核酸检测等的诊断性能及注意事项进行介绍与评价,从而提高临床医师及实验室人员对侵袭性肺部真菌感染实验室检测方法的认识。

侵袭性曲霉菌病的实验室诊断

曲霉菌属于条件致病菌,繁殖能力很强,最适生长温度为25∽30℃,形成丝状菌落,导致人类疾病的主要霉菌是烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和黑曲霉等,人类曲霉菌病95%以上由烟曲霉引起1。近年来,曲霉菌病发病率和死亡率不断上升。人类通过吸入空气中的曲霉孢子致病,肺部是曲霉感染的最常见部位,其他组织包括肺实质,胸膜,气管和支气管,鼻窦等也是曲霉菌的重要侵袭部位2。

恐吓影响小鼠恶性肿瘤侵袭与转移的实验研究

目的 :观察恐吓在肿瘤侵袭与转移中的作用。方法 :采用小鼠子宫颈癌 (U14 )接种昆明种小鼠爪垫并以猫吓鼠 ,分组观察截下的荷瘤肢体、淋巴结与肺组织的病理学变化。结果 :非恐吓组 8只小鼠中侵袭度 0级占 75% ( 6 8) ,Ⅲ级占 ( 2 8) 2 5% ;恐吓两组 16只小鼠中侵袭度 0级占 50 % ( 8 16) ,Ⅰ级占 6 2 5% ( 1 16) ,Ⅲ级占 31 5% ( 5 16) ,Ⅳ级占 1 2 5% ( 2 16) ;恐吓组中仅 1只小鼠有淋巴结与肺部发生转移。结论 :恐吓对小鼠恶性肿瘤的侵袭有一定促进作用 。

感染性腹泻患者中缓慢爱德华菌的分离鉴定及侵袭性实验研究

感染性腹泻是一组由不同病原体引起的肠道传染病,也是当今全球性重要公共卫生问题之一.