使用Corning~ Transwell~渗透支持物进行趋化性或侵袭试验的优化考虑

趋化性和侵袭试验对于研究伤口愈合、细胞分化、细胞通讯、胚胎发育和肿瘤转移是有帮助的。由于这些生物体系的复杂性，对建立结构清晰、具重现性的研究模型进行优化是必不可少的。尽管已有对于已知的化学诱导物、细胞接种密度和孵育时间的资料可用，但是对于特定的模型系统所知信息仍然有限。以下内容着重讨论使用通透性支持物进行趋化性和侵袭试验时，优化实验和获取精确结果所需要考虑的重要因素。

1,3-β-D-葡聚糖和半乳甘露聚糖试验在非粒细胞缺乏侵袭性肺曲霉病诊断中的应用研究进展

侵袭性肺曲霉病(IPA)是呼吸系统重要的机会性感染疾病,常见于血液系统疾病、中性粒细胞缺乏患者。近年来研究认为IPA在免疫功能正常或轻度受损的非中性粒细胞缺乏患者中并不少见,而临床常因其早期诊断困难错失最佳治疗时机,导致该病病死率高。1,3-β-D-葡聚糖试验及半乳甘露聚糖试验等血清学诊断方法常应用于IPA中性粒细胞缺乏患者的早期诊断,本文试对其应用于IPA非粒细胞缺乏患者诊断中的价值、研究现状及前景进行综述。

β-榄香烯对肝癌细胞SK-hep-1的迁移和侵袭力的影响

目的:观察β-榄香烯对肝癌SK-hep-1细胞的侵袭、转移等生物学行为的影响,探讨其对MMP2基因的调节。方法:将SK-hep-1细胞分为3组:control组、β-榄香烯(80μg/ml)组、TGF-β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)(10μg/ml)组,RT-PCR检测各组细胞的MMP2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)mRNA表达;通过划痕试验及transwell细胞侵袭试验进一步对β-榄香烯作用的肝癌细胞迁移和侵袭能力进行分析。结果:β-榄香烯作用肝癌细胞中MMP2mRNA表达低于control组和TGF-β1组(P<0.05)。β-榄香烯组穿膜细胞数(50±10)少于control组(150±16)及TGF-β1组(300±13),(P<0.05)。β-榄香烯组细胞的迁移数(92±8)明显低于control组(180±14)及TGF-β组(300±20),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:β-榄香烯能下调肝癌细胞SK-hep-1的MMP2mRNA表达,降低肝癌细胞的侵袭、迁移能力。

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P<0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P<0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。

pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨Annexin A1对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法构建重组质粒pcDNA3.1-AnnexinA1,转染至结直肠癌细胞株SW480中,G418筛选稳定表达株,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹检测转染前后Annexin A1mR-NA及蛋白表达;以空载体转染组及未转染SW480细胞作为对照,通过划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验对转染前后细胞的迁移和侵袭能力进行比较观察和分析。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1-Annexin A1载体;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测结果均显示,重组体pcDNA3.1-Annexin A1稳定转染细胞株中Annexin A1mRNA及蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染组细胞(P<0.01),而后两者间比较差异无统计学意义(P>0.05);重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组SW480细胞的迁移率(0.415±0.002)明显高于空载体转染组(0.267±0.003)及未转染组细胞(0.271±0.002),差异具有统计学意义(P<0.05),而后两者间差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染组(162.80±12.07)及未转染组(164.25±9.50)相比,重组体pcDNA3.1-Annexin A1转染组穿膜细胞数(221.75±12.07)增多,差异具有统计学意义(P<0.05).结论人Annexin A1基因表达上调能提高结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。

牛蒡子苷元对骨肉瘤细胞增殖和侵袭影响研究

目的:探讨牛蒡子苷元对骨肉瘤细胞增殖和侵袭影响。方法:采用人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,用不同浓度(0、10、20、40、80和100μmol/L)的牛蒡子苷元干预骨肉瘤细胞。采用MTT法测定细胞增殖能力、Transwell法测定细胞侵袭能力和流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:牛蒡子苷元能够抑制骨肉瘤细胞MG-63的增殖,降低肿瘤细胞侵袭性,促进凋亡,随着药物浓度的增加效果持续增加,具有统计学差异(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元可抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭,诱导细胞发生凋亡,具有良好的抗肿瘤效果。

胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中及血管形成中的作用和机制

背景:肿瘤干细胞及其分化的血管细胞对于化疗、分子靶向治疗并不敏感,虽然能够减少肿瘤总体的血供,却助长了肿瘤的浸入及转移,成为治疗失败的主要机制。目的:分析胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中的机制及其在血管形成中的作用。方法:取20株胃癌肿瘤干细胞CSC-G和普通胃癌细胞SGC7901细胞,普通癌细胞培养条件为10%的PBS;肿瘤干细胞CSC-G培养条件为:DMEM/F12(1∶1)、B27(2%)、表皮生长因子(20μg/L)。对2种细胞进行球形克隆形成试验、平板克隆试验以及Transwell侵袭性实验,观察胃癌肿瘤干细胞的侵袭性;测定CD44、E-cadherin中mR NA水平及蛋白表达水平,观察细胞的转移能力;利用细胞划痕试验、Transwell迁移实验和成环实验观察细胞的血管形成能力。结果与结论:(1)普通癌细胞均贴壁生长,肿瘤干细胞CSC-G为悬浮生长,生长后显微镜下显示为梭形间质形态;(2)球形克隆形成试验结果:普通癌细胞瘤球数量显著少于肿瘤干细胞CSC-G(P<0.05);(3)平克隆试验结果:胃癌肿瘤干细胞瘤球数量显著多余普通胃癌细胞(P<0.05);(4)转移性试验结果:胃癌肿瘤干细胞穿过基底膜细胞数显著多于普通胃癌(P<0.05);(5)划痕试验结果:肿瘤干细胞CSC-G迁移距离、成环试验中成环数量显著多于普通胃癌细胞(P<0.05)。(6)结果提示:胃癌肿瘤干细胞侵袭能力高于普通胃癌细胞,且胃癌干细胞迁移能力以及血管成形能力较强,它可以通过形成血管等途径来进一步促进胃癌的发生与发展。

血管内皮生长因子对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在口腔鳞状细胞癌侵袭转移中的作用。方法采用3H～TdR 掺入粘附试验测定VEGF对体外培养的口腔鳞状细胞癌细胞系TSCCa细胞同质性粘附作用以及Boyde Chamber 观察VEGF诱导口腔鳞状细胞癌细胞转移作用。结果1ng/ml、5ng/mlVEGF诱导TSCCa细胞60min、90min、120min,3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1773.67±289.64、2180.32±326.321、2256.43±310.31和1687.38±226.24、2045.68±273.26、1891.52±213.84,10ng/ml VEGF诱导TSCCa细胞60min、90min、120min,3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1436.69±326.03、1380.32±201.04、1228.56±237.07,显著低于对照组60、90、120min的2184.49±314.72、2746.53±255.17、3560.14±377.35(P<0.05或0.01),用VEGF 1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml培养口腔鳞状细胞癌2h,Boyde Chamber小室下室浸润的口腔鳞状细胞癌细胞数分别为6.67±1.78、17.17±2.38、22.33±2.54×104/ml,分别高于对照组2.48±1.02×104/ml(P<0.05或0.01)。结论VEGF可以促进口腔鳞状细胞癌细胞转移,与VEGF降低口腔鳞状细胞癌细胞的同质性粘附作用有关。

MiR-26b靶向hENT1通过RhoA/ROCK-1通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨miR-26b在肺癌组织中的表达及miR-26b在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:q PCR检测肺癌和正常肺组织中miR-26b的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-26b与人平衡核苷转运蛋白1(human equilibrative nucleoside transporter 1,hENT1)的相互作用;Transwell侵袭试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-26b的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western印迹检测h ENT1,ROCK-1,Rho A蛋白的表达情况;鬼笔环肽染色观察miR-26b-mimic处理后细胞骨架的变化情况;裸鼠皮下成瘤试验检测miR-26b-mimic对肺癌成瘤大小及体积的影响。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-26b表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-26b表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-26b能与h ENT1的3'-UTR特异性结合;miR-26b可以调控肺癌A549细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-26b可以抑制h ENT1,ROCK-1,Rho A的表达;miR-26b-mimic处理后,F-actin染色明显减少,细胞膜皱褶形成明显减少,伪足形成明显减少;裸鼠皮下成瘤试验显示:miR-26b-mimic处理后肿瘤体积和质量明显减小。结论:MiR-26b在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期、分级及淋巴结转移与否密切相关,同时靶向h ENT1通过Rho A/ROCK-1信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移。

TAMs外泌体对三阴性乳腺癌MDA⁃MB⁃231细胞迁移、侵袭的影响

目的:观察肿瘤巨噬细胞来源的外泌体对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移及侵袭的影响。方法:将人乳腺癌MDA-MB-231分为实验组与空白对照组,采用多步超速离心法从人外周血的单核细胞系(THP-1)的培养液上清中分离出外泌体,采用外泌体内吞试验、Transwell法及Celigo划痕实验检测外泌体对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力影响。结果:外泌体可以被MDA-MB-231细胞摄取和内吞,3 h外泌体进入胞浆,6 h富集显著。与空白对照组比较,实验组Transwell小室转移细胞数(241.00±3.35)及转移细胞数相比正常细胞的变化值(144.00±2.33)显著增加(P<0.05)。外泌体处理的MDA-MB-231细胞24 h划痕迁移率具有同样的结果,实验组为(39.86±3.47)%,对照组为(24.48±2.97)%,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肿瘤相关巨噬细胞外泌体可以成功被摄取内吞进入MDA-MB-231细胞,在体外提高MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。

G试验阴性的急性白血病合并侵袭性真菌感染3例报告

1，3-β-D-葡聚糖（BG）广泛存在于真菌细胞壁，细菌、病毒、人体细胞及其他病原菌无此成分，故BG作为真菌抗原有较高的特异性。BG试验（G试验）对真菌感染的早期诊断与治疗具有重要意义。本文对3例G试验阴性的急性白血病合并侵袭性真菌感染（IFI）患者进行分析，现报告如下。

U0126对黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用

目的:评价U0126对人黑素瘤细胞A375侵袭的抑制作用。方法:人黑素瘤A375细胞在6孔细胞培养板中培养,加U0126处理过夜,然后通过观察A375细胞的细胞形态、细胞移动及细胞侵袭判断U0126对A375细胞的抑制。蛋白电泳试验检测U0126对黑素瘤细胞A375的ERK1/2蛋白磷酸化的影响。结果:U0126诱导A375细胞产生肌动蛋白(actin)张力丝,导致细胞形态改变;A375细胞的移动和细胞侵袭被抑制。结论:U0126可能通过抑制黑素瘤的ERK1/2蛋白的磷酸化从而抑制人黑素瘤细胞A375的侵袭。

Cyclin E表达对于原代乳腺癌细胞侵袭性的影响

目的:从细胞学角度探讨Cycli E表达水平与原代乳腺癌细胞侵袭之间的关系。方法:手术中无菌条件下切取乳腺癌组织,制备原代乳腺癌细胞悬液,运用Transwell小室进行原代乳腺癌细胞侵袭力实验;获取具有不同侵袭力的原代乳腺癌细胞,再用免疫荧光技术检测不同侵袭能力的原代乳腺癌细胞cyclin E的表达水平,研究两者相关性。结果:具有不同侵袭力的乳腺癌细胞表达不同强度的Cyclin E蛋白,分别计数5个高倍视野,其均数分别为81.11±17.25及31.06±4.43,P<0.05。侵袭性试验结果显示:Cyclin E阳性表达的原代乳腺癌细胞经24小时培养以后浸润到Transwell聚碳酸盐微孔滤膜下的细胞数的均值为:76.32±11.40/高倍视野;而Cyclin E阴性表达的原代乳腺癌细胞的均值为21.56±13.22/高倍视野;P<0.05。结论:Cyclin E的表达差异与原代乳腺癌细胞的侵袭性有关,Cyclin E高表达者其侵袭性显著强于Cyclin E低表达者。

甘丙肽抑制大鼠垂体腺瘤细胞体外侵袭性

目的探讨甘丙肽对大鼠垂体腺瘤细胞侵袭性的作用及其受体机制。方法提取大鼠垂体腺瘤GH3细胞RNA,反转录后测定甘丙肽及其3个受体亚型的表达情况;将大鼠垂体腺瘤GH3细胞分为对照组、甘丙肽药物处理组和选择性甘丙肽2型受体激动剂AR-M1896组,利用MTT方法检测对照组和实验组在给药后12、24和36 h各分组细胞活力,观察其增殖情况;应用Transwell侵袭模型观察各组腺瘤细胞侵袭能力。结果甘丙肽与其3个受体亚型在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中均有表达,其中以受体2表达量较高;各组细胞在药物处理12、24和36 h时细胞增殖无显著差异;GH3细胞Transwell侵袭实验中甘丙肽药物组侵袭细胞数量明显少于对照组(P<0.01);甘丙肽受体激动剂AR-M1896组与对照组相比腺瘤细胞侵袭性明显降低(P<0.05);AR-M1896与甘丙肽对GH3细胞的抑制效果差异无显著性。结论甘丙肽能明显抑制大鼠垂体腺瘤细胞的侵袭性,且此作用可能主要由甘丙肽2型受体介导。

芒果苷对淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭及相关基因Tiam1表达的影响

目的:观察芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖、侵袭能力及T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)表达的影响,以探讨芒果苷抗淋巴瘤的初步作用机制。方法:用MTT法检测芒果苷对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,用Transwell侵袭实验检测芒果苷对Raji细胞侵袭能力的抑制作用,用RT-PCR法检测芒果苷作用Raji细胞后对Tiam1的mRNA表达的影响。结果:MTT法发现,不同浓度的芒果苷分别与Raji细胞共同孵育72 h后,芒果苷对Raji细胞增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性。Transwell侵袭实验发现,用不同药物浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,可抑制Raji细胞穿透Transwell小室,随着药物浓度的增加其穿透滤膜的细胞数明显具有剂量依赖性。分别用不同浓度的芒果苷作用Raji细胞24 h后,发现Tiam1的mRNA表达量明显减少,且呈明显的量效关系。结论:芒果苷能抑制人淋巴瘤Raji细胞的增殖和侵袭,其机制可能与同细胞侵袭有密切关系的Tiam1的mRNA表达下调有关。

雷公藤甲素抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B侵袭转移的初步研究

目的:探讨雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B侵袭能力的影响。方法:雷公藤甲素干预HEC-1B细胞后,以明胶酶谱法检测细胞侵袭相关蛋白MMP-2/MMP-9的表达;Transwell法检测细胞侵袭能力的改变。结果:随着雷公藤甲素作用时间的延长,侵袭相关蛋白MMP-2/MMP-9的表达逐渐降低,HEC-1B细胞的侵袭能力亦逐渐下降,呈时间依赖性。结论:雷公藤甲素能通过下调侵袭相关蛋白MMP-2/MMP-9的表达,从而抑制HEC-1B细胞的侵袭能力。

SATB1基因沉默抑制食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭及迁移能力

背景:近来有研究证实SATB1与肿瘤的发生及发展有关,但其在肿瘤转移中的机制尚不明确。目的:观察特异性干扰SATB1基因表达对食管鳞状细胞癌TE-1中肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移的影响。方法:采用免疫磁珠分选法从人食管鳞状细胞癌TE-1中分选p75^(NTR)阳性细胞与p75^(NTR)阴性细胞,检测p75^(NTR)阳性细胞的体外增殖能力及克隆形成能力。取对数生长期的p75^(NTR)阳性肿瘤干细胞样细胞,转染组利用Lipofectamine 2000脂质体法将SATB1基因si RNA转染至细胞中,同时设置空载体转染的p75^(NTR)阳性细胞为对照,转染后72 h,采用Western blot法检测2组细胞SATB1蛋白表达,Transwell小室实验检测2组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot与q RT-PCR法检测基质金属蛋白酶2/9的表达。结果与结论:(1)与p75^(NTR)阴性细胞比较,p75^(NTR)阳性细胞培养3,5,7 d的细胞增殖明显加快(P<0.05);(2)p75^(NTR)阳性细胞的克隆形成率明显高于p75^(NTR)阴性细胞(P<0.05);(3)转染后72 h后,转染组SATB1基因蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),迁移能力与侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),基质金属蛋白酶2/9的基因及蛋白表达明显低于对照组(P<0.05);(4)结果提示,以si RNA干扰SATB1基因后,可抑制食管鳞状细胞癌TE-1肿瘤干细胞样细胞侵袭、迁移,可能与其下调基质金属蛋白酶2/9的表达有关。

血清和支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖抗原检测对非中性粒细胞减少侵袭性肺曲霉菌病的诊断价值

目的 研究血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)半乳甘露聚糖(GM)试验对非中性粒细胞减少侵袭性肺曲霉菌病(IPA)的诊断价值。方法 纳入55例疑似非粒细胞减少IPA并接受血清和BALF GM检测的患者为研究对象,所有患者经非粒细胞减少IPA标准确诊为IPA者25例,纳入IPA组;排除IPA后30例纳入对照组。所有患者均接受支气管镜检查,行血清和BALF GM检测。比较IPA组和对照组血清及BALF GM值,利用ROC曲线分析并比较血清及BALF GM值对非粒细胞减少IPA的诊断价值,并采用一致性检验分析血清及BALF GM值分别诊断非粒细胞减少IPA的价值。结果 IPA组血清GM值及BALF GM值均显著高于对照组(P <0.05)。经ROC曲线处理,结果显示血清及BALF GM值对非粒细胞减少IPA均有一定诊断价值,曲线下面积分别为0.789、0.835,且差异均有统计学意义(P <0.05)。血清及BALF GM值联合诊断非粒细胞减少IPA的灵敏度为84.00%,特异度为83.33%,准确率为83.64%,阳性预测值为80.77%,阴性预测值为86.21%,Kappa值为0.671。IPA组患者血清GM值与BALF GM值呈显著正相关(r=0.659,P <0.05)。结论 BALF GM检测对非中性粒细胞减少IPA的诊断价值较血清GM试验高,可作为非中性粒细胞减少IPA患者早期诊断的一项检测手段。

MiR-218通过调控Robo1抑制胃癌细胞的侵袭和转移

本研究首先用反复的Transwell迁移和侵袭实验分别筛选、获得了高转移潜能（MKN28-M，SGC7901-M）和低转移潜能（MKN28-NM，SGC7901-NM）的胃癌细胞亚系，并对其生物学特性进行了鉴定。