人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立

目的 获得鼠胚与人早孕蜕膜单层细胞的共培养系统。方法 经过细胞培养、传代获得蜕膜单层细胞 ;冻融后接种获得冻融蜕膜单层细胞 ;对单层细胞作免疫组织化学检查其雌、孕激素受体的表达。结果 人早孕蜕膜细胞有良好的体外培养活力 ,易于获得培养及传代。将获得的冻融蜕膜单层细胞进行雌、孕激素受体检查 ,见阳性表达。获得昆明白小鼠超促排卵后的单细胞受精卵 ,分别与传代及冻融的蜕膜细胞共培养获得囊胚孵出。结论 人早孕蜕膜单层细胞与鼠胚共培养系统的建立为人胚胎与其冻融的自体子宫内膜单层细胞共培养的研究提供了可行性分析。

人跨模型和跨膜稳定型肿瘤坏死因子-α的基因表达产物对体外培养的脑胶质瘤细胞的影响

为了探讨人跨膜型和跨膜稳定型肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)对脑恶性胶质瘤基因治疗的有效方法 ,研究应用了基因重组、细胞培养以及免疫组化等技术 ,通过真核表达载体 pc DNA3转染 NIH3T3细胞 ,并在体外观察了 TNF- α对脑胶质瘤生长的影响。结果显示 :与对照组相比 ,TM- TNF- α组和 TM- TNF- αm组中 GFAP和 S- 10 0免疫反应阳性肿瘤细胞的数量、胞体截面积、周长、平均光密度皆明显减少。统计学分析提示差异有显著性意义。这表明 TNF- α基因的表达可明显抑制胶质细胞的生长和分化。而且 ,还发现跨膜稳定型 TNF- α的杀瘤效果较跨膜型 TNF- α强。这为 TNF- α基因用于胶质瘤的基因治疗提供了一定的实验依据 ,提示大剂量的 TNF- α在临床治疗可能产生毒副作用。

人肾小球系膜细胞原代培养方法的改进

背景:肾小球系膜细胞原代培养成功率低,生存时间短,传代次数少。其中分离提取肾小球一直是培养高纯肾小球系膜细胞的最大瓶颈。目的:建立一种操作简单、成功率高、重复性好的人肾小球系膜细胞原代培养方法。方法:取自愿水囊引产的胎儿肾,采用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞。相差显微镜、透射电镜观察系膜细胞形态,免疫荧光技术鉴定细胞表型,激光共聚焦显微镜观察波形蛋白的表达。结果与结论:培养的肾小球系膜细胞呈梭形/不规则星形和细长形,胞质中各种细胞器丰富,细胞突起明显,胞膜上有很多微绒毛,细胞表达α-肌动蛋白、肌球蛋白、波形蛋白、结蛋白,而不表达细胞角蛋白、Ⅷ因子,激光共聚焦显微镜下发现系膜细胞波形蛋白表达阳性并具有特征性纤维束。说明培养的系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特征。肾皮质组织块法合优生选择法是一种简单、高效的培养人肾小球系膜细胞的方法。

大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平跨膜转运的实验研究

目的:研究成年大鼠牙槽骨成骨细胞对硝苯地平的跨膜转运,为人工种植体给药系统以及牙根管给药系统的设计提供实验依据。方法:将大鼠牙槽骨成骨细胞及MC3T3-E1细胞与含有药物(20ug/ml、100ug/ml的硝苯地平)的磷酸盐缓冲液(PBS)共同孵育1、3、5、10、15、20min后,收集各时间点细胞,用高效液相色谱法测定细胞内药物含量,考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。用细胞内药物含量与细胞蛋白的比值作为观察药物转运量的检测指标。结果:硝苯地平可以被成骨细胞及MC3T3-E1细胞转运至细胞内。(1)转运量与细胞种类有关。浓度相同时,成骨细胞在各时间点的转运量明显均大于MC3T3-E1细胞的转运量(P<0.01)。(2)转运量与药物浓度有关。药物浓度增高,转运量越大(P<0.05)。(3)转运量与时间有关。结论:大鼠牙槽骨来源成骨细胞及MC3T3-E1细胞可以跨膜转运硝苯地平。转运量与药物浓度、细胞种类、孵育时间有关。从而初步验证了人工种植牙全身给药系统的可行性。

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子对系统性红斑狼疮作用的研究进展

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)对B淋巴细胞的稳态和自身免疫起负调控作用。敲除TACI基因的小鼠出现狼疮样自身免疫性疾病,同时TACI-Fc可影响B细胞的增生和存活,抑制抗体的产生,现已作为一种生物制剂用于治疗SLE,所以对TACI的研究及其在临床上的应用越来越受关注。本文就目前对TACI生物学作用及其应用于SLE的治疗研究进行综述。

人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立

目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度。结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持。上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04。结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制。

细胞的跨膜信号转导功能

本文从几个主要方面对细胞的跨膜信号转导进行了探讨

Th17/Treg相关因子对T84细胞单层模拟的肠黏膜屏障通透性的影响

目的:在Transwell细胞跨膜培养系统中培养T84细胞单层模拟肠黏膜屏障,并对Th17/Treg细胞相关因子处理前后T84细胞单层的跨上皮电阻(TER)和辣根过氧化物酶(HRP)通过率进行检测,以探讨其对肠黏膜屏障通透性的影响。方法:将不同浓度的IL-17、IL-22和IL-10因子分别加入到Transwell跨膜系统培养的T84细胞单层中,之后测量不同时间(0、6、12、24和48 h)T84细胞单层的TER和不同时间(6、24和48 h)HRP通过率的变化。结果:当不同浓度IL-17和IL-22处理时间大于6 h时,继续增加细胞因子的浓度和继续延长作用时间,T84细胞单层TER会逐渐下降并且HRP通过率逐渐增加。当IL-17和IL-22浓度大于100 ng/ml,继续增加其浓度,T84细胞单层的TER和HRP通过率均未见明显变化。当不同浓度IL-10作用于T84细胞后,随着时间和浓度的变化,T84细胞单层TER和HRP通过率均未发生明显变化。结论:在一定的浓度范围内,IL-17和IL-22均可以造成T84细胞单层通透性的增加,并且随着浓度的增加和作用时间的延长,T84细胞单层通透性的增加也越来越明显。但是IL-10并不影响T84细胞单层的通透性。

用骨髓干细胞培养出人类心脏瓣膜细胞首次在英国成功

由伦敦帝国学院雅各布教授领导的研究小组在英国黑尔菲尔德医院成功使用从人骨髓中提取的干细胞培养出了心脏瓣膜细胞。这些心脏瓣膜细胞被植入到骨胶原制作的支架上，发育成了直径3cm的心脏瓣膜片。但目前培植出来的瓣膜还无法抵抗循环系统的拉力。也不合重要神经。研究小组认为，如果今年下半年的动物实验取得成功。3年内这项技术就可能用于人类心脏瓣膜的移植手术。

多细胞相互作用培养的简易方法

在基因治疗研究中为研究转染外源基因的细胞对机体其他细胞的影响，目前生物学研究中常将不同种类的细胞在一起联合培养（co-culture）．以模拟基因治疗在体内的作用环境^[1]，传统的方法是使朋TRANSWELL培养瓶，利用生物半透膜将不同细胞隔开分别培养^[2]该方法具有培养瓶价格过于昂贵、半透膜之间存在一定浓度差不利于细胞间相互作用^[3]TRANSWELL培养瓶结构复杂、瓶口相对较小，细胞收集困难等缺点。

挖掘“物质跨膜运输”的“能量本质”的教学探讨

生命系统存在于无机世界之中,必然遵循万物之理——物理。教师将生物学知识放在物理情境下解释,将有助于学生更加准确地把握知识点。《普通高中生物课程标准（实验稿）》中要求：初步形成生物体的结构与功能、局部与整体、多样性与统一性的观点。

Notch-Delta信号系统与神经胶质细胞的发育

Notch-Delta信号系统是一个在生物进化中起重要作用的古老而保守的机制。通过Notch受体-Delta配体的相互作用产生旁侧抑制效应,控制细胞对各种内、外源性发育信息产生反应的能力,最终导致细胞特异性分化命运的决定,是一种影响胚胎发育、器官形成和形态发生的普遍机制,是近年来发育学、分子生物学、遗传学等的研究热点。最近发现,除了抑制神经元分化以外,Notch鄄Delta系统还可以促进神经胶质细胞的产生,本文对Notch鄄Delta及其在神经胶质细胞发生发育中的研究进展作一综述。

肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞的体外分离、鉴定及其原代培养吸收模型的构建与评估

本试验旨在评估十二指肠上皮细胞不同接种密度对细胞紧密连接性及细胞活力的影响,为建立肉鸡鸡胚体外原代培养十二指肠上皮细胞吸收模型选择最佳的细胞接种密度。试验采用单因子完全随机试验设计,共设3个组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞接种密度分别为2.90×10~6、6.25×10~6、8.75×10~6个/m L,每个组6个重复,共培养4 d。结果表明:1)刚分离的十二指肠上皮细胞团呈球形,且细胞团的大小均一,悬浮于培养液中,贴壁后细胞团开始向外伸展,逐渐铺成片,细胞之间界限清晰、贴壁均匀,呈单层"铺路石样"生长。2)经碱性磷酸酶染色,阳性试验组的十二指肠上皮细胞胞浆被染成了蓝黑色,阴性对照组的十二指肠上皮细胞不着色。3)在细胞培养的48和72 h,Ⅰ组和Ⅱ组细胞的跨膜电阻(TEER)值均满足大于300Ω·cm2的试验要求,酚红透过率均满足小于5%的试验要求,并且Ⅰ组细胞的TEER值显著高于Ⅱ组(P<0.05),细胞酚红透过率显著低于Ⅱ组(P>0.05)。4)在细胞培养的24和48 h,Ⅰ组细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活力均显著低于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.05)。以上结果表明,细胞接种密度为2.90×10~6个/m L,培养时间为48 h时,细胞间界限清晰、生长状态良好、紧密连接性强,细胞活力最佳,说明原代培养肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞物质吸收模型构建成功,可为后续十二指肠上皮细胞的吸收规律及其分子机制的研究提供了良好的试验模型。

丙型肝炎病毒与JAK-STAT信号转导系统

0引言 丙型肝炎病毒(HCV)感染具有显著的慢性化倾向,而且只有部分患者对于干扰素α(IFN α)的治疗有较好的应答.为什么会存在这种情况和差别,这是与HCV-肝细胞之间相互作用的分子生物学机制和基础来决定的[1].

髓核细胞诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向的分化

背景:国内外已有很多文献相继报道了用骨髓间充质干细胞-藻酸盐复合植入材料来修复大鼠退变的腰椎间盘,但尚缺少对此复合物与正常髓核细胞之间的各项生物学指标的比较。目的:在Transwell非接触共培养条件下,研究髓核细胞对骨髓间充质干细胞的诱导作用。方法:全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定,取第3代骨髓间充质干细胞及髓核细胞复合藻酸盐接种于Transwell共培养系统中,上室接种骨髓间充质干细胞藻酸盐复合物,下室接种髓核细胞藻酸盐复合物,共培养7d后回收上层骨髓间充质干细胞。结果与结论:RT-PCR方法检测共培养组Ⅱ型胶原、Sox-9和多功能蛋白聚糖的mRNA表达均接近正常髓核细胞。说明共培养条件下髓核细胞能诱导骨髓间充质干细胞向髓核方向分化。

蛋白激酶C调控大肠癌HT-29细胞粘附、侵袭能力的研究

目的探讨蛋白激酶C(ProteinKinaseC,PKC)对大肠癌HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。方法采用体外细胞培养的方法,通过PKC激动剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT-29细胞粘附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)能力、侵袭血管小块的形态学和侵袭人羊膜能力影响的研究,探讨PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。结果采用3H-TdR标记的同位素液闪测定发现,PMA不同浓度处理HT-29细胞可使其粘附HUVECs的能力增强,在一定浓度范围内,随着PMA浓度的增加,粘附作用也逐渐增强,SP可拮抗HT-29细胞粘附HUVECs的作用。侵袭血管小块的扫描电镜观察发现,PMA处理细胞后,细胞侵袭血管的能力增强,细胞伸出伪足,向血管内侵袭,而SP可拮抗PMA作用,细胞侵袭性下降。PMA可显著增强HT-29细胞侵袭人羊膜的能力,100nmol/LPMA诱导4h,可使HT-29细胞在体外获得最大的侵袭羊膜的能力,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用。结论PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力存在调控作用,PKC的激活使HT-29细胞粘附性、侵袭性增强,而PKC的抑制使HT-29细胞粘附性、侵袭性下降。

基于黏附斑激酶跨膜信号系统探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞迁移的调控机制

目的:基于黏附斑激酶(FAK)为中心的细胞外基质-整合素-细胞骨架跨膜信号系统,探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞迁移的调控机制。方法:对输卵管妊娠绒毛滋养层细胞进行体外培养与鉴定,以含化瘀消癥复方水提液的培养基对输卵管妊娠滋养细胞进行培养,分为A(空白)组、B(FAK抑制剂Y15)组、C(Y15+中药中剂量)组、D(中药低剂量)组、E(中药中剂量)组、F(中药高剂量)组;应用Transwell法检测各组药物对滋养细胞迁移力的影响,Western Blot法检测各组药物对FAK、p-FAK、整合素β1(Integrinβ1)、桩蛋白(Paxillin)、尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)蛋白表达的影响。结果:与A组比较,各给药组均能显著抑制细胞的迁移能力(P<0.05),各中药组呈一定的剂量依赖性;与A组、B组比较,C组、F组均可下调FAK、p-FAK、Integrinβ1、Paxillin、uPA蛋白表达水平(P<0.05);各中药组对蛋白的影响呈一定的浓度依赖性。结论:化瘀消癥复方可能发挥与FAK抑制剂类似的效应,起到抑制输卵管妊娠滋养细胞迁移的作用,其机制可能是与下调Integrinβ1,抑制FAK的信号转导,引起下游Paxillin的表达减少,负调控uPA,进而降调滋养细胞黏附斑激酶跨膜信号系统活性相关。

Caco-2细胞不同接种密度的模型评价

目的:观察不同的细胞接种量在不同时间对细胞模型评价指标的影响。方法:细胞采用的Transwell板接种培养21天并采用TEER(transepithelial electrical resistance)测定和酚红透过率来评价细胞模型完整性和通透性,考察不同细胞接种量在不同时间对细胞单层完整性的影响。结果:不同细胞接种量在生长第16天酚红透过率均明显降低,21天透过率均小于0.5%,TEER在21天达到>300Ω/cm^2。结论:建立的细胞模型完整性,通透性符合药物吸收转运试验要求,培养条件应随细胞状态和接种密度做出调整。

Robo4膜蛋白的功能研究进展

Robo为保守单跨膜受体蛋白．是一种神经黏附分子，包括Robol、Rob02、Rob03、Rob044个家族成员。Robo蛋白在神经系统中的导航作用已被公认。Rob04又名MagicRoundabout．是新近发现的Roundabout家族成员．因其特异性表达于内皮细胞而得名。Rob04与家族的其他成员相比。具有结构的特殊性和表达的特异性。最近发现Rob04在多个系统中发挥着重要作用，但其功能及具体机制尚不明确。