Tre酶真核表达载体构建及其特异性识别loxLTR序列的功能鉴定

目的清除人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)前病毒是治愈艾滋病的关键。构建Tre酶真核表达载体,鉴定其特异性识别HIV前病毒中所含有的lox LTR序列功能。方法经基因合成、PCR、酶切、连接等基因重组技术将Tre基因插入pc DNA3.1真核表达载体中,将EGFPp A-Lox LTR序列插入pm Cherry-N1载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用电穿孔法将构建的载体转染到He La细胞,用荧光显微镜观察荧光强弱及变化。结果经PCR、酶切、电泳、测序分析鉴定,Tre酶真核表达载体构建正确,转染He La细胞后,能特异性识别并剪切lox LTR序列。结论构建的Tre酶真核表达载体可在He La细胞中表达,并特异性识别lox LTR序列。