茵芍二黄汤治疗原发性胆汁性胆管炎及对Treg/TGF-β轴调节的初步研究

目的:观察茵芍二黄汤联合牛磺熊去氧胆酸胶囊治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)的临床疗效及其对外周血中Treg细胞及转化生长因子-β(TGF-β)、白介素10(IL-10)的影响。方法:60例PBC患者,参照数字法随机分为对照组29例及治疗组31例。对照组患者给予牛磺熊去氧胆酸胶囊1粒/次,3次/d;治疗组患者在对照组用药基础上加用茵芍二黄汤,1剂/d,煎煮后早晚分服,两组患者治疗疗程均为24周。观察两组患者中医临床症状积分,治疗前后血清TBil、ALT、AST、ALP、GGT情况,比较两组患者治疗前后临床疗效;检测两组患者治疗前后外周血中Treg细胞及血清TGF-β、IL-10水平。结果:经治疗两组患者中医症状积分、肝功能均明显改善(P<0.05),治疗组优于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后外周血中Treg细胞及血清中TGF-β、IL-10明显增多(P<0.05),治疗组高于对照组(P<0.05)。结论:茵芍二黄汤联合牛磺熊去氧胆酸胶囊治疗PBC可显著改善患者临床症状及肝功能,通过调节外周血Treg细胞及其表达的特异细胞因子TGF-β、IL-10水平是其治疗该病可能的机制之一。

基于肠-免疫-皮肤轴研究犀角地黄汤对银屑病小鼠肠道Th17/Treg失衡的影响

目的:探讨犀角地黄汤对银屑病模型小鼠肠道Th17/Treg失衡的影响。方法:将30只BALB/c小鼠在造模成功后随机分为模型组、中药低浓度组、中药中浓度组、中药高浓度组、空白对照组各6只。除空白组外,其余4组均采用背部涂抹5%咪喹莫特乳膏42mg(四川明欣药业有限责任公司,批号110206)建立银屑病模型。模型组与空白对照组每日予以相同剂量的蒸馏水;犀角地黄汤低、中、高浓度分别对应中药治疗的低、中、高三组,浓度为80mg/mL、160mg/mL、320mg/mL,每只小鼠按照0.1mL/10g体重的体积灌胃。1次/d,连续2周。观察银屑病样皮损面积和严重程度PASI评分、小鼠肠系膜淋巴结中IL-23、IL-17及TNF-α细胞因子水平、小鼠粪便中肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌等4种菌在治疗前后的表达情况。结果:与模型组相比,小鼠PASI评分降低,IL-23、IL-17及TNF-α的水平降低,P<0.05,差异有统计学意义;模型组小鼠相对于空白组乳酸杆菌、双歧杆菌数目减少,肠球菌及肠杆菌数增多;犀角地黄各剂量组乳酸杆菌、双歧杆菌数明显少于模型组(P<0.05),肠球菌、肠杆菌数明显多于模型组(P<0.05)。结论:犀角地黄汤可以降低银屑病小鼠肠系膜中IL-23、IL-17及TNF-α的水平,改善小鼠皮损的炎症反应及肠道菌群结构。

泰山磐石散对不明原因复发性流产模型Treg/Th17免疫平衡的影响

目的 观察泰山磐石散对不明原因复发性流产模型小鼠胚胎丢失率、子宫净重、蜕膜组织白细胞介素17A(IL-17A)、转化生长因子β(TGF-β)表达水平的影响,探讨其治疗机制。方法 将CBA/J雌鼠与DBA/2雄鼠建立复发性流产模型,按受孕时间随机分为4组,即盐水组和中药低、中、高剂量组,CBA/J雌鼠与BALB/C雄鼠建立正常组模型。确认妊娠后盐水组与正常组妊娠14 d内予0.9%氯化钠溶液,中药各组予低、中、高剂量中药灌胃。计算胚胎丢失率,称重胚胎;苏木精伊红染色观察蜕膜组织结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组孕鼠组织匀浆上清液IL-17A和TGF-β吸光度;计算TGF-β/IL-17A比值。结果 与正常组比较,盐水组形态紊乱,胚胎丢失率升高(P=0.001),子宫净重降低(P<0.05),TGF-β表达水平下降(P<0.05),IL-17A表达增加(P<0.05),TGF-β/IL-17A比值向IL-17A偏倚(P<0.05)。与盐水组比较,中药高剂量组结构规整;中药高、中剂量组胚胎丢失率降低(P<0.05);中药高剂量组的子宫净重增加(P<0.05),TGF-β表达增加(P<0.05),IL-17A表达下降(P>0.05);中药各组TGF-β/IL-17A比值均向TGF-β偏倚(P<0.05),但每个中药组间的差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论 泰山磐石散可以降低胚胎丢失率,提高子宫净重,增加TGF-β表达,降低IL-17A表达,改变孕鼠蜕膜组织TGF-β/IL-17A表达平衡,可能通过调节孕鼠调节性T细胞(Treg)与辅助性T细胞Th17的偏倚改善母胎界面免疫平衡,最终改善妊娠结局。

中医药调控TGF-β/Smad/MMP轴干预非小细胞肺癌的研究进展

干预转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad(small mothers against decapentaplegic,Smad)/基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)轴调控在肺癌发生、发展过程中对肺癌微环境起到重要的影响作用,TGF-β/Smad/MMP轴通过调控肿瘤细胞上皮间质化改变、促进肿瘤细胞转移、促进血管上皮细胞增生等机制,影响肿瘤组织与细胞微环境并形成远处转移复发。通过论述中医药调控TGF-β/Smad/MMP轴抑制肿瘤细胞增殖与侵袭、抗血管生成、抗转移等方面的研究进展,阐明TGF-β/Smad/MMP生物轴有望成为实体肿瘤治疗的新靶点,并成为中医药防治肺癌发展的重要干预机制。

肠道菌群参与慢性阻塞性肺疾病Th17/Treg失衡机制的研究进展

免疫因素是慢性阻塞性肺疾病发病的关键环节,在疾病的发生发展中起重要作用。肠作为与肺同源的器官,其代谢产物及其他信号分子能够通过血液及淋巴管循环迁移至肺,进而发挥作用。近年研究发现肠道菌群通过影响肺部免疫平衡从而在慢性阻塞性肺疾病的进展中发挥重要意义。本文基于“肠-肺轴”这一结构基础,就肠道菌群参与调节慢性阻塞性肺疾病中Th17/Treg免疫失衡的机制进行综述,为慢性阻塞性肺疾病的防治提供新的思路。

TRB3调控TGF-β1/Smad3/PAI-1轴对胃癌细胞功能的影响

目的研究TRB3通过调控TGF-β1/Smad3/PAI-1轴对胃癌细胞功能的影响。方法采用Western blot法检测TRB3蛋白在胃癌细胞系(AGS、HGC-27、NCI-N87、SNU5和MKN45)和正常人胃黏膜细胞GES-1中的表达。敲低胃癌细胞AGS TRB3,采用CCK-8、荧光激活细胞分选仪(fluorescenceactivated cell sorter,FACS)、Transwell实验、划痕实验和Western blot法分别检测胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况和TGF-β1/Smad3/PAI-1信号通路蛋白的改变;在此基础上进行转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理,再次重复上述实验。结果与GES-1细胞比较,胃癌细胞系中TRB3蛋白表达增多。下调胃癌细胞TRB3,细胞增殖能力下降,活力降低(52%±12%,P<0.001);迁移能力下降,细胞愈合率降低(24%±6%,P<0.001);侵袭能力下降,侵袭细胞数降低(107±23,P<0.001);TGF-β1/Smad3/PAI-1通路被抑制,TGF-β1、p-SMAD3和PAI-1表达减少;细胞凋亡增多,凋亡细胞比例升高(17%±3%,P<0.001);在此基础上进行TGF-β1处理,细胞增殖能力增强,细胞活力升高(73%±10%,P<0.01);迁移能力增强,细胞愈合率升高(63%±8%,P<0.01);侵袭能力增强,侵袭细胞数升高(252±20,P<0.01);细胞凋亡减少,凋亡比例降低(12%±2%,P<0.01)。结论TRB3通过激活TGF-β1/Smad3/PAI-1信号通路促进胃癌发展。

肝癌组织中TGF-β1表达与Treg浸润的关系及其临床意义

背景与目的:调节性T细胞(Treg)在肿瘤组织局部浸润增多,而对其来源报道较少。体外研究表明转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)能诱导Treg的产生,而肝癌组织中TGF-β1表达与Treg浸润的关系尚未阐明。本研究旨在检测肝癌组织中TGF-β1表达,并分析其与Treg浸润的关系,探讨TGF-β1表达,Treg浸润的临床意义。方法:采用免疫组织化学染色的方法检测102例肝癌组织、癌旁肝组织中TGF-β1和Foxp3表达(Foxp3+)。结果:肝癌组织中TGF-β1低表达组41例,高表达组61例,高表达阳性率为59.8%;癌旁组织中TGF-β1低表达组22例,高表达组80例,高表达阳性率为78.4%,癌组织和癌旁高表达率差异有统计学意义(P=0.001)。肝癌组织中Foxp3+细胞平均密度为2.98个/HP,癌旁极少见或未见。肝癌组织中TGF-β1与Foxp3表达呈正相关(r=0.228,P=0.021)。肝癌组织中TGF-β1表达在术前血浆AFP浓度高水平组高于低水平组(P=0.023),而与肿瘤直径、肿瘤包膜、肝硬化等临床病理资料无关;肝癌组织中Foxp3表达与肿瘤直径、肿瘤包膜、肝硬化等临床病理资料无关。肝癌组织中TGF-β1表达高低水平组患者5年生存率差异无统计学意义(P=0.790);肝癌组织中Treg高水平组患者的5年生存率低于低水平组(25%vs.44%,P<0.005)。多因素Cox回归模型分析显示Foxp3+细胞数量、肿瘤包膜是影响肝癌患者预后的独立危险因素(P值分别为0.021、0.001)。结论:肝癌组织中Treg浸润可能与TGF-β1表达有关,两者的关系需进一步研究;肝癌组织中Treg数量可作为预测患者术后预后的免疫学指标。

Th17/Treg平衡在子痫前期发病中的变化及IL-21、TGF-β对其调节作用的研究

目的:探讨辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)在子痫前期(PE)发病中的变化以及白介素-21(IL-21)、转化生长因子-β(TGF-β)对其调节作用。方法:选择在甘肃省妇幼保健院确诊的PE患者35例及同期正常妊娠孕妇30例为研究对象。晨起空腹采集外周静脉血4ml,分离培养外周血单个核细胞,采用流式细胞仪检测外周血Th17和Treg细胞的数量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血IL-21和TGF-β的水平。结果:PE组Th17细胞在CD4^+T细胞中的占比高于正常妊娠组(P<0.05),而Treg细胞在CD4^+T细胞中的占比低于正常妊娠组(P<0.05),PE组Th17/Treg值以及IL-21和TGF-β水平均高于正常妊娠组(均P<0.05)。结论:Th17/Treg平衡失调,可能是引起PE的原因;IL-21、TGF-β可能参与了对Th17/Treg平衡的调节。

基于肠-免疫-皮肤轴探讨洋金花对银屑病小鼠肠道Th17/Treg轴的影响

目的探讨洋金花醉茄内酯类化合物对银屑病小鼠肠道中Th17/Treg细胞功能的影响。方法采用经典的银屑病小鼠模型,即咪喹莫特乳膏(IMQ)诱导小鼠背部皮肤产生银屑病样病理模型,并随机分为四组,即空白组、模型组、洋金花组和雷公藤阳性药物组。采用Psoriasis area and severity index(PASI)分析各组皮损严重程度;应用流式细胞法检测小鼠肠系膜淋巴结中Th17/Treg细胞数量表达;应用酶联免疫吸附法(ELISA法)依次检测肠粘膜中Th17/Treg细胞相关因子的含量。结果洋金花组能减少IMQ诱导的PASI评分,降低肠系膜中Th17细胞表达及相关细胞因子,而升高Treg细胞的表达及相关细胞因子。结论洋金花醉茄内酯类化合物可降低银屑病小鼠肠道Th17细胞功能,同时升高Treg细胞功能,进一步提示在肠-免疫-皮肤轴中,洋金花醉茄内酯类化合物通过影响肠道中的Th17/Treg细胞免疫平衡而达到防治银屑病的作用。

汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1及诱导Treg细胞的影响

目的观察汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1的影响,明确汉黄芩素是否可抑制幼稚T细胞向Treg细胞的转化。方法分别在缺氧及常氧条件下培养胃癌细胞株AGS、BGC823,并在其培养体系中加入汉黄芩素。以ELISA法检测胃癌细胞培养上清中TGF-β1的浓度。以胃癌细胞培养上清制备条件培养基,分别培养磁珠分选的CD4+CD25-T细胞72 h,流式检测Foxp3+Treg细胞的比例。结果常氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞分泌TGF-β1无明显抑制作用,而对BGC823细胞分泌TGF-β1有抑制作用;缺氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞和BGC823分泌TGF-β1均有抑制作用。以常氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组与溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例无明显差异;以缺氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组较溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例明显降低。结论汉黄芩素可抑制缺氧导致的胃癌细胞TGF-β1高表达,并可抑制其诱导Treg细胞的能力。

复方参鹿颗粒调节相对低危骨髓增生异常综合征患者TGF-β1介导的Treg/Th17细胞变化的临床研究

目的探讨复方参鹿颗粒对相对低危MDS患者治疗前后外周血TGF-β1、IL-2、IL-6、Treg细胞、Th17细胞、相关转录因子及比值的影响。方法将40例相对低危MDS患者随机分成中药组和对照组,中药组予复方参鹿颗粒联合西药治疗,对照组单用西药治疗。2组均6个月为1个疗程,共治疗1个疗程,观察外周血TGF-β1、IL-2、IL-6、Treg细胞、Th17细胞、相关转录因子及比值变化。结果治疗后中药组TGF-β1、IL-2表达上升,IL-6表达下降;TGF-β1、IL-2/IL-6比率均高于对照组,IL-6表达低于对照组,均有明显差异(P<0.05)。Treg细胞表达、Treg/Th17比值均高于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。治疗后中药组Foxp3mRNA表达、Foxp3/RoRγt比值检测均高于对照组,有明显差异(P<0.05)。结论复方参鹿颗粒可以改善相对低危MDS患者TGF-β1、IL-6、IL-2/IL-6比率、Treg细胞、Treg/Th17比率。提示复方参鹿颗粒改善相对低危MDS患者的造血功能可能通过调整TGF-β1、IL-2/IL-6来调控Treg/Th17比率,进一步改善T细胞免疫功能有关。

TGF-β1和Treg细胞在肝细胞癌患者外周血中表达及意义

目的:探讨原发性肝癌患者外周血中转化生长因子TGF-β1及Treg细胞表达水平的变化及意义。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测原发性肝癌患者和对照组血清TGF-β1水平;采用流式细胞仪进行外周血Treg数量进行检测。结果:60例原发性肝癌患者血清TGF-β1水平为(68.86±13.27)ng/L,40例正常人血清TGF-β1水平为(21.31±7.65)ng/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);原发性肝癌组Treg细胞数量明显高于对照组([27.66±5.48)%vs(17.31±2.84)%,P>0.01]。结论:原发性肝癌患者血清TGF-β1和Treg的水平明显增高,可能是造成肝癌患者免疫力低下的重要因素之一。

Th17/Treg、TGF-β1、IL-17与急性脑卒中的病情严重程度以及预后的相关性研究

目的:探讨辅助性T细胞(Th17)/调节性T细胞(Treg)、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素17(IL-17)与急性脑卒中的病情严重程度以及预后的相关性。方法:选取2019年1月至2022年1月来川北医学院附属医院治疗的急性脑卒中患者147例作为观察组,选择同期100例门诊体检健康者作为对照组。根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将观察组患者分为轻度组、中度组、重度组,出院后3个月根据改良Rakin量表评分(mRS)分为预后良好组和预后不良组。检测并比较各组研究对象外周血Th17/Treg、TGF-β1和IL-17水平。结果:观察组和对照组的Th17/Treg、TGF-β1和IL-17比较,差异存在统计学意义(P<0.05),与对照组相比,观察组的Th17/Treg升高,TGF-β1和IL-17水平显著降低。轻度组、中度组、重度组血清Th17/Treg、TGF-β1和IL-17比较差异存在统计学意义(P<0.05),其中血清Th17/Treg水平逐渐升高,TGF-β1、IL-17则逐渐降低;预后良好组与预后不良组的血清Th17/Treg、TGF-β1和IL-17比较差异也存在统计学意义(P<0.05),预后不良组血清Th17/Treg明显高于预后良好组,TGF-β1和IL-17明显低于预后良好组。Pearson相关性分析显示,血清Th17/Treg与INHSS、mRS评分呈明显正相关,TGF-β1和IL-17与NIHSS、mRS评分呈明显负相关(P<0.05)。结论:Th17/Treg、TGF-β1和IL-17与急性脑卒中患者病情严重程度和临床预后相关,可能是通过介导相应的炎症反应来发挥作用,可以为急性脑卒中患者病情严重程度和预后情况的临床评价提供重要参考。

扶肺煎对Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响

目的研究扶肺煎对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs、Foxp3、IL-10、TGF-β的影响。方法选取雄性C57BL/6小鼠建立Lewis肺癌移植瘤模型,随机分为6组:模型组,扶肺煎低、中、高剂量组,顺铂组和扶肺煎中剂量联合顺铂组,每组8只。观察小鼠的一般情况及移植瘤大小。给药第15天后剥离肿瘤组织,计算各组抑瘤率;FCM检测肿瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量;免疫组化法检测Foxp3表达量;ELISA检测外周血细胞因子IL-10、TGF-β的表达水平。结果与模型组比较,各组平均瘤重均减小,顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组缩小明显(P<0.01),扶肺煎中剂量联合顺铂组抑瘤率最高(64.23%);扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3^(+)Tregs数量减少(P<0.05),其余各实验组Foxp3^(+)Tregs数量减少均无统计学意义;扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组移植瘤中Foxp3表达量下降(P<0.01)。扶肺煎中剂量组、扶肺煎高剂量组、顺铂组、扶肺煎中剂量联合顺铂组外周血中细胞因子IL-10、TGF-β水平下降(P<0.01),IL-10下降幅度大。与顺铂组相比,扶肺煎中剂量联合顺铂组IL-10水平下降(P<0.01)。结论扶肺煎能有效抑制肺癌移植瘤的生长,对调控移植瘤微环境中Foxp3^(+)Tregs数量影响不明显,对干预肿瘤微环境中Foxp3、TGF-β具有一定影响,对IL-10的影响十分显著。

外周血Th9、Th22和Treg细胞及细胞因子在过敏性鼻炎中的研究

目的检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血辅助T细胞9(Th9)、辅助T细胞22(Th22)、调节性T细胞(Treg)的比例及血清中白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-22(IL-22)、转化生长因子β(TGF-β)和总IgE的表达水平,讨论其与过敏性鼻炎的关系以及临床意义。方法选择48例过敏性鼻炎患者为患者组,40例健康成人作为对照组,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th9、Th22和Treg细胞的比例;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中细胞因子IL-9、IL-22和TGF-β的含量;用速率散射比浊法检测血清中总IgE的水平。测得数据用SPSS 24.0统计软件进行分析,用Pearson相关分析进行相关性检验。结果同对照组相比,AR患者组Th9细胞的百分比显著升高(P<0.0001),Treg细胞的百分比显著降低(P<0.0001),Th22细胞的百分比与健康对照组相比无显著差异(P=0.63)。与对照组相比,AR患者组血清IL-9、IL-22和总IgE表达水平显著升高(P<0.0001),而TGF-β则呈现明显下降(P<0.0001)。AR患者血清IL-9与总IgE水平呈正相关(r=0.487,P<0.05),TGF-β与总IgE水平呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论外周血Th9、Treg细胞及细胞因子的分泌异常、比例失调在过敏性鼻炎的发病过程中起着重要作用,可作为病情诊断的重要参考指标,也可为临床病因的分析研究提供理论依据,而Th22细胞目前不明确,可能没有参与AR的发病机制。

三叶青调节Th17/Treg平衡抗类风湿性关节炎的作用及机制研究

目的:探讨三叶青治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:采用大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎模型大鼠,灌胃给予不同剂量三叶青提取物连续3周。检测大鼠关节肿胀度、关节炎指数、关节热度、抓力;ELISA检测血浆中白介素(IL)-6、IL-17、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及类风湿因子(RF)水平;全自动血液流变仪检测血液流变学指标;流式细胞术测定全血中辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)比例;HE染色观察踝关节组织形态学;Western blot法检测关节滑膜组织中IL-6、RORγt、Foxp3、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果:三叶青能有效降低类风湿性关节炎模型大鼠关节肿胀度、关节炎指数及关节热度,升高抓力;降低Th17/Treg比例及血浆IL-6、IL-17、TNF-α、RF水平,升高IL-10水平;下调关节滑膜组织中IL-6、STAT3、p-STAT3、RORγt蛋白表达,上调Foxp3蛋白表达,改善踝关节组织形态学改变。结论:三叶青具有明显的抗类风湿性关节炎作用,其机制可能与调控IL-6/STAT3/IL-17轴调节Th17/Treg平衡有关。

基于糖皮质激素受体介导TGF-β_(1)/Smad3信号轴探讨小青龙汤加减合二陈汤治疗咳嗽变异性哮喘的药效及机制

目的:观察小青龙汤加减合二陈汤治疗咳嗽变异性哮喘(CVA)的药效,并基于糖皮质激素受体(GR)介导TGF-β_(1)/Smad3信号轴探讨其作用机制。方法:60只SD雄性大鼠通过随机数字表法分为对照组、模型组、布地奈德组、小青龙汤加减合二陈汤低剂量组、小青龙汤加减合二陈汤高剂量组,每组12只。适应性饲养结束后,除对照组外,其余大鼠均采用氢氧化铝和卵清白蛋白(OA)激发联合OA雾化刺激制备大鼠CVA模型,筛选建模成功的大鼠进行药物灌胃治疗,连续给药2周。末次给药1 d后处死大鼠,采用ELISA法检测血清Th1/Th2类细胞因子及支气管肺泡灌流液中LTE-4、NGF水平;HE染色观察支气管-肺组织病理学改变;通过Western blotting法检测支气管-肺组织中TGF-β_(1)、Smad3、GR蛋白表达。结果:CVA大鼠支气管-肺组织出现病理性改变,主要包括支气管管腔变窄、炎性细胞浸润等;血清IL-4、ECP水平均升高,IFN-γ水平降低;支气管肺泡灌流液中LTE-4、NGF水平均升高;支气管-肺组织中TGF-β_(1)、Smad3蛋白表达水平升高,GR蛋白表达水平降低。采用小青龙汤加减合二陈汤治疗后,CVA大鼠支气管-肺组织病理性改变程度明显减轻;与模型组比较,血清IL-4、ECP水平均明显降低,IFN-γ水平明显升高;支气管肺泡灌流液中LTE-4、NGF水平均明显降低;支气管-肺组织中TGF-β_(1)、Smad3蛋白表达水平明显降低,GR蛋白表达水平明显升高。结论:小青龙汤加减合二陈汤可以有效减轻CVA大鼠支气管-肺组织损伤,并抑制机体的炎症反应,其作用机制可能与GR介导TGF-β_(1)/Smad3信号轴有关。

盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响

目的:分析盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响。方法:选取由温州康宁医院实验动物中心提供SPF级Wistar雄性大鼠30只,随机数字表法分成5组:正常组,模型组,氨溴索低、中、高剂量组,每组各10只。采用5 mg/kg博来霉素0. 2 m L气管内灌注成功制备肺纤维化模型,术后第2天起氨溴索低、中、高剂量组大鼠腹腔内注射剂量为10、20、40 mg/kg盐酸氨溴索,正常组和模型组大鼠腹腔注射剂量为3. 33 m L/kg生理盐水,连续注射14 d。HE染色和Masson染色观察各组大鼠组织病理变化,ELISA法检测大鼠成纤维细胞内转化生长因子β1(TGF-β1)含量,实时荧光定量PCR检测TGF-β1蛋白表达状况,Western blot检测成纤维细胞内ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达状况,流式细胞术法检测各组大鼠肺组织内Treg、Th17细胞表达状况。结果:与正常组相比,模型组大鼠成纤维细胞内TGF-β1含量、TGF-β1基因表达量、ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4蛋白表达、肺组织内Th17、Th17/Treg均升高(均P<0. 05);与模型组相比,氨溴索中、高剂量组大鼠均降低(均P <0. 05)。而模型组大鼠成纤维细胞Smad7蛋白表达、肺组织内Treg表达比率较正常组均降低(均P <0. 05),氨溴索中、高剂量组大鼠较模型组升高(均P <0. 05)。结论:盐酸氨溴索可维持肺纤维化大鼠肺组织Th17/Treg平衡,抑制大鼠TGF-β/Smad/ERK信号转导通路内主要细胞因子信号传递,进而起到抗肺纤维化的作用。

清肺通络敷胸方干预RSV诱发幼龄大鼠肺损伤肺泡灌洗液中Treg/Th17及相关细胞因子的影响

目的探讨清肺通络敷胸方对感染RSV幼龄大鼠肺损伤肺泡灌洗液中Treg/Th17及相关细胞因子的影响。方法将18只SD幼龄大鼠随机分为正常组、模型组(RSV组)、清肺通络敷胸方组,每组6只。正常组给予0.9氯化钠溶液滴鼻,其余2组采用RSV滴鼻法建立RSV感染大鼠肺损伤模型。在感染病毒的第7天进行取材。HE染色观察大鼠肺部组织的病理变化,ELISA检测大鼠肺泡灌洗液中IL-17和TGF-β含量,流式细胞术检测肺泡灌洗液中Treg/Th17细胞比率。结果RSV感染大鼠肺组织的肺泡灌洗液中,与正常组比较,模型组(RSV组)大鼠BALF中IL-17含量明显升高、TGF-β含量明显下降,BALF中Th17细胞的比率明显升高,Treg细胞比率明显下降;与模型组(RSV组)比较,清肺通络敷胸方组BALF中IL-17含量明显下降、TGF-β含量明显升高;BALF中Th17细胞的比率明显下降,Treg细胞比率明显上升。结论清肺通络敷胸方对RSV感染幼龄大鼠肺组织的BALF中Th17细胞的表达水平下降,同时使Treg细胞的表达水平上升,改善Treg/Th17的失衡,进而抑制炎症反应。

基于Notch信号通路探讨柚皮素调节Th17/Treg平衡治疗哮喘的机制研究

目的:基于Notch信号轴探究柚皮素对支气管哮喘(BA)小鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响,并初步探究其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠建立BA模型,随机分为模型组、柚皮素组(75 mg/kg)、γ-分泌酶抑制剂(DAPT,Notch1配体抑制剂)组(5µmol/L)、Notch配体-Jagged1过表达(ad-Jagged1)组(20µl/只)、ad-Jagged1阴性对照(ad-NC)组,每组15只,另取15只正常小鼠作为对照组。检测小鼠肺功能、支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞数、IL-17、IL-22、IL-10、TGF-β水平及外周血Th17/Treg;HE染色观察肺组织变化;免疫组化检测Th17转录因子-RoRγt、Treg转录因子-Foxp3阳性表达;Western blot检测Jagged1、Notch1、RoRγt、Foxp3、TGF-β、毛状蛋白(Hes1)、核转录抑制因子(RBPJ)、IL-17蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组小鼠肺功能减弱,肺组织炎症损伤加重,BALF中炎症细胞增加,Th17/Treg升高,Th17介导的促炎途径Notch1/RBPJ/IL-17/RoRγt相关蛋白表达升高,而Treg介导的抗炎途径Jagged1/TGF-β/Hes1/Foxp3相关蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组相比,柚皮素、DAPT、ad-Jagged1均可缓解BA小鼠肺功能减弱及炎症浸润,柚皮素不仅可抑制Th17介导的促炎途径Notch1/RBPJ/IL-17/RoRγt,还可上调Treg介导的抗炎途径Jagged1/TGF-β/Hes1/Foxp3活化,调节Th17/Treg平衡(P<0.05);DAPT仅能通过抑制Th17介导的促炎途径Notch1/RBPJ/IL-17/RoRγt调节Th17/Treg平衡(P<0.05);ad-Jagged1仅能通过上调Treg介导的抗炎途径Jagged1/TGF-β/Hes1/Foxp3活化调节Th17/Treg平衡(P<0.05)。结论:柚皮素可通过调控Notch信号相关配体,即抑制Notch1、上调Jagged1,维持Th17/Treg介导的促炎及抗炎反应平衡,缓解BA病理损伤。