基于正邪理论探讨Th17/Treg细胞在慢性心衰中的作用

慢性心力衰竭是多种心血管疾病的终末期阶段,心肌损伤后,免疫介导的Th17、Treg细胞在心衰的发病机制具有关键作用,通过分泌炎症因子,导致心肌纤维化、心室重塑。中医正邪理论内涵丰富,对于认识Th17/Treg细胞与心衰的发展及相互作用具有指导意义,隶属于正邪理论范畴,即Th17/Treg细胞平衡,有利于维持机体的免疫平衡,属于“正气”范畴;Th17/Treg细胞失衡可能破坏机体内环境的稳定,导致免疫异常,促进疾病的发生,属于“邪气”范畴。基于此,作者以正邪理论为切入点,从宏观、微观角度来阐述Th17/Treg细胞在慢性心力衰竭发展中的作用,提出心衰早期,正虚为主,邪实为辅;心衰中期,正虚邪实;心衰晚期,邪实为主,正虚为辅;心衰终末期,正虚为主。临床通过扶正祛邪,调整机体正邪平衡,恢复机体Th17/Treg细胞的动态平衡,以期为中医理论阐述Th17/Treg在心衰的发展作用的现代研究奠定基础,为心衰的诊治提供新的理论依据。

中医药调控白癜风Th17/Treg细胞失衡的研究进展

白癜风是一种临床常见的慢性炎症性色素脱失性皮肤疾病,在世界范围内的患病率约为0.5%~2%^([1])。目前对于本病的发病机制尚不清楚,有多种学术假说被提出来进行解释,如氧化应激理论、神经体液假说等,但是自身免疫学说是最被认可的一种,同时动物模型和人体研究也都强调了免疫系统在白癜风中的重要作用^([2-4])。皮肤作为人体最大的器官,是机体抵御外来感染的第一道防线。

芍药苷对慢性支气管炎模型大鼠Th17及Treg细胞亚群的影响

目的:探究芍药苷对慢性支气管炎(CB)大鼠Th17、Treg细胞亚群、肺功能的影响以及药理作用。方法:将SD大鼠采用复合诱导法建立CB模型,随机分成CB组(生理盐水)、低剂量芍药苷组(50 mg/kg)、中剂量芍药苷组(100 mg/kg)、高剂量芍药苷组(200 mg/kg)和核酪组(阳性对照,核酪口服液),10只;另设对照组(生理盐水)10只,造模后按照分组灌胃2 ml/100 g相应药物。给药完成后,观察大鼠一般情况并进行肺功能及血气分析;HE染色观察肺组织形态;流式细胞仪检测大鼠肺组织CD4^(+)T、CD8^(+)T、Th17(CD4^(+)IL-17^(+)T)、Treg(CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+)T)细胞;ELISA法检测肺组织中IL-10、IL-22、IL-17水平。结果:CB组大鼠活动迟缓,毛色暗淡,身体卷缩,伴咳嗽、鼻腔潮湿,肺组织可见淋巴细胞浸润、支气管壁变形、黏膜阻塞等病变;芍药苷各组及核酪组上述症状及损伤不同程度缓解,高剂量组最轻。与对照组比较,CB组气道阻力、动脉血二氧化碳分压(Pa‐CO_(2))、IL-17、IL-22水平及CD4^(+)T、CD8^(+)T、Th17细胞、Th17/Treg、CD4^(+)T/CD8^(+)T均升高,动脉血氧分压(PaO_(2))、IL-10水平及Treg细胞均降低(P均<0.05);与CB组比较,低、中、高剂量芍药苷组气道阻力、PaCO_(2)、IL-17、IL-22水平及CD4^(+)T、CD8^(+)T、Th17细胞、Th17/Treg、CD4^(+)T/CD8^(+)T水平依次降低,PaO_(2)、IL-10水平及Treg细胞依次升高(P均<0.05);中剂量芍药苷组气道阻力等以上指标与核酪组相比差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:芍药苷可调节T淋巴细胞活化,减少Th17细胞分化,增加Treg细胞分化,减轻CB大鼠炎症水平及肺损伤。

外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化的关系

目的探讨外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、人巨细胞病毒(hCMV)-IgM与动脉粥样硬化型急性脑梗死(As-ACI)患者颈动脉粥样硬化的关系。方法选取89例As-ACI患者(脑梗死组),另选取健康体检者43例(对照组)。根据颈内动脉超声结果将As-ACI患者分为内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组。比较各组外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平、单个核细胞TLR4表达水平、hCMV-IgM抗体阳性率和内膜中膜厚度(IMT)。分析As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素,分析CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4与IMT的相关性及其对颈动脉狭窄的预测价值。结果脑梗死组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、HDLC水平低于对照组,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、TC、TG、LDLC、hs-CRP水平、IMT高于对照组(P<0.05)。内膜正常组、内膜增厚组、斑块组、狭窄组CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平依次降低,TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性率、IMT依次增高(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞水平与IMT呈负相关,TLR4表达与IMT呈正相关(P<0.05)。高血压、CD4^(+)CD25^(+)Treg表达、TLR4表达、hCMV-IgM抗体阳性是As-ACI患者颈动脉狭窄的危险因素(P<0.05)。CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4表达水平联合检测的预测价值高于单独检测(P<0.05)。结论外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4、hCMV-IgM抗体阳性率与As-ACI患者颈动脉粥样硬化进展有关,外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞、TLR4联合可以较好预测病变过程。

Th17和Treg细胞在自身免疫性肝炎发生发展中的作用研究进展

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种由免疫介导的慢性肝脏疾病,酒精、药物、毒素等为其诱导因素,至今其发病机制尚未完全阐明,在治疗上尚以缓解症状、延缓疾病进展为主。由于其免疫特性,T细胞作为免疫应答反应的主要细胞之一引起了人们的关注。近些年来国内外学者通过对AIH免疫机制的深入研究发现Th17与Treg细胞在AIH中的发生发展中起着关键作用。本文从自身免疫反应出发,阐明Th17和Treg细胞除了其自身单独作用之外,在数量和功能方面还会互相影响,并且IL-17、IL-6、RORγt、FoxP3等相关细胞因子也可以通过影响Th17细胞和/或Treg细胞水平进而影响AIH的发生发展。

MDRO肺炎感染患者SAA、PCT、Treg细胞及有关因子表达水平

目的探讨血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、Treg细胞及有关因子在多重耐药菌(multidrug-resisitant organism,MDRO)肺炎感染患者中的表达水平及其与疗效的关联性。方法选取97例MDRO肺炎感染患者为研究对象,根据治疗14 d后的治疗效果分为有效组(73例)和无效组(24例),根据入院时肺炎严重指数(PSI)分为低危(34例)、中危(49例)、高危(14例)三个亚组。比较2组治疗前、治疗7 d后、治疗14 d后SAA、PCT、Treg细胞、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,比较治疗前低危、中危、高危患者血清各指标水平及PSI评分,分析血清各指标水平与PSI评分的相关性。结果与无效组比较,治疗7、14 d后有效组SAA、PCT、hs-CRP、TNF-α水平较低,Treg细胞数较高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,低危患者SAA、PCT、hs-CRP、TNF-α及PSI评分<中危患者<高危患者,Treg细胞数>中危患者>高危患者,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,SAA、PCT、hs-CRP、TNF-α水平与PSI评分呈正相关,Treg细胞数与PSI评分呈负相关(P<0.05);受试者操作特征(ROC)曲线显示治疗前SAA、PCT、Treg细胞、hs-CRP、TNF-α联合预测治疗无效的AUC大于各指标单独预测。结论MDRO肺炎感染患者SAA、PCT、hs-CRP、TNF-α、Treg细胞数量呈异常表达,且表达水平对预后具有重要影响,临床可监测其水平变化,联合预测预后的价值较高。

Treg细胞抑制慢性中耳炎模型小鼠中耳炎症的进展

目的探究慢性中耳炎(chronic otitis media,COM)小鼠中Treg细胞与炎症发展之间的关系。方法采用不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)腹腔注射和中耳咽鼓管(ET)阻断的方式诱导构建慢性中耳炎小鼠模型(模型组),选择健康BALB/c小鼠作为对照组。分别在建模后第3,14,28,56天分离收集小鼠中耳积液和中耳黏膜组织,通过苏木精-伊红(HE)染色检测MEM病理变化,采用免疫组织化学染色评估CD4^(+)和Foxp3^(+)T细胞水平,ELISA和Western blot分别检测小鼠中耳积液和中耳黏膜组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10和转化生长因子(TGF-β)水平,流式细胞术分析CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例。另取COM模型小鼠分为PBS组和抗-CD25组。抗-CD25组小鼠腹腔注射抗CD25 mAb模拟体内Treg耗竭,PBS组小鼠腹腔注射等量PBS溶液,第56天收集小鼠中耳积液、中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织,检测分析脾脏、颈部淋巴结和中耳黏膜组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例,中耳黏膜组织中炎性因子水平,以及中耳积液中细菌水平。结果HE结果显示,对照组小鼠中耳黏膜组织正常,模型组小鼠中耳黏膜组织出现炎性细胞浸润,细菌数量、炎性细胞数量和黏膜厚度均增加(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠中耳黏膜组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例升高(P<0.05),中耳积液和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均升高(P<0.01)。与PBS组比较,抗-CD25组小鼠中耳黏膜组织、脾脏和颈部淋巴结组织中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)细胞比例均降低(P<0.05),中耳积液中细菌数和中耳黏膜组织中炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的水平均降低(P<0.01)。结论Treg细胞在慢性中耳炎的炎症平衡维持中具有重要作用,抑制炎症的进展,但过度的Treg细胞抑制了宿主对细菌的清除作用。

miR-223在炎症性肠病患者肠黏膜组织中的表达及与Th17/Treg细胞平衡的关系

目的 探究微小RNA-223(miR-223)在炎症性肠病(IBD)患者肠黏膜组织中的表达及与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)的关系。方法 选择2021年1月—2023年11月本院收治的96例IBD患者作为研究对象,根据病情划分为活动期组(54例)和缓解期组(42例)两组;另选择同期51例结肠息肉者为对照组。比较三组miR-223、Th17细胞、Treg细胞水平及Th17/Treg细胞因子[白介素-17(IL-17)、IL-23、转化生长因子-β1(TGF-β1)、IL-10]水平;Pearson相关分析miR-223与Th17/Treg细胞及细胞因子的相关性。结果 miR-223水平活动期组(3.26±0.61)>缓解期组(2.41±0.52)>对照组(1.02±0.18)(P<0.05)。Th17细胞、Th17/Treg水平活动期组>缓解期组>对照组,Treg细胞水平活动期组<缓解期组<对照组,均P<0.05。IL-17、IL-23水平活动期组>缓解期组>对照组,TGF-β1、IL-10水平活动期组<缓解期组<对照组,均P<0.05。Pearson相关分析显示,miR-223与Th17、Th17/Treg、IL-17、IL-23呈正相关(r=0.711、0.742、0.760、0.751,均P<0.05);miR-223与Treg、TGF-β1、IL-10呈负相关(r=-0.685、-0.308、-0.850,均P<0.05)。结论 IBD患者肠黏膜组织中miR-223表达呈相对高水平,反映病情活动性,且与Th17/Treg细胞平衡有关。

李斌课题组及合作团队揭示打破肿瘤浸润Treg细胞中负反馈环路扰动平衡的新机制

2024年1月2日,上海交通大学医学院上海市免疫学研究所李斌课题组及合作团队在国际期刊Nature Communications在线发表了题为FOXP3+regulatory T cell perturbation mediated by the IFNγ-STAT1-IFITM3 feedback loop is essential for anti-tumor immunity的研究论文。该研究发现了肿瘤组织浸润Treg细胞中存在IFNγ依赖性的STAT1-IFITM3负反馈环路扰动,此环路通过平衡STAT1与IFITM3的动态表达,维持肿瘤浸润Treg细胞的功能稳定性。扰动此负反馈环路导致其失去平衡状态.

上海交通大学基础医学院、上海市免疫学研究所邹强团队等揭示乳酸介导CTLA-4的RNA剪接以维持Treg细胞免疫抑制功能的机制

2024年2月27日,上海交通大学基础医学院、上海市免疫学研究所邹强研究团队等在Immunity杂志在线发表了题为Lactate modulates RNA splicing to promote CTLA-4 expression in tumor-infiltrating regulatory T cells的研究论文。该研究发现代谢产物乳酸通过促进肿瘤浸润Treg细胞中CTLA-4的RNA剪接及其表达从而维持Treg细胞免疫抑制功能的作用机制,阐述了乳酸-Foxp3-USP39-CTLA-4信号轴介导肿瘤浸润Treg细胞高表达CTLA-4的分子机制,为肿瘤免疫治疗提供了新方向。

汉黄芩素促进自身免疫性肝炎模型大鼠Th17/Treg细胞平衡

目的探讨汉黄芩素(WG)对自身免疫性肝炎(AIH)大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法随机选出10只大鼠作为对照组,其余大鼠通过尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(ConA,12.5 mg/kg)溶液构建AIH模型大鼠。将造模成功大鼠随机平分为AIH组、L-WG组(10 mg/kg)、M-WG组(20 mg/kg)、H-WG组(30 mg/kg)、H-WG+VPA组[30 mg/kg WG+300 mg/kg Notch信号通路激活剂丙戊酸(VPA)],每组10只,每天给药1次,持续10 d。ELISA检测血清中炎性因子及肝功能指标;HE染色观察肝脏组织病理形态;流式细胞测量术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western blot检测脾脏类视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)以及肝组织Notch信号通路蛋白质的表达。结果对照组大鼠肝组织结构正常,染色清晰;AIH组大鼠肝组织细胞出现水肿,细胞体积增大导致肝窦受压变窄,出现大量炎性细胞浸润以及少量坏死现象。AIH组较对照组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白介素(IL)-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、hes家族bHLH转录因子1(HES1)、含YRPW基序的bHLH转录因子hes相关家族1(HEY1)蛋白表达均显著上升(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著下降(P<0.05);与AIH组相比,L-WG组、M-WG组、H-WG组肝损伤情况得到改善,ALT、AST活性、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、HES1、HEY1蛋白表达均显著降低(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著升高(P<0.05);VPA逆转了H-WG对AIH大鼠的改善效果。结论WG可能通过下调Notch信号通路促进AIH大鼠Th17/Treg细胞平衡。

GATA3+Treg细胞在变应性鼻炎中的表达及意义

目的 研究GATA3+Treg细胞在变应性鼻炎(AR)患者和小鼠中的表达和意义。方法 收集6例对照组患者(Control组)和6例变应性鼻炎患者(AR组)的鼻黏膜,检测其鼻黏膜炎症反应。同期收集12例Control组和12例AR组患者外周血单个核细胞(PBMC),检测其Treg细胞和GATA3+Treg细胞比例。将C57BL/6小鼠分为正常对照组(Control组)和变应性鼻炎组(AR组)。比较两组小鼠AR症状学评分、外周血OVA-sIgE水平、鼻黏膜炎症反应。收集小鼠脾脏,检测两组小鼠体内Treg细胞和GATA3+Treg细胞比例以及Th2细胞因子表达。结果 与Control组相比,AR组患者鼻黏膜中嗜酸性粒细胞浸润和杯状细胞增生明显增多(P<0.01),PBMC中Treg细胞和GATA3+Treg细胞表达下降(P<0.05)。动物实验发现:与Control组相比,AR组小鼠过敏症状评分、外周血OVA-sIgE水平、鼻黏膜嗜酸性粒细胞浸润和杯状细胞增生均明显增加(P<0.01)。与Control组相比,AR小鼠Treg细胞和GATA3+Treg细胞表达下调(P<0.01),并且Th2细胞因子IL-4、IL-6、IL-10表达上升(P<0.05)。结论GATA3+Treg细胞在AR患者和小鼠中表达下降,并可能与Th2细胞免疫应答相关,两者共同参与了AR的发生发展。GATA3+Treg细胞有望成为AR免疫调控的新靶点。

Treg细胞亚型在首诊癌症患者外周血中的表达及意义

目的探讨癌症患者外周血中调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)亚型即1型辅助性T细胞(type 1 helper T cell,Th1)样Treg细胞(T-bet^(+)Treg)、Th2样Treg细胞(GATA3^(+)Treg)、Th9样Treg细胞(Pu-1^(+)Treg)、Th17样Treg细胞(RORγ^(+)Treg)及滤泡型辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)样Treg细胞(CXCR5^(+)Treg)的表达情况及其对应的CD4^(+)T细胞子集:Th1、2型辅助性T细胞(type 2 helper T cell,Th2)、9型辅助性T细胞(type 9 helper T cell,Th9)、17型辅助性T细胞(type 17 helper T cell,Th17)、Tfh的表达。方法将23例癌症患者设为研究组,23例门诊健康体检者设为正常对照组,采用流式细胞术检测患者外周血中T-bet^(+)Treg、GATA3^(+)Treg、Pu-1^(+)Treg、RORγ^(+)Treg、CXCR5^(+)Treg数量以及CD4^(+)T细胞子集Th1、Th2、Th9、Th17、Tfh的数量变化情况,并将二者进行对比分析。结果与对照组比较,研究组患者外周血中Treg细胞的数量显著升高,其亚型T-bet^(+)Treg、GATA3^(+)Treg、RORγ^(+)Treg的数量明显增加(P<0.05),而Pu-1^(+)Treg、CXCR5^(+)Treg数量差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,研究组外周血体内的Th1细胞减少,Th2、Th9、Th17、Tfh数量增多(P<0.05)。结论患者的抗肿瘤免疫功能可能被数量增加的Treg细胞所抑制,主要增加的Treg细胞亚型为T-bet^(+)Treg、GATA3^(+)Treg、RORγ^(+)Treg,其中T-bet^(+)Treg细胞增加最为明显。

外周血Th9、Th22和Treg细胞及细胞因子在过敏性鼻炎中的研究

目的检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血辅助T细胞9(Th9)、辅助T细胞22(Th22)、调节性T细胞(Treg)的比例及血清中白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-22(IL-22)、转化生长因子β(TGF-β)和总IgE的表达水平,讨论其与过敏性鼻炎的关系以及临床意义。方法选择48例过敏性鼻炎患者为患者组,40例健康成人作为对照组,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Th9、Th22和Treg细胞的比例;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中细胞因子IL-9、IL-22和TGF-β的含量;用速率散射比浊法检测血清中总IgE的水平。测得数据用SPSS 24.0统计软件进行分析,用Pearson相关分析进行相关性检验。结果同对照组相比,AR患者组Th9细胞的百分比显著升高(P<0.0001),Treg细胞的百分比显著降低(P<0.0001),Th22细胞的百分比与健康对照组相比无显著差异(P=0.63)。与对照组相比,AR患者组血清IL-9、IL-22和总IgE表达水平显著升高(P<0.0001),而TGF-β则呈现明显下降(P<0.0001)。AR患者血清IL-9与总IgE水平呈正相关(r=0.487,P<0.05),TGF-β与总IgE水平呈负相关(r=-0.679,P<0.05)。结论外周血Th9、Treg细胞及细胞因子的分泌异常、比例失调在过敏性鼻炎的发病过程中起着重要作用,可作为病情诊断的重要参考指标,也可为临床病因的分析研究提供理论依据,而Th22细胞目前不明确,可能没有参与AR的发病机制。

十全育真汤对早期活动性强直性脊柱炎患者外周血Th17/Treg细胞平衡的影响

目的:观察十全育真汤对早期活动性强直性脊柱炎患者疾病活动指标、Th17/Treg相关细胞因子、Th17/Treg细胞百分比,及相关基因RORC、FoxP3 mRNA表达的影响,初步从分子水平探讨十全育真汤治疗强直性脊柱炎的机制。方法:将60例强直性脊柱炎患者采用随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组给予十全育真汤治疗,对照组给予柳氮磺吡啶肠溶片治疗。对2组患者治疗前后疾病活动指标、Th17/Treg相关细胞因子水平、Th17及Treg亚群占CD4^(+)T细胞百分比、RORC和FoxP3m RNA基因表达进行统计分析。结果:治疗后,2组视觉模拟评分法(VAS)评分、Bath强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)、Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI)、Bath强直性脊柱炎总体指数(BAS-G)、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-17均明显降低,转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);除BASDAI外,治疗组上述指标均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。治疗后,2组Th17亚群CD4^(+)CD45RO^(+)CCR6^(+)细胞百分比均明显降低,治疗组Treg亚群CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01);且治疗组均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。治疗后,2组RORC m RNA表达显著下降,FoxP3 mRNA表达显著升高(P<0.05或P<0.01);且治疗组优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:十全育真汤可显著控制早期活动性强直性脊柱炎炎症,减轻临床症状,其机制可能与抑制促炎因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IL-17)表达,促进抑炎因子(TGF-β、IL-10)释放,通过抑制RORC基因表达,促进FoxP3基因表达,调整Th17/Treg细胞数量,纠正Th17/Treg免疫失衡有关。

Th17、Treg细胞检测在小儿EB病毒感染中的临床意义

目的研究Th17、Treg细胞检测在小儿EB病毒(EBV)感染中的临床意义。方法回顾性选取2021年1月至2023年1月泸州市人民医院收治的60例EBV感染患儿作为研究组,同时选取同一时期入院进行体检的60名健康儿童作为对照组。采用流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞内的Th17、Treg细胞,并采用酶联免疫吸附抗体双夹心法测定相关特征性细胞因子[转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素17(IL-17)]水平;同时,采用RT-PCR法测定Th17表达孤核受体(RORγt)mRNA、Treg表达叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达水平。比较两组患者的外周血Treg细胞表达率、Th17细胞表达率、TGF-β、IL-17水平与RORγt mRNA、Foxp3 mRNA相对表达水平。结果研究组患儿外周血Th17细胞表达率为(1.39±0.42)%,明显高于对照组[(0.82±0.19)%],外周血Treg细胞表达率为(3.48±0.84)%,明显低于对照组[(6.07±1.25)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患儿外周血RORγt mRNA相对表达水平为(7.96±3.09)×10^(-5),明显高于对照组[(4.19±2.07)×10^(-5)],外周血Foxp3 mRNA相对表达水平为(3.79±1.25)×10^(-4),明显低于对照组[(15.89±7.51)×10^(-4)],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患儿血清TGF-β水平为(58.58±12.83)ng/L,明显低于对照组[(8.81±3.97)ng/L],IL-17水平为(22.09±10.28)ng/L,明显高于对照组[(80.14±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论EBV感染相关病症发生及发展中Th17、Treg细胞发挥着重要作用,增大Th17、Treg细胞及其相关炎症因子监测力度可为EBV感染患儿的疾病情况及疗效评估提供参考依据。

免疫性血小板减少症患儿外周血Treg细胞GITR表达及临床意义

目的:探讨免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血Treg细胞GITR表达,以及GITR表达与淋巴细胞亚群、炎症因子、ITP病程的相关性。方法:下载GSE23754数据集(来自GEO数据库),GSEA分析ITP患儿外周血GITR mRNA水平与细胞免疫相关信号通路的相关性。收集华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院2020年12月至2021年2月新确诊的ITP患儿(n=34)和同期健康体检儿童(n=46)外周血,qPCR检测外周血单个核细胞(PBMC)GITR mRNA表达;CBA法检测外周血血清中炎症因子水平;流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群和T细胞GITR表达。结果:GSE23754数据集GSEA分析结果显示,ITP患儿GITR mRNA表达与效应T细胞功能信号通路呈负相关(NES=-1.30,P=0.035)。Pearson相关分析结果显示,新确诊ITP患儿PBMC的GITR mRNA表达与外周血CD8+T细胞数及IL-2、TNF-α水平呈负相关(均P<0.05)。流式细胞术结果显示,GITR主要在儿童外周血Treg细胞表面表达,且ITP患儿Treg细胞GITR表达下调,治疗缓解后GITR表达恢复。结论:ITP患儿Treg细胞功能异常可能与GITR低表达有关,检测Treg细胞GITR表达有助于预测疾病进程。

麻黄细辛附子汤干预Notch通路调控Treg细胞纠正Th2偏移的研究

目的探究麻黄细辛附子汤对Th2偏移、Treg细胞功能及Notch信号通路的干预作用。方法体外培养CD4+T细胞,流式细胞仪鉴定纯度,使用白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ抗体(Anti-IFN-γ)诱导建立Th2细胞分化模型,DAPT及麻黄细辛附子汤干预24 h后收集上清及细胞,ELISA检测白细胞介素-5(IL-5)、干扰素-γ(IFN-γ)、转化生长因子β1(TGF-β1)含量,RT-PCR检测T细胞特异性转录因子(T-bet)、转录因子结合蛋白-3(GATA-3)、叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)、Notch1 mRNA表达,Western blotting检测T-bet、GATA-3、FOXP3、Notch1蛋白表达。结果1)较之空白组,模型组IL-5含量升高,IFN-γ、TGF-β1含量降低(P<0.01);较之模型组,各给药组IL-5含量降低,IFN-γ、TGF-β1含量升高(P<0.01)。2)较之空白组,模型组Tbet、FOXP3 mRNA表达降低,GATA-3、Notch1 m RNA表达升高(P<0.01);较之模型组,各给药组T-bet、FOXP3 mRNA表达升高,GATA-3、Notch1 m RNA表达降低(P<0.01)。3)较之空白组,模型组T-bet、FOXP3蛋白表达降低,GATA-3、Notch1蛋白表达升高(P<0.01);较之模型组,各给药组T-bet、FOXP3蛋白表达升高,GATA-3、Notch1蛋白表达降低(P<0.01)。结论1)麻黄细辛附子汤能够下调IL-5分泌和GATA-3表达,促进IFN-γ分泌和T-bet表达,纠正Th2偏移。2)麻黄细辛附子汤有助于Treg细胞分化增殖,能够促进TGF-β1分泌和FOXP3表达。3)麻黄细辛附子汤能够通过抑制Notch1表达,促进Treg细胞功能发挥,纠正Th2偏移。

小儿支原体肺炎血Th17/Treg细胞失衡与心肌损害发生的相关性

目的探讨小儿支原体肺炎血Th17/调节性T细胞(Treg)失衡与心肌损害发生的相关性。方法选择2020年3月—2022年3月于邢台市人民医院就诊的支原体肺炎患儿137例作为观察对象,通过肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,影像学检查及心电图表现等判定心肌损害,并根据是否发生心肌损害将患儿分为心肌损害组和无心肌损害组。另选择同期健康体检儿童96例作为对照组。采用流式细胞仪测定Th17细胞和Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例;采用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和CK-MB水平。比较各组Th17细胞占CD4^(+)T细胞比例、Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例、Th17/Treg和心肌酶水平变化。采用Pearson相关性分析Th17/Treg与心肌酶相关性。结果137例支原体肺炎患儿中,发生心肌损害72例(52.55%)。心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于无心肌损害组和对照组,且无心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于对照组(P<0.05)。心肌损害组Th17细胞占CD4^(+)T细胞比例和Th17/Treg高于无心肌损害组和对照组,且Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例低于无心肌损害组和对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Th17/Treg与LDH、CK和CK-MB呈正相关(P<0.05)。结论小儿支原体肺炎并发心肌损害患儿心肌酶谱LDH、CK和CK-MB水平明显升高,Th17/Treg细胞比例失衡,且Th17/Treg与LDH、CK和CK-MB呈正相关。

lncRNA MALAT1对哮喘小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

目的:检测长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis associated in lung denocarcinoma transcript 1,MALAT1)对哮喘小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:将6~8周龄雄性BALB/c小鼠随机分成对照组和哮喘组,每组10只。用卵清蛋白诱导小鼠支气管哮喘模型,HE染色和PAS染色观察小鼠肺组织病理改变,流式细胞术检测小鼠脾细胞中的Th17细胞和Treg细胞,qRT-PCR检测脾组织中lncRNA MALAT1及Rorc/Foxp3的表达水平。结果:与对照组相比,哮喘组小鼠气道炎症变化明显,支气管周围存在明显的炎性细胞浸润,管壁增厚,气道上皮细胞破坏或不规则。哮喘组小鼠脾组织中Th17细胞比例显著升高(P<0.01),Th17细胞的关键转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(retinoic acid receptor related orphan C,Rorc)表达上调(P<0.05),而Treg细胞比例显著下降(P<0.01),其关键转录因子叉状头/翼状螺旋转录因子P3(forkhead/winged helix transcriptional factor P3,Foxp3)表达下调(P<0.05);脾组织lncRNA MALAT1相对表达量显著上升(P<0.01),与Th17细胞比例呈正相关(r=0.64,P<0.05),与Treg细胞呈负相关(r=-0.73,P<0.05);而且MALAT1的表达与Rorc表达呈正相关(r=0.65,P<0.05),与Foxp3表达呈负相关(r=-0.60,P<0.05)。结论:MALAT1与哮喘小鼠Th17/Treg细胞的失衡密切相关,靶向于MALAT1可能有助于改善哮喘小鼠Th17/Treg平衡。