Musculin KO-Foxp3-GFPKI小鼠模型的制备及在严重创伤介导Treg-Th17失衡中的初步应用

目的制备转录因子Musculin(MSC)敲除(knockout,KO)-叉状头转录因子家族成员3(forkhead box P3,Foxp3)-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)敲入(knockin,KI)小鼠模型,并初步应用于严重创伤介导调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)-Th17失衡研究。方法通过MSCKO纯合子(homozygote,-/-)小鼠和Foxp3-GFPKI纯合子(homozygote,+/+)小鼠杂交,获取MSCKO(heterozygote,+/-)-Foxp3-GFPKI(+/-)杂合子小鼠,再按同笼兄妹近亲繁殖方法进行杂合子配对,直到获取MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠。将获得MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠连续交配5代以上,观察各代小鼠的基因型、表现型和遗传稳定性。对获取的MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠和Foxp3-GFPKI小鼠实施失血/骨折,3 h后取周围淋巴结(lymph nodes,LN)、肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)、肠道集合淋巴结(Peyer’s patches,PP)、脾(spleen,SP)、骨髓(bone marrow,BM)和胸腺(thymus,Thy)。流式细胞术检测机体免疫器官和组织Treg的分布变化,qPCR检测MSC、Foxp3、孤核受体-γt(orphan nuclear receptor-γt,ROR-γt)的表达水平,进一步验证MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠的实用性,并初步探讨MSC对严重创伤介导Treg-Th17失衡的影响。结果杂交获得的各代MSCKO-Foxp3-GFPKI纯合子小鼠均能表达各分子标志物,活力、体质量和繁育能力正常。流式细胞术检测结果显示,各免疫器官和组织中均存在不同强度的GFP信号;严重创伤3 h后,MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠Treg在LN、MLN、PP和SP中的百分比分别为5.81%、4.81%、1.41%和3.1%,较创伤前差异有统计学意义。qPCR检测结果显示,相对正常组而言,野生型创伤组MSC在外周淋巴器官MLN(6.154 9)和PP(7.789 7)中的相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01);Foxp3在MSCKO创伤组MLN(2.591 2)和PP(1.506 4)中的相对表达量上升(P<0.01),表明MSC缺失可使创伤后Treg-Th17平衡左移;而ROR-γt在同组MLN(0.5395)和PP(0.544 9)中的相对表达量下降(P<0.01),同样证实了Treg-Th17平衡发生了偏移。结论成功制备MSCKO-Foxp3-GFPKI小鼠,遗传性状稳定,分子标志物和表现型明确。严重创伤后MSC可以影响Treg的分布,并使Treg-Th17平衡发生偏移,提示MSC可能作为严重创伤后恢复机体内环境免疫稳态的潜在调节靶点。

miR-155通过SOCS1/STAT3途径调控类风湿性关节炎中炎症反应和Th17/Treg失衡

目的在类风湿性关节炎(RA)中探究miR-155和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的表达及作用机制。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测miR-155和Th17、Treg细胞在RA患者(RA组)和对照组(HC组)外周血中的表达差异;生物信息学和双荧光素酶基因报告实验检测miR-155和SOSC1的调控关系;分离RA患者外周CD4^(+)T细胞,将沉默miR-155与SOCS1表达的miR-155 inhibitor和si-SOCS1及各自的阴性对照序列分别或联合转染入CD4+T细胞中,并将细胞分为:miR-NC组、miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组。使用Th17诱导分化液处理上述细胞后,采用流式细胞术检测各组CD4+T细胞中Th17比率,Western blot实验检测细胞中p-STAT3/STAT3比值。结果与HC组相比,RA患者中miR-155、Th17比率升高(P<0.01),Treg细胞比率降低(P<0.01);miR-155可靶向抑制SOCS1表达。与miR-NC组相比,miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.01);与miR-155 inhibitor组相比,miR-155 inhibitor+si-SOCS1组CD4^(+)T细胞中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05)。结论在RA患者中表达升高的miR-155可能通过SOCS1/STAT3途径来介导CD4^(+)T细胞的Th17分化,从而参与RA患者外周Th17/Treg细胞失衡。

枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

口腔扁平苔藓患者血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA水平与病损程度及Th17/Treg失衡的关系

目的探讨口腔扁平苔藓(OLP)患者血清微小核糖核酸-155-5p(miR-155-5p)、细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)mRNA水平与病损程度及辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法选择OLP患者76例(观察组),其中非糜烂型28例、糜烂型48例(轻中度糜烂29例、重度糜烂19例),同期随机另选体检健康的志愿者50例(对照组),采集所有研究对象外周静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-155-5p、SOCS1 mRNA,采用流式细胞术检测Th17、Treg比例并计算Th17/Treg。采用Pearson/Spearman相关分析法分析OLP患者血清miR-155-5p水平与SOCS1 mRNA水平的关系以及二者与外周血Th17、Treg比例和Th17/Treg的关系。结果与对照组比较,观察组血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例降低(P均<0.05)。非糜烂型OLP及糜烂型OLP轻中度糜烂、重度糜烂患者血清miR-155-5p水平以及外周血Th17比例和Th17/Treg逐渐升高,血清SOCS1 mRNA水平和外周血Treg比例逐渐降低(P均<0.05)。相关性分析显示,OLP患者血清miR-155-5p水平与血清SOCS1 mRNA水平呈负相关关系(r=-0.809,P<0.01);血清miR-155-5p水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈正相关关系(r/rs分别为0.819、0.820,P均<0.05),与Treg比例呈负相关关系(r=-0.735,P<0.05);血清SOCS1 mRNA水平与外周血Th17比例、Th17/Treg均呈负相关关系(r/rs分别为-0.770、-0.790,P均<0.05),与Treg比例呈正相关关系(r=0.733,P<0.05)。结论OLP患者血清miR-155-5p水平升高、血清SOCS1 mRNA水平降低,二者水平变化与病损程度加重和Th17/Treg失衡密切相关。

COPD患者Treg/Th17免疫失衡及血清PCT水平与急性加重发作风险的关系

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)免疫失衡及血清降钙素原(PCT)水平与急性加重发作风险的关系。方法回顾性分析2020年6月至2023年6月在西安医学院第二附属医院进行诊治的80例COPD患者临床资料,依据病情划分为COPD稳定期(SCOPD组,48例)和COPD急性加重期(AECOPD组,32例)。观察两组患者基础资料差异,采用多因素logistic回归分析AECOPD的危险因素,绘制受试者操作特征曲线(ROC)分析各项血清指标评估AECOPD的效能,采用Spearman相关性分析外周血Treg、Th17、Treg/Th17及PCT水平与AECOPD的关系。采用χ^(2)检验、t检验。结果AECOPD组中男20例,女12例,年龄(59.66±9.17)岁,病程(9.16±2.52)年;SCOPD组中男28例,女20例,年龄(60.13±9.05)岁,病程(8.98±2.14)年。AECOPD组Treg、Treg/Th17均低于SCOPD组[(2.52±0.48)%比(3.61±0.73)%、(0.54±0.16)比(1.10±0.33)],差异均有统计学意义(t=7.435、8.913,均P<0.001);AECOPD组Th17、PCT水平均高于SCOPD组[(4.64±0.95)%比(3.28±0.69)%、(1.33±0.46)μg/L比(0.75±0.32)μg/L],差异均有统计学意义(t=7.417、6.656,均P<0.001)。经多因素logistic回归分析证实,Treg、Th17、Treg/Th17、PCT均是AECOPD的影响因素(均P<0.05)。ROC分析结果显示,外周血Treg、Th17、Treg/Th17及PCT水平均可用于AECOPD的评估,曲线下面积分别为0.895、0.910、0.932、0.803(均P<0.001)。相关性分析显示,外周血Treg、Treg/Th17均与AECOPD呈负相关,Th17、PCT水平均与AECOPD呈正相关(均P<0.05)。结论Treg、Th17、Treg/Th17、PCT均是AECOPD的影响因素,且与AECOPD密切相关,可将以上指标作为评估AECOPD的标志物,为临床防治AECOPD提供参考。

肠道菌群参与慢性阻塞性肺疾病Th17/Treg失衡机制的研究进展

免疫因素是慢性阻塞性肺疾病发病的关键环节,在疾病的发生发展中起重要作用。肠作为与肺同源的器官,其代谢产物及其他信号分子能够通过血液及淋巴管循环迁移至肺,进而发挥作用。近年研究发现肠道菌群通过影响肺部免疫平衡从而在慢性阻塞性肺疾病的进展中发挥重要意义。本文基于“肠-肺轴”这一结构基础,就肠道菌群参与调节慢性阻塞性肺疾病中Th17/Treg免疫失衡的机制进行综述,为慢性阻塞性肺疾病的防治提供新的思路。

中医药调控肝脏疾病Th17/Treg免疫失衡的研究进展

肝脏作为机体最大的内脏器官,起着代谢、消化、解毒等重要作用。临床常见的肝脏疾病包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、病毒性肝炎、肝纤维化、肝癌、肝衰竭等。近几十年来,由于工业化发展、人们生活饮食习惯的改变等原因,肝脏疾病的发病率也逐年上升。据统计,2018年我国NAFLD患病率为29.2%[1],而2021年全球NAFLD的总患病率已达到了32.4%[2]。研究预测,到2030年NAFLD病例总数可出现多至30%的增长;2019年,全球慢性乙肝病毒感染的患病率为4.1%,而目前,我国患病率约占全球的25%[3]。尽管1990—2019年我国的病毒性肝炎发病率和死亡率一直呈下降趋势,但其在中国的绝对数量仍然庞大[4-6];NAFLD及病毒性肝炎也与肝纤维化、肝癌、肝衰竭等疾病进展密切相关。肝癌目前在我国常见恶性肿瘤中排第四位,其死亡率远高于英美发达国家[7-9]。由此可见,中国是肝脏疾病负担较重的国家,肝脏疾病已经成为危害人民健康及社会发展的严重公共卫生问题。

类风湿关节炎合并肺间质疾病患者Treg/Th17免疫失衡与肠道菌群变化的关系

目的探讨类风湿关节炎(RA)合并肺间质疾病(ILD)患者调节性T细胞(Treg细胞)/辅助性T细胞(Th17细胞)免疫失衡与肠道菌群变化的关系。方法选取2021年6月-2022年6月于石家庄市人民医院收治的RA患者100例为研究对象,纳入RA组。根据临床症状、X射线及胸部HRCT检查评估结果,将RA组分为RA-ILD组39例和NO-ILD组61例。收集两组患者基线资料;检测Treg/Th17细胞及相关因子;对粪便DNA样本16S rRNA V3-V4区域进行生物信息学分析;使用Spearman相关性分析检验RA-ILD患者肠道菌群丰度与Treg/Th17相关性。结果与NO-ILD组相比,RA-ILD组的Shannon指数、Observed_species指数及Chao1指数均明显较低,类杆菌属(Bacteroides)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、梭状芽孢杆菌属(Acuformics-Prevot)、厚壁菌门(Firmicutes)、真杆菌属(Eubacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、韦荣球菌属(Veilonella)相对丰度均明显较低,拟杆菌门(Bacteridetes)、变形菌门(Proteobactena)、戈登菌属(Ciordonaspp)、放线菌门(Actinobacteri)、普雷沃菌属(Prerotella)相对丰度均明显较高,Treg细胞比例及Treg/Th17明显较低,IL-23、IL-17水平及Th17细胞比例明显较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Treg/Th17与类杆菌属、嗜血杆菌属、韦荣球菌属、真杆菌属、厚壁菌门、乳杆菌属的相对丰度呈明显正相关(均P<0.05),与普雷沃菌属、变形菌门、梭状芽胞杆菌属、放线菌门、戈登菌属、拟杆菌门呈明显负相关(均P<0.05)。结论RA合并ILD患者存在Treg/Th17细胞比例失衡,而肠道菌群失衡可能是其失衡的主要原因。

血必净对抗NMDA受体脑炎模型小鼠脑组织损伤及脑脊液中Th17/Treg免疫失衡的改善作用

目的:探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体脑炎模型小鼠脑组织损伤及脑脊液(CSF)中辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T淋巴细胞(Treg)免疫失衡的影响,阐明其治疗作用。方法:60只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量血必净组和高剂量血必净组,每组15只。除对照组外,其余3组小鼠均给予抗原注射与免疫刺激结合法建立抗NMDA受体脑炎模型,低和高剂量血必净组小鼠分别给予腹腔注射5和10 mL·kg-1血必净注射液。采用HE染色观察各组小鼠脑组织病理形态表现,TUNEL法检测各组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17和转化生长因子β(TGF-β)水平,流式细胞术检测各组小鼠CSF中Th17和Treg细胞百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中维甲酸相关核孤儿受体(RORγt)、叉头状转录因子3(Foxp3)、IL-10和IL-17蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测各组小鼠脑组织中IL-17和Foxp3阳性细胞率。结果:HE染色,对照组小鼠脑组织海马CA1区结构清晰,未见明显病变;与对照组比较,模型组小鼠脑组织海马CA1区部分锥体细胞呈三角形固缩浓染,顶树突拉长,少数神经细胞脱失,组织稀疏;与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区细胞损伤减小,形态恢复正常,排列较为整齐,且高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区损伤的改善情况更明显。TUNEL法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡率明显降低(P<0.05)。ELISA法,与对照组比较,模型组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显升高(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠血清中IL-6和IL-17水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β水平明显升高(P<0.05)。流式细胞术,与对照组比较,模型组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显升高(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠CSF中CD4+IL-17A+Th17细胞百分率明显降低(P<0.05),CD25+Foxp3+Treg细胞百分率明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt及IL-17蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织中RORγt和IL-17蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Foxp3和IL-10蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。免疫组织化学染色法,与对照组比较,模型组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显升高(P<0.05),Foxp3阳性细胞率明显降低(P<0.05);与模型组比较,低和高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低(P<0.05),Foxp3阳性细胞率明显升高(P<0.05);与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠脑组织中IL-17阳性细胞率明显降低(P<0.05),Foxp3阳性细胞率明显升高(P<0.05)。结论:血必净能够有效改善抗NMDA受体脑炎小鼠脑组织损伤,调控细胞因子水平,干预抗NMDA受体脑炎小鼠Th17/Treg免疫失衡现象。

强直性脊柱炎患者外周血TLR4、JAK3基因表达与Th17/Treg失衡的关系

目的探究强直性脊柱炎患者外周血中Toll样受体4(TLR4)、Janus蛋白酪氨酸激酶3(JAK3)基因表达与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法101例AS患者(AS组)按照AS疾病活动指数(BASDAI)评分分为AS稳定期(ASS)组(<4分)42例、AS活动期(ASA)组(≥4分)59例,另选同期于本院体检健康者为健康组50例。荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、JAK3 mRNA表达,检测血清Th17、Treg细胞比例,并计算Th17/Treg比值。结果AS组外周血PBMC中TLR4 mRNA、JAK3 mRNA表达高于健康组(P<0.05)。AS组外周血Th17比例及Th17/Treg高于健康组,Treg比例低于健康组(P<0.05)。较高水平TLR4 mRNA、JAK3 mRNA及Th17为AS的危险因素,较高水平Treg为AS保护因素。AS患者TLR4 mRNA、JAK3 mRNA分别与Th17比例及Th17/Treg呈正相关,与Treg比例呈负相关(P<0.05)。结论AS患者PBMC中TLR4、JAK3基因呈高表达且Th17/Treg呈失衡状态,TLR4、JAK3基因高表达与AS患者Th17/Treg失衡密切相关。

维生素D通过调控Treg/Th17细胞功能失衡改善 肺炎 链球菌诱导的慢性鼻-鼻窦炎模型的作用研究

目的:探究外源性维生素D(VitD)对肺炎链球菌诱导的慢性鼻-鼻窦炎(CRS)小鼠中调节性T细胞/辅助性T细胞17(Treg/Th17)功能失衡的作用。方法:将40只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、维生素D组(VitD组)和克拉霉素组(CLR组),每组10只。除Control组外,其余各组小鼠均在鼻窦腔填充含肺炎链球菌菌液海绵以复制CRS模型,VitD组和CLR组小鼠分别以VitD 3溶液、克拉霉素溶液进行灌胃;21 d后,采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清白细胞介素(IL)6、IL-10、IL-17、IL-23及转化生长因子β(TGF-β)水平,苏木精-伊红染色和过碘酸雪夫染色观察小鼠鼻窦黏膜病理变化,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测小鼠鼻窦黏膜内维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)和Forkhead家族转录因子3(Foxp3)的mRNA及蛋白表达水平,免疫组化染色检测小鼠鼻窦黏膜内IL-17和Foxp3阳性表达,流式细胞术分析外周血中CD4+IL-17A+和CD25+Foxp3+细胞比例分布。结果:与Control组比较,Model组小鼠血清中IL-6、IL-17及IL-23水平升高,IL-10、TGF-β水平降低(P<0.05);鼻窦黏膜内发生明显病变,有大量炎症细胞浸润,杯状细胞数目增加(P<0.05);RORγt mRNA和蛋白相对表达量上调,Foxp3 mRNA和蛋白相对表达量均下调(P<0.05);IL-17阳性表达率升高,Foxp3阳性表达率降低(P<0.05);外周血中CD4+IL-17A+细胞比例升高,CD25+Foxp3+细胞比例降低(P<0.05),差异均有统计学意义。与Model组比较,VitD组和CLR组小鼠血清中IL-6、IL-17和IL-23水平降低,IL-10、TGF-β水平升高(P<0.05);鼻窦黏膜内炎症细胞浸润减轻,杯状细胞数目减少(P<0.05);RORγt mRNA和蛋白相对表达量均下调,Foxp3 mRNA和蛋白相对表达量均上调(P<0.05);IL-17阳性表达率降低,Foxp3阳性表达率升高(P<0.05);外周血中CD4+IL-17A+细胞比例降低,CD25+Foxp3+细胞比例升高(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:VitD能够改善CRS模型小鼠鼻窦黏膜的病理表现,减轻炎症细胞浸润,其机制可能与调控Treg/Th17细胞功能失衡相关。

β-谷甾醇对OVA诱导的过敏性哮喘大鼠模型中Th17/Treg免疫失衡的调节

目的:探讨β-谷甾醇对卵白蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘大鼠的干预作用及潜在作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常组(CON)、模型组(M)、阳性药地塞米松组(DEX,0.075 mg/kg)、β-谷甾醇组(Sit,50 mg/kg),采用腹腔注射OVA氢氧化铝溶液致敏,雾化吸入OVA激发建立过敏性哮喘大鼠模型。雾化激发前30 min灌胃给药,连续给药7 d后,检测大鼠咳喘指标、气管酚红排泌量;HE染色观察肺组织病理变化;流式细胞术检测大鼠原代肺细胞活性氧(ROS)、凋亡水平及外周血中Th17和Treg细胞比例;生化法检测大鼠肺组织中MDA含量及T-SOD、GSH-Px活力;ELISA检测Th17、Treg相关细胞因子(TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-35)水平。结果:与模型组相比,β-谷甾醇明显延长了过敏性哮喘大鼠的咳嗽及引喘潜伏期,减少了咳嗽及喘息次数,促进了气管酚红排泌;显著减轻了哮喘大鼠肺组织炎症浸润;显著降低了哮喘大鼠肺组织MDA含量、原代肺细胞ROS和凋亡水平,提高了T-SOD及GSH-Px活力;显著降低了Th17细胞比例及促炎细胞因子TNF-α、IL-4、IL-6、IL-17A水平,提高了Treg细胞比例及抑炎细胞因子IL-35水平。结论:β-谷甾醇能够改善OVA诱导的过敏性哮喘大鼠气道炎症和氧化损伤,其作用机制可能与β-谷甾醇对Th17/Treg免疫失衡及氧化应激反应的调节有关。

小儿支原体肺炎血Th17/Treg细胞失衡与心肌损害发生的相关性

目的探讨小儿支原体肺炎血Th17/调节性T细胞(Treg)失衡与心肌损害发生的相关性。方法选择2020年3月—2022年3月于邢台市人民医院就诊的支原体肺炎患儿137例作为观察对象,通过肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,影像学检查及心电图表现等判定心肌损害,并根据是否发生心肌损害将患儿分为心肌损害组和无心肌损害组。另选择同期健康体检儿童96例作为对照组。采用流式细胞仪测定Th17细胞和Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例;采用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和CK-MB水平。比较各组Th17细胞占CD4^(+)T细胞比例、Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例、Th17/Treg和心肌酶水平变化。采用Pearson相关性分析Th17/Treg与心肌酶相关性。结果137例支原体肺炎患儿中,发生心肌损害72例(52.55%)。心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于无心肌损害组和对照组,且无心肌损害组血清LDH、CK和CK-MB水平高于对照组(P<0.05)。心肌损害组Th17细胞占CD4^(+)T细胞比例和Th17/Treg高于无心肌损害组和对照组,且Treg细胞占CD4^(+)T细胞比例低于无心肌损害组和对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Th17/Treg与LDH、CK和CK-MB呈正相关(P<0.05)。结论小儿支原体肺炎并发心肌损害患儿心肌酶谱LDH、CK和CK-MB水平明显升高,Th17/Treg细胞比例失衡,且Th17/Treg与LDH、CK和CK-MB呈正相关。

PBMCs miR-29c在肺炎支原体肺炎患儿中的表达及与Th17/Treg失衡的关系

目的探究外周血单个核细胞(PBMCs)miR-29c在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的表达及Th17/Treg失衡的关系。方法2019年8月至2021年4月在我院儿科共纳入108例MPP患儿,包括58例大环内酯类抗菌药物敏感的MPP患儿(MSMP组)和50例难治性MPP(RMPP组)患儿。另外选择50例健康体检儿童作为对照组。采集入院时的血液样本。采用流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞百分比,酶联免疫吸附法测定血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。实时荧光定量PCR法检测PBMCs miR-29c表达。结果与对照组相比,MSMP组和RMPP组CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平升高,同时PBMCs miR-29c相对表达量降低(P<0.05);而且RMPP组患儿CD4^(+)Th17细胞百分比、CD4^(+)Treg细胞百分比、Th17/Treg比值以及血清IL-17水平高于MSMP组,PBMCs miR-29c相对表达量低于MSMP组(P<0.05)。对于所有MPP患儿,无论是MSMP组还是RMPP组,PBMCs miR-29c相对表达量与循环Th17细胞%、Th17/Treg比值、血清IL-17水平均呈负相关性(P<0.05)。经受试者工作特征曲线分析,PBMCs miR-29c预测RMPP的AUC为0.932(95%CI:0.888~0.976),最佳临界值为0.67。经多因素Logistic回归分析,PBMCs miR-29c是影响RMPP进展的独立影响因子,PBMCs miR-29c≥0.67患儿进展为RMPP风险较低(P<0.05)。结论MPP患儿中PBMCs miR-29c低表达可诱导Th17细胞分化,进而促进Th17/Treg失衡,这可能是导致RMPP进展的重要机制之一。

复发性流产TH1/TH2、TH17/Treg细胞失衡与阴阳失衡的关系探究

现代医学认为免疫系统维持机体生理状态稳定,任一环节异常即发生免疫疾病。中医学认为机体免疫稳定是阴阳共同作用、维持平衡的结果,“阴平阳秘”是衡量机体处于稳定状态的关键,阴阳失衡导致疾病发生。“阴阳充盛、气血调和维持机体阴阳平衡”是妊娠的重要生理基础,故阴阳失衡是复发性流产发生的重要因素。Th1/Th2、Th17/Treg细胞失衡是复发性流产在生殖免疫学中的重要机制,免疫疾病的发生从一定程度上属于阴阳失衡的表现。文中从阴阳对立制约、互根互用、消长平衡、相互转化四个方面就机体阴阳失衡与复发性流产Th1/Th2、Th17/Treg(调节性T细胞)免疫失衡的关系进行探讨。

老年COPD患者Treg/Th17免疫失衡与急性加重发作的关系及预测预后价值分析

目的 探究老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)免疫失衡与急性加重发作的关系及预测预后价值。方法 选取石家庄市人民医院2020年1月—2021年1月老年COPD患者116例,其中稳定期COPD(SCOPD)患者70例作为稳定组,急性加重期COPD(AECOPD)患者46例作为AECOPD组,另选取同期健康体检者58例作为对照组。比较3组外周血Treg、Th17、Treg/Th17水平,分析各外周血指标与SCOPD、AECOPD的关系。随访6个月,统计研究组预后情况,比较研究组不同预后患者临床资料及外周血Treg、Th17、Treg/Th17水平,分析各外周血指标与呼吸功能指标及预后的关系,并评价其预测预后价值。结果 AECOPD组外周血Treg、Treg/Th17低于SCOPD组,SCOPD组低于对照组,Th17高于SCOPD组,SCOPD组高于对照组(P<0.05);外周血Treg、Treg/Th17与SCOPD、AECOPD呈负相关,Th17与SCOPD、AECOPD呈正相关(P<0.05);研究组预后不良患者mMRC分级、CAT指数、BODE评分、外周血Th17高于预后良好患者,Treg、Treg/Th17低于预后良好患者(P<0.05);外周血Th17与mMRC分级、CAT指数、BODE评分呈正相关,Treg、Treg/Th17与mMRC分级、CAT指数、BODE评分呈负相关(P<0.05);外周血Treg/Th17预测老年COPD患者预后不良的AUC(0.801)大于Treg(0.709)、Th17(0.727)。结论 Treg降低、Th17升高所致的Treg/Th17免疫失衡与老年COPD患者急性加重发作、呼吸功能密切相关,可能成为临床治疗新靶点,且对预后不良有可靠预测价值。

EGR2调控慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者Th17/Treg失衡的分子机制

目的探究EGR2介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者Th17/Treg细胞失衡的分子机制。方法选取2021年7月—2022年9月就诊于我院的CRSwNP患者50例,根据SPT检测结果分为Non-atopic CRSwNP组(n=23)和Atopic CRSwNP组(n=27),同期因鼻中隔偏曲、单纯上颌窦囊肿接受手术的患者作为Control组(n=25)。分别取患者鼻息肉及鼻腔、鼻窦粘膜,采用WB法测鼻组织EGR2、IL-17A、FOXP3、STAT3和p-STAT3的表达,Elisa法测外周血中EGR2、IL-17A、TGF-β1的表达;分选培养CD4+T细胞,SiRNA敲低CD4+T细胞中EGR2表达,WB法检测EGR2、IL-17A、FOXP3、STAT3和p-STAT3的表达。结果3组患者鼻组织中EGR2和FOXP3表达比较,Atopic CRSwNP组<Non-atopic CRSwNP组<Control组(P<0.05);IL-17A和p-STAT3表达比较,Atopic CRSwNP组>Non-atopic CRSwNP组>Control组(P<0.05)。3组患者外周血中EGR2和TGF-β1含量比较,Atopic CRSwNP组<Non-atopic CRSwNP组<Control组(P<0.05);IL-17A含量比较,Atopic CRSwNP组>Non-atopic CRSwNP组>Control组(P<0.05)。3组患者外周血中EGR2含量与TGF-β1含量呈正相关(r=0.616,P<0.05),与IL-17A含量呈负相关(r=-0.587,P<0.05)。较于Negative Control组,SiRNA组的STAT3表达无差异(P>0.05),p-STAT3和IL-17A表达增加(P<0.05),EGR2和FOXP3表达降低(P<0.05)。结论Atopic CRSwNP组和Non-atopic CRSwNP组患者息肉组织和外周血中均存在Th17/Treg细胞失衡,且Atopic CRSwNP患者更严重;EGR2低表达可能是CRSwNP患者Th17/Treg细胞失衡的重要因素,低表达的EGR2增加STAT3磷酸化,从而导致CD4+T细胞过度分化为Th17细胞,同时抑制Treg细胞产生。

哮喘小鼠中Foxp3^+Treg/Th17的失衡及意义

目的检测哮喘小鼠与对照小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17及Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比,探讨哮喘小鼠中Foxp3+Treg/Th17比值变化及其在哮喘中的意义。方法将6周清洁级Balb/c小鼠随机分为对照组(control)和哮喘组(OVA),哮喘组给予OVA致敏和激发,建立哮喘小鼠模型,对照组用PBS代替OVA。最后1次激发后24 h内检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及细胞分类计数;HE染色制作肺组织病理切片,光镜下观察病理变化;小鼠肺功能仪检测小鼠气道高反应性;流式细胞术检测小鼠肺组织中Th1、Th2、Th17、Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞百分比。结果哮喘组BALF细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞比例显著高于对照组,肺部炎症反应与气道高反应显著高于对照组。哮喘组小鼠肺组织中Th2、Th17细胞百分比明显高于对照组[分别为(0.83±0.08)%vs(0.50±0.03)%;(1.74±0.17)%vs(1.07±0.07)%,P<0.01];而Th1、Foxp3+Treg细胞百分比显著低于对照组[分别为(1.39±0.14)%vs(2.56±0.18)%;(4.87±0.35)%vs(7.67±0.44)%,P<0.001];哮喘组Th1/Th2及Foxp3+Treg/Th17明显低于对照组(分别为1.66±0.17 vs 5.19±0.56;3.02±0.49 vs 7.38±0.71,P<0.001)。结论除Th1/Th2失衡外,Foxp3+Treg/Th17失衡在哮喘发病中亦有重要作用。

围术期异体输血对肺癌患者Th1/Th2、Th17/Treg细胞因子失衡的影响

目的观察围术期异体输血后肺癌患者外周血CD4+T细胞各亚群Th1、Th2、Th17及Treg细胞相关因子的比例变化。方法将行手术治疗的64例肺癌患者随机分为2组:未辐照组34例术中输入普通悬浮红细胞,辐照组30例术中输入辐照悬浮红细胞,分别于术前及术后14 d应用流式细胞术(FCM)测定2组患者外周血Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4)、Th17(IL-17)及Treg(Foxp3)细胞比例。结果术后14 d,2组外周血中Th1、Treg细胞比例和Th1/Th2均明显高于术前(P均<0.05),Th2细胞比例、Th17/Treg均明显低于术前(P均<0.05),且辐照组Th1细胞比例及Th1/Th2、Th17/Treg比值均显著高于未辐照组(P均<0.05),Treg细胞比例低于未辐照组(P<0.05)。结论肺癌患者围术期异体输血后Th1/Th2、Th17/Treg细胞因子失衡可能与输入异体血中的活性淋巴细胞有关。

IL-35、Th17/Treg细胞失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义

目的研究IL-35、Th17/Treg失衡在大鼠肺纤维化中的表达及意义。方法随机将60只健康雌雄各半Wistar大鼠分为两组:对照组30只(生理盐水组)、肺纤维化组30只(博来霉素组),分别于实验第7天、第14天、第28天处死对照组、模型组各10只大鼠,留取各组大鼠肺组织、肺泡灌洗液,观察大鼠肺组织形态病理学变化(HE染色和Masson三色染色);测定支气管冲洗液及肺组织中Treg、Th17细胞,IL-35、IL-17表达水平,并分析IL-35与Th17/Treg的相互关系。结果 1.肺纤维化组与对照组相比,肺组织炎症程度、肺纤维化程度显著,肺部炎症以造模第7d最明显。2.两组相比,肺纤维化组IL-35、Treg细胞表达水平显著低于对照组,IL-17、Th17细胞表达显著高于对照组,差异均具有统计学意义。3.肺纤维化组IL-35与IL-17表达水平呈明显的负相关(r=-0.378,P<0.01),IL-35与Treg细胞表达水平呈正相关(r=0.461,P<0.01),IL-35与Th17/Treg细胞表达水平呈负相关(r=-0.386,P<0.01)。结论本研究通过对大鼠肺纤维化组、对照组IL-35、IL-17、Th17/Treg细胞表达水平与相关性分析;提示IL-35可能参与肺纤维化Th17/Treg细胞平衡的调节,对IL-35的调控有可能成为肺纤维化治疗的新的靶点。