枯芩与条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎大鼠Th17/Treg免疫失衡的调节机制研究

目的比较枯芩、条芩提取物对湿热型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞因子及转录因子维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt)/叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达的影响。方法50只健康SD大鼠随机分为5组:正常组、模型组、枯芩组、条芩组和美莎拉嗪组,每组10只。采用高脂高糖饲料喂养+高度白酒灌胃+5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合诱导法,建立湿热型UC大鼠模型;各组分别于造模第1天开始灌胃给药,枯芩组、条芩组给药剂量均为5.25 g·kg^(-1)·d^(-1),美沙拉嗪组给药剂量为0.266 g·kg^(-1)·d^(-1),正常组、模型组灌服等体积生理盐水。连续给药28 d。给药结束后,麻醉大鼠,腹主动脉取血,分离血清,Elisa法检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、IL-17A、IL-10、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))水平;分离脾脏和结肠组织,采用流式细胞术检测脾脏Th17、Treg细胞比例,计算Th17/Treg比值;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平;免疫蛋白印迹(western blot)法检测结肠组织ROR-γt、Foxp3蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);给药28 d后,与模型组比较,各给药组大鼠血清IL-6、IL-17A、脾脏Th17细胞比例、Th17/Treg、结肠组织ROR-γt mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),血清IL-10、IL-35、TGF-β_(1)、脾脏Treg细胞比例、结肠组织Foxp3 mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的升高(P<0.05或P<0.01);与枯芩组比较,条芩组、美沙拉嗪组在降低IL-6、IL-17A,增加IL-10、IL-35、TGF-β_(1)水平,调节ROR-γt mRNA和蛋白表达方面(P<0.05或P<0.01)均优于枯芩组。结论枯芩、条芩可能通过调控转录因子ROR-γt、Foxp3表达,恢复Th17/Treg免疫失衡,抑制炎症反应,从而保护肠道黏膜屏障受损,发挥治疗湿热型UC的作用。

性激素和Treg/Th17失衡在自身免疫性肝炎中的作用及研究进展

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种典型的自身免疫介导的肝脏疾病,大多数患者起病隐匿,无特定的临床表现,且检出率呈逐年上升趋势。其发病机制与T淋巴细胞介导的免疫调节紊乱,尤其是Treg/Th17失衡密切相关。AIH好发于围绝经期女性,性激素在免疫反应中起重要作用,其可通过影响免疫细胞的表达进而引起AIH的发生、发展。本文就性激素和Treg/Th17失衡在AIH中的作用及研究进展作一综述。

microRNA-4281通过调节FOXP3引起Treg/Th17免疫失衡诱导免疫性血小板减少性紫癜

目的 研究miR-4281在免疫性血小板减少性紫癜(ITP)中的作用及其机制。方法 通过GEO数据库筛选ITP中异常表达的miRNA。收集新诊ITP、治疗有效的ITP患者以及健康受试者,取静脉血,分离外周血单核细胞(PBMCs)和CD4^(+)T细胞。利用实时定量PCR检测细胞中miR-4281以及其他因子的表达量。使用流式细胞术分析细胞中CD4^(+)CD25^(+)FOXP3^(+)Tregs和Th17细胞的含量。使用Pearson相关系数法检验miR-4281表达水平与各因子的关系。结果 生物信息学分析发现miR-4281在ITP中异常表达。与健康受试者和治疗有效的ITP患者相比,miR-4281的表达水平下降。ITP患者PBMCs中,miR-4281表达水平与Tregs含量和Treg/Th17呈正相关,与Th17细胞含量呈负相关;miR-4281可促进Tregs细胞的分化,并抑制Th17的分化;miR-4281表达水平与FOXP3表达水平正相关。结论 miR-4281表达水平在ITP中降低,这种降低可以抑制FOXP3的表达,导致Treg/Th17免疫失衡,促进ITP进展。

类风湿关节炎合并肺间质疾病患者Treg/Th17免疫失衡与肠道菌群变化的关系

目的探讨类风湿关节炎(RA)合并肺间质疾病(ILD)患者调节性T细胞(Treg细胞)/辅助性T细胞(Th17细胞)免疫失衡与肠道菌群变化的关系。方法选取2021年6月-2022年6月于石家庄市人民医院收治的RA患者100例为研究对象,纳入RA组。根据临床症状、X射线及胸部HRCT检查评估结果,将RA组分为RA-ILD组39例和NO-ILD组61例。收集两组患者基线资料;检测Treg/Th17细胞及相关因子;对粪便DNA样本16S rRNA V3-V4区域进行生物信息学分析;使用Spearman相关性分析检验RA-ILD患者肠道菌群丰度与Treg/Th17相关性。结果与NO-ILD组相比,RA-ILD组的Shannon指数、Observed_species指数及Chao1指数均明显较低,类杆菌属(Bacteroides)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、梭状芽孢杆菌属(Acuformics-Prevot)、厚壁菌门(Firmicutes)、真杆菌属(Eubacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、韦荣球菌属(Veilonella)相对丰度均明显较低,拟杆菌门(Bacteridetes)、变形菌门(Proteobactena)、戈登菌属(Ciordonaspp)、放线菌门(Actinobacteri)、普雷沃菌属(Prerotella)相对丰度均明显较高,Treg细胞比例及Treg/Th17明显较低,IL-23、IL-17水平及Th17细胞比例明显较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Treg/Th17与类杆菌属、嗜血杆菌属、韦荣球菌属、真杆菌属、厚壁菌门、乳杆菌属的相对丰度呈明显正相关(均P<0.05),与普雷沃菌属、变形菌门、梭状芽胞杆菌属、放线菌门、戈登菌属、拟杆菌门呈明显负相关(均P<0.05)。结论RA合并ILD患者存在Treg/Th17细胞比例失衡,而肠道菌群失衡可能是其失衡的主要原因。

瑶医神火灸通过调控Th17/Treg轴免疫功能失衡改善缺血再灌注大鼠模型的作用研究

目的:探讨瑶医神火灸对缺血再灌注大鼠Th17/Treg免疫平衡的影响。方法:将40只健康SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、神火灸组及艾灸组4组,使用线栓术制作缺血再灌注模型,在治疗前、治疗14 d后对大鼠神经功能缺损进行评分,使用TTC染色观察不同治疗组脑梗死体积变化,使用RT-PCR法检测各组大鼠脑组织中IL-17 mRNA、IL-6 mRNA、TGF-β2mRNA、IL-10 mRNA的表达水平,并比较Th17/Treg轴比值变化情况。结果:经治疗,神火灸组及艾灸组脑梗死体积与模型组相比减小(P<0.05),同时神火灸组脑梗死体积比艾灸组更小(P<0.05);神火灸组及艾灸组神经功能均改善,其中神火灸组神经功能改善更显著;与模型组及艾灸组相比,瑶医神火灸组IL-17 mRNA、IL-6 mRNA等的表达减少(P<0.05),而TGF-β2 mRNA、IL-10 mRNA水平的表达增加(P<0.05),经过两者比较发现神火灸组IL-6/IL-10比值降低,差异具有统计学意义(P<0.05),提示经过瑶医神火灸干预后Th17/Treg免疫平衡下降,具有统计学意义。结论:瑶医神火灸可以通过降低Th17分泌的促炎因子及升高Treg分泌的抗炎因子的水平,从而调节Th17/Treg免疫平衡轴,减轻脑缺血再灌注损伤。

银杏提取物对UC大鼠肠黏膜屏障功能的改善作用及对Th17/Treg细胞免疫稳态的影响

目的:探究银杏提取物对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜屏障功能的改善作用及对Th17/Treg细胞免疫稳态的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及银杏提取物低、中、高剂量组,除正常对照组外其余各组大鼠均给予硝基苯磺酸、乙醇复合诱导建立UC大鼠模型。造模成功后各给药组灌胃相应剂量药物,正常对照组和模型组大鼠灌胃相应体积生理盐水,共给药14 d。记录各组大鼠一般状态,并追踪记录疾病活动指数(DAI),采用腹壁回撤反应(AWR)检测大鼠内脏敏感程度,检测各组大鼠外周血Th17、Treg细胞比例和血清IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平,检测肠道菌群及结肠组织中TLR4、NOD2 mRNA及蛋白表达。结果:与治疗前比较,各给药组大鼠饮水量、体质量、肛温显著升高,DAI显著降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠饮水量、体质量、肛温显著降低,DAI、AWR显著升高,外周血Treg细胞比例及血清IL-2、IL-10水平显著降低,外周血Th17细胞比例及Th17/Treg和血清IL-6、IL-8、TNF-α水平显著升高,肠道大肠杆菌、肠球菌水平显著升高,乳酸杆菌、双歧杆菌水平显著降低,结肠组织中TLR4、NOD2 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,银杏提取物各剂量组大鼠饮水量、体质量、肛温显著升高,DAI、AWR显著降低,外周血Treg细胞比例及血清IL-2、IL-10水平显著升高,外周血Th17细胞比例及Th17/Treg和血清IL-6、IL-8、TNF-α水平显著降低,肠道大肠杆菌、肠球菌水平显著降低,乳酸杆菌、双歧杆菌水平显著升高,结肠组织中TLR4、NOD2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。银杏提取物的作用呈现剂量依赖性。结论:银杏提取物可降低UC大鼠结肠组织TLR4、NOD2 mRNA及蛋白表达,改善肠黏膜屏障功能,维持Th17/Treg细胞免疫稳态,抑制其炎症反应。

miR-155通过SOCS1/STAT3途径调控类风湿性关节炎中炎症反应和Th17/Treg失衡

目的在类风湿性关节炎(RA)中探究miR-155和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的表达及作用机制。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测miR-155和Th17、Treg细胞在RA患者(RA组)和对照组(HC组)外周血中的表达差异;生物信息学和双荧光素酶基因报告实验检测miR-155和SOSC1的调控关系;分离RA患者外周CD4^(+)T细胞,将沉默miR-155与SOCS1表达的miR-155 inhibitor和si-SOCS1及各自的阴性对照序列分别或联合转染入CD4+T细胞中,并将细胞分为:miR-NC组、miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组。使用Th17诱导分化液处理上述细胞后,采用流式细胞术检测各组CD4+T细胞中Th17比率,Western blot实验检测细胞中p-STAT3/STAT3比值。结果与HC组相比,RA患者中miR-155、Th17比率升高(P<0.01),Treg细胞比率降低(P<0.01);miR-155可靶向抑制SOCS1表达。与miR-NC组相比,miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.01);与miR-155 inhibitor组相比,miR-155 inhibitor+si-SOCS1组CD4^(+)T细胞中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05)。结论在RA患者中表达升高的miR-155可能通过SOCS1/STAT3途径来介导CD4^(+)T细胞的Th17分化,从而参与RA患者外周Th17/Treg细胞失衡。

血清HSP60、HSP70水平与原发性免疫性血小板减少症患儿Th17/Treg细胞和预后的关系

目的分析血清热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白70(HSP70)与原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)和预后的关系。方法选取2020年6月—2022年6月保山市人民医院儿科诊治的ITP患儿128例作为病例组,另选同期体检健康儿童60例作为健康对照组。检测并比较2组血清HSP60、HSP70与Th17/Treg细胞水平。Pearson法分析血清HSP60、HSP70与Th17/Treg细胞的相关性。ITP患儿出院后随访1年,根据不同预后情况分为预后良好亚组(107例)和预后不良亚组(21例)。收集ITP患儿的临床资料,采用单因素、多因素Logistic回归模型分析ITP患儿预后的影响因素,并构建风险预测列线图模型。建立受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HSP60、HSP70与Th17/Treg细胞对ITP患儿预后的预测价值。结果病例组血清HSP60、HSP70水平及Th17/Treg细胞显著高于健康对照组(t/Z/P=20.445/<0.001、17.467/<0.001、5.823/<0.001)。Pearson相关分析显示,血清HSP60、HSP70与Th17/Treg细胞呈正相关(r/P=0.417/<0.001、0.348/<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,HSP60高、HSP70高、Th17/Treg高为ITP患儿预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.177(1.041~1.331),1.181(1.038~1.343),9.895(2.171~68.177)],初诊时PLT计数偏高则为保护因素[OR(95%CI)=0.848(0.726~0.990)]。ROC曲线分析结果显示,初诊时PLT、HSP60、HSP70、Th17/Treg水平及列线图模型的曲线AUC分别为0.793、0.730、0.787、0.840、0.975;Bootstrap法(B=1000)对列线图模型进行内部验证显示,Bias-corrected预测曲线与Ideal线基本重合,该模型预测能力较好。决策曲线显示,该模型的阈值概率范围为0.01~0.98,其净收益率>0,高于两条无效线。结论IPT患儿血清HSP60、HSP70、Th17/Treg水平均明显升高,血清HSP60、HSP70与Th17/Treg呈显著正相关。初诊时PLT、HSP60、HSP70、Th17/Treg水平是ITP患儿预后不良的影响因素,且基于HSP60、HSP70等独立危险因素构建的列线图模型对ITP患儿预后不良具有较好的预测价值。

芍药苷调节RhoA/ROCK信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的探讨芍药苷调节Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)小鼠辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫平衡的影响。方法随机选出10只小鼠作为正常对照组,其余小鼠构建EAU模型,将造模成功小鼠随机平分为模型组、芍药苷组(10 mg·kg^(-1)芍药苷)、RhoA/ROCK信号通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(25μmol·L^(-1)LPA)、芍药苷+LPA组(10 mg·kg^(-1)芍药苷+25μmol·L^(-1)LPA),每组10只。模型组和正常对照组给予等量生理盐水,给药每天1次,持续14 d。眼前节临床表现评分评估炎症严重程度;HE染色观察眼球组织病理形态;ELISA法检测血清中炎性因子转化生长因子-β(trarsforming growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素23(IL-23)水平;流式细胞术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western Blot法检测维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头状转录因子3(Foxp3)以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达。结果正常对照组小鼠无虹膜、结膜血管舒张充血,与正常对照组比,模型组小鼠出现虹膜血管舒张充血,前房、虹膜、睫状体和视网膜内均有大量炎性细胞膨胀,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显升高(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显下降(P<0.05)。与模型组比,芍药苷组小鼠虹膜血管充血症状明显缓解,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显升高(P<0.05);而LPA加重了眼部损伤(P<0.05),逆转了芍药苷对EAU小鼠的改善效果(P<0.05)。结论芍药苷可通过下调RhoA/ROCK信号通路调节EAU小鼠Th17/Treg免疫平衡减轻EAU小鼠葡萄膜炎。

基于Th17/Treg细胞免疫平衡探讨升阳益胃汤治疗特发性膜性肾病的作用及机制

[目的]探讨升阳益胃汤对膜性肾病(MN)大鼠模型的保护作用及机制。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分为对照组10只和造模组30只,造模组尾静脉注射羊抗大鼠FX1A血清制备海曼(Heymann)肾炎模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、升阳益胃汤组和盐酸贝那普利组各10只,并予以相应药物灌胃。干预6周后,检测24 h尿蛋白(24 h-UTP)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取肾组织行苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)和六胺银(PASM)染色,观察肾组织病理形态变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测肾组织白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-10(IL-10)、α-辅肌动蛋白-4(α-actinin-4)、足糖萼蛋白[Podocalyxin(Podxl)]表达情况;取大鼠脾脏检测Th17和Treg细胞数量。[结果]与对照组相比,模型组大鼠24 h-UTP、TC、TG水平显著升高,TP、Alb水平显著降低(P<0.01),Scr、BUN水平差别无统计学意义(P>0.05);模型组肾脏病理改变明显;α-actinin-4、Podxl表达均明显减少(P<0.01、P<0.05),IL-17A水平显著升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);Th17%、Th17/Treg显著升高,Treg%显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各治疗组24 h-UTP、TC、TG、TP水平显著降低(P<0.05或P<0.01),Alb水平明显升高(P<0.05);肾脏病理改变减轻。其中,Z组α-actinin-4、Podxl表达明显增加(P<0.05或P<0.01);IL-17A、Th17%、Th17/Treg水平明显降低,IL-10、Treg%水平升高(P<0.05或P<0.01)。[结论]升阳益胃汤可降低膜性肾病大鼠蛋白尿,减轻肾脏病理损伤,并提高足细胞α-actinin-4、Podxl的表达,具有明显的肾脏保护作用,其作用机制可能与调节Th17/Treg免疫平衡有关。

Th17和Treg细胞在自身免疫性肝炎发生发展中的作用研究进展

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)是一种由免疫介导的慢性肝脏疾病,酒精、药物、毒素等为其诱导因素,至今其发病机制尚未完全阐明,在治疗上尚以缓解症状、延缓疾病进展为主。由于其免疫特性,T细胞作为免疫应答反应的主要细胞之一引起了人们的关注。近些年来国内外学者通过对AIH免疫机制的深入研究发现Th17与Treg细胞在AIH中的发生发展中起着关键作用。本文从自身免疫反应出发,阐明Th17和Treg细胞除了其自身单独作用之外,在数量和功能方面还会互相影响,并且IL-17、IL-6、RORγt、FoxP3等相关细胞因子也可以通过影响Th17细胞和/或Treg细胞水平进而影响AIH的发生发展。

肠道菌群参与慢性阻塞性肺疾病Th17/Treg失衡机制的研究进展

免疫因素是慢性阻塞性肺疾病发病的关键环节,在疾病的发生发展中起重要作用。肠作为与肺同源的器官,其代谢产物及其他信号分子能够通过血液及淋巴管循环迁移至肺,进而发挥作用。近年研究发现肠道菌群通过影响肺部免疫平衡从而在慢性阻塞性肺疾病的进展中发挥重要意义。本文基于“肠-肺轴”这一结构基础,就肠道菌群参与调节慢性阻塞性肺疾病中Th17/Treg免疫失衡的机制进行综述,为慢性阻塞性肺疾病的防治提供新的思路。

汉黄芩素促进自身免疫性肝炎模型大鼠Th17/Treg细胞平衡

目的探讨汉黄芩素(WG)对自身免疫性肝炎(AIH)大鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法随机选出10只大鼠作为对照组,其余大鼠通过尾静脉注射伴刀豆球蛋白A(ConA,12.5 mg/kg)溶液构建AIH模型大鼠。将造模成功大鼠随机平分为AIH组、L-WG组(10 mg/kg)、M-WG组(20 mg/kg)、H-WG组(30 mg/kg)、H-WG+VPA组[30 mg/kg WG+300 mg/kg Notch信号通路激活剂丙戊酸(VPA)],每组10只,每天给药1次,持续10 d。ELISA检测血清中炎性因子及肝功能指标;HE染色观察肝脏组织病理形态;流式细胞测量术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western blot检测脾脏类视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)以及肝组织Notch信号通路蛋白质的表达。结果对照组大鼠肝组织结构正常,染色清晰;AIH组大鼠肝组织细胞出现水肿,细胞体积增大导致肝窦受压变窄,出现大量炎性细胞浸润以及少量坏死现象。AIH组较对照组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、白介素(IL)-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、hes家族bHLH转录因子1(HES1)、含YRPW基序的bHLH转录因子hes相关家族1(HEY1)蛋白表达均显著上升(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著下降(P<0.05);与AIH组相比,L-WG组、M-WG组、H-WG组肝损伤情况得到改善,ALT、AST活性、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、Notch、HES1、HEY1蛋白表达均显著降低(P<0.05),IL-10和TNF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3蛋白水平均显著升高(P<0.05);VPA逆转了H-WG对AIH大鼠的改善效果。结论WG可能通过下调Notch信号通路促进AIH大鼠Th17/Treg细胞平衡。

IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究

目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原(NeuN)和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果:与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞凋亡数增加,血清中IL-6和IL-17水平升高,IL-10和TGF-β水平降低,脾脏内Th17细胞比例升高,Treg比例降低,脊髓组织内RORγt蛋白表达上调,Foxp3蛋白表达下调(P<0.05);与EAE组比较,EAE+FcγRⅡB组小鼠体质量增加,神经功能评分降低,脑组织内炎症细胞浸润减轻,脊髓脱髓鞘现象得到改善,NeuN荧光表达强度增强,Caspase-3荧光表达强度减弱,TUNEL阳性着色细胞较少,细胞凋亡数减少,血清中IL-6和IL-17水平降低,而IL-10和TGF-β水平升高,同时脾脏内Th17细胞比例降低,Treg比例升高,脊髓组织内RORγt蛋白表达下调而Foxp3蛋白表达上调(P<0.05)。结论:FcγRⅡB对EAE小鼠具有神经保护作用,可减轻其脑组织炎症细胞浸润及脱髓鞘现象,作用机制可能与调节细胞因子水平及Th17/Treg细胞免疫平衡有关。

HIF-1α介导Th17细胞/调节性T细胞失衡在炎症性自身免疫性疾病中的作用研究进展

辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17细胞/Treg)平衡是机体维持免疫稳态的重要机制,该平衡的失调引起感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等炎症性疾病的发生。研究发现介导Th17细胞/Treg失衡的可能途径之一为炎症环境引起的缺氧诱导因子1α(HIF-1α)水平升高,进而在促进Th17细胞发挥免疫炎症作用的同时,抑制Treg的免疫调节功能。HIF-1α可通过介导Th17细胞/Treg失衡参与系统性红斑狼疮(SLE)和风湿性关节炎(RA)等多种疾病的免疫病理损伤,研究HIF-1α介导Th17细胞/Treg失衡的作用及分子机制是阐明多种炎症性自身免疫性疾病发病机制的重要方向之一。

海珠益肝加味方对自身免疫性肝炎小鼠Th17/Treg平衡与FoxP3/RORγt的影响

目的:研究海珠益肝加味方对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞失衡与维甲酸相关孤核受体γ(ROR-γt)、特异性叉头状转录因子3(FoxP3)的影响。方法:将32只小鼠随机分为正常组、模型组、海珠益肝加味方组、醋酸泼尼松组,每组8只。除正常组外其他组采用刀豆蛋白A(ConA)尾静脉注射制备AIH小鼠模型,造模后采集各组小鼠血液及肝组织。HE染色观察各组肝组织病理表现;采用流式细胞术检测各组Th17和Treg细胞比例。Western Blot检测各组小鼠肝组织中IL-10、IL-17、TGF-β1、FoxP3、ROR-γt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组Th17细胞比例、Th17/Treg均显著上升(P<0.01),Treg细胞比例显著下降(P<0.01);与模型组比较,海珠益肝加味方组及醋酸泼尼松组Th17细胞比例、Th17/Treg均显著降低(P<0.01),Treg细胞比例显著上升(P<0.01)。与空白组比较,模型组IL-10、FoxP3蛋白表达下降,IL-17、TGF-β1、ROR-γt蛋白表达上升(P<0.01)。与模型组相比,海珠益肝加味方及醋酸泼尼松组IL-10、FoxP3表达显著上升,IL-17、TGF-β1、RORγt蛋白表达均显著下降(P<0.01)。结论:海珠益肝加味方可以有效改善Th17/Treg失衡,其机制可能与调节特异性转录因子FoxP3、ROR-γt的表达相关。

基于肠-免疫-皮肤轴研究犀角地黄汤对银屑病小鼠肠道Th17/Treg失衡的影响

目的:探讨犀角地黄汤对银屑病模型小鼠肠道Th17/Treg失衡的影响。方法:将30只BALB/c小鼠在造模成功后随机分为模型组、中药低浓度组、中药中浓度组、中药高浓度组、空白对照组各6只。除空白组外,其余4组均采用背部涂抹5%咪喹莫特乳膏42mg(四川明欣药业有限责任公司,批号110206)建立银屑病模型。模型组与空白对照组每日予以相同剂量的蒸馏水;犀角地黄汤低、中、高浓度分别对应中药治疗的低、中、高三组,浓度为80mg/mL、160mg/mL、320mg/mL,每只小鼠按照0.1mL/10g体重的体积灌胃。1次/d,连续2周。观察银屑病样皮损面积和严重程度PASI评分、小鼠肠系膜淋巴结中IL-23、IL-17及TNF-α细胞因子水平、小鼠粪便中肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌等4种菌在治疗前后的表达情况。结果:与模型组相比,小鼠PASI评分降低,IL-23、IL-17及TNF-α的水平降低,P<0.05,差异有统计学意义;模型组小鼠相对于空白组乳酸杆菌、双歧杆菌数目减少,肠球菌及肠杆菌数增多;犀角地黄各剂量组乳酸杆菌、双歧杆菌数明显少于模型组(P<0.05),肠球菌、肠杆菌数明显多于模型组(P<0.05)。结论:犀角地黄汤可以降低银屑病小鼠肠系膜中IL-23、IL-17及TNF-α的水平,改善小鼠皮损的炎症反应及肠道菌群结构。

强直性脊柱炎患者外周血TLR4、JAK3基因表达与Th17/Treg失衡的关系

目的探究强直性脊柱炎患者外周血中Toll样受体4(TLR4)、Janus蛋白酪氨酸激酶3(JAK3)基因表达与辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法101例AS患者(AS组)按照AS疾病活动指数(BASDAI)评分分为AS稳定期(ASS)组(<4分)42例、AS活动期(ASA)组(≥4分)59例,另选同期于本院体检健康者为健康组50例。荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4、JAK3 mRNA表达,检测血清Th17、Treg细胞比例,并计算Th17/Treg比值。结果AS组外周血PBMC中TLR4 mRNA、JAK3 mRNA表达高于健康组(P<0.05)。AS组外周血Th17比例及Th17/Treg高于健康组,Treg比例低于健康组(P<0.05)。较高水平TLR4 mRNA、JAK3 mRNA及Th17为AS的危险因素,较高水平Treg为AS保护因素。AS患者TLR4 mRNA、JAK3 mRNA分别与Th17比例及Th17/Treg呈正相关,与Treg比例呈负相关(P<0.05)。结论AS患者PBMC中TLR4、JAK3基因呈高表达且Th17/Treg呈失衡状态,TLR4、JAK3基因高表达与AS患者Th17/Treg失衡密切相关。

肠道微生物、Th17细胞和Treg细胞影响自身免疫性肝炎的研究进展

自身免疫性肝炎(AIH)是一种以T细胞介导为主的慢性炎症性肝脏疾病,其特征是血清转氨酶水平升高、高免疫球蛋白血症、血清中存在与肝脏有关的自身抗体以及界面型肝炎等典型组织学改变^([1])。AIH以女性多见,其患病率呈上升趋势^([2])。

积雪草酸调控白细胞介素-6/信号转导子和转录激活子3/核转录因子-κB通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨积雪草酸调控白细胞介素(IL)-6/信号转导子和转录激活子3(STAT3)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发来制备哮喘小鼠模型,随机分为模型组、积雪草酸低剂量组(54 mg/kg)、积雪草酸高剂量组(108 mg/kg)、积雪草酸高剂量(108 mg/kg)+Colivelin(IL-6/STAT3/NF-κB激活剂,2 mg/kg)组,每组各10只。另选10只小鼠在致敏和激发阶段给予等剂量生理盐水设为对照组,用积雪草酸和Colivelin分组处理各组小鼠后检测其肺组织病理形态,肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数,外周血Treg/Th17,BALF和血清中Treg、Th17细胞分泌因子水平,肺组织IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生明显病理损伤,外周血Treg细胞占比和Treg/Th17,BALF和血清IL-10、IL-35水平降低(P<0.05)。肺部炎症评分,BALF中白细胞计数与嗜酸粒细胞计数,外周血Th17细胞占比,BALF和血清IL-17、IL-6水平,肺组织IL-6蛋白表达与p-STAT3/STAT3、p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。低、高剂量积雪草酸可逆转哮喘模型小鼠上述病理变化,且高剂量积雪草酸作用更强。Colivelin可减弱积雪草酸对哮喘模型小鼠上述病理变化的作用。结论:积雪草酸可通过减弱IL-6表达与STAT3、NF-κB的磷酸化,抑制哮喘小鼠炎症细胞及炎症因子产生,从而减轻气道炎症及肺组织损伤,改善肺功能。