牦牛TRIB3基因克隆、生物信息学及组织表达差异分析

旨在克隆牦牛毛球族同源蛋白3(TRIB3)基因并进行生物信息学分析,检测其在牦牛各组织中的表达情况,为后续探究该基因在牦牛中的功能提供理论依据。试验采集牦牛乳腺组织并以其cDNA为模板,克隆牦牛TRIB3基因序列,通过生物信息学分析了解其生物学特征和结构,运用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测TRIB3基因在牦牛心脏、肝脏、肺脏、骨骼肌、乳腺及脂肪组织中的表达情况。结果显示:牦牛TRIB3基因CDS区全长为1074 bp,共编码357个氨基酸,为不稳定性亲水蛋白;同源性对比结果显示,牦牛TRIB3编码氨基酸与野牦牛的同源性最高;系统进化树显示,野牦牛和野牛与牦牛TRIB3基因亲缘关系最近,最远是小鼠;TRIB3蛋白属于不稳定亲水性蛋白,主要存在于细胞核中,不含信号肽和跨膜结构域;TRIB3蛋白二级结构含有α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲,分别占35.85%、9.52%、448%和50.14%;蛋白互作分析结果显示,TRIB3与组成型光形态建成蛋白1(COP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPβ)、激活转录因子3(ATF3)、DNA损伤诱导转录因子3(DDIT3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)、AKT3和Twist相关蛋白1(TWIST1)之间均有紧密联系。RT-qPCR检测发现TRIB3基因在牦牛的不同组织中均有表达,乳腺组织中的表达量最高。研究结果为进一步探究TRIB3基因在牦牛乳腺中的作用和其生物功能提供一定的理论数据。

Trib3基因在大鼠睾丸组织不同发育时期的表达研究

目的研究Trib3基因在大鼠睾丸组织不同发育时期的表达。方法用RT-PCR、Western Blot、免疫组化等方法分别观察Trib3基因在大鼠精子生成过程中的表达情况。结果mRNA表达量在野生型大鼠出生后2~12 d较高,4 d达到高峰;14~16日龄与2~12日龄间差异无统计学意义(P>0.05);20~35日龄与14~16日龄比较,表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);40~65日龄与20~35日龄比较,表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Trib3蛋白在2~12日龄呈现较高表达;14~16日龄与2~12日龄比较,表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);20~35日龄与14~16日龄间Trib3表达量差异无统计学意义(P>0.05);40~65日龄与20~35日龄比较,表达量显著升高(P<0.05)。免疫组化结果可见Trib3主要表达于睾丸精原干细胞胞质部分及部分睾丸间质。结论Trib3基因可能参与了大鼠精原干细胞的增殖过程。

TRIB3基因rs2295490多态性与2型糖尿病合并冠心病的相关性

目的探讨TRIB3基因rs2295490多态性与2型糖尿病(T2DM)和T2DM合并冠心病(CHD)的关系。方法用基因测序方法对126例健康对照组、101例T2DM组、94例T2DM合并CHD组TRIB3基因rs2295490多态性进行分型,同时对其生化指标如空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(Hb A1c)等进行检测。结果 3组间TRIB3基因rs2295490多态性基因型和等位基因分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。健康对照组中AA基因型TG水平明显低于AG+GG基因型(P<0.05);T2DM组中AA基因型TC与TG水平明显低于AG+GG基因型(P<0.05);T2DM+CHD组AA基因型TC、TG、LDL-C水平明显低于AG+GG基因型(P<0.05),AA基因型HDL-C水平明显高于AG+GG基因型(P<0.05)。结论 TRIB3基因rs2295490多态性与T2DM合并CHD无明显关联,但可能与T2DM及T2DM并发CHD患者的血脂异常有关。

应用CRISPR/Cas9技术敲除Trib3基因大鼠的基因型鉴定

目的:构建Trib3基因敲除大鼠模型及基因型鉴定。方法:靶向敲除大鼠Trib3基因后,通过基因测序和PCR技术对大鼠Trib3基因的第3号外显子删除情况进行检测与基因型鉴定。结果:得到阳性F0代首建大鼠Trib3^(-/+),通过自交得到F1与F2代大鼠,筛选出F2代Trib3^(-/-)大鼠。结论:成功制备Trib3基因敲除大鼠模型,依次鉴定出Trib3^(-/-)、Trib3^(-/+)和Trib3^(+/+)大鼠,并可以稳定遗传,为后续的实验开展提供理论依据。

中药桃仁对糖尿病大血管纤维化大鼠TRIB3基因及Toll样受体信号通路的影响

目的:观察糖尿病大血管纤维化大鼠模型中TRIB3 mRNA及Toll样受体信号通路表达及中药桃仁的影响。方法:雄性SD大鼠200只,随机选30只为空白组,余170只造糖尿病鼠模型,成功后随机选取40只为早期干预组,予桃仁颗粒剂水溶液10mL·kg-1·d-1灌胃,余进行糖尿病大血管纤维化造模,成模后分组:模型对照组、高剂量组、低剂量组;分别给予0.9%氯化钠溶液10mL·kg-1·d-1、桃仁颗粒剂水溶液20mL·kg-1·d-1和10mL·kg-1·d-1灌胃。干预第1、3、7周处死大鼠,检测TRIB3 mRNA及TLR4表达情况。结果:与模型对照组比较,第1、3、7周早期干预组TRIB3 mRNA及TLR4表达降低(P<0.05,P<0.01),第7周低剂量组、高剂量组TRIB3mRNA表达下降(P<0.05,P<0.01),第3、7周,低剂量组、高剂量组TLR4表达降低(P<0.01)。结论:TRIB3基因、TLR4和糖尿病大血管纤维化之间存在密切关系,桃仁可降低TRIB3 mRNA及Toll样受体信号通路表达。