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Th17 Cells Influence Intestinal Muscle Contraction during Trichinella spiralis Infection 被引量:1
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作者 付妤 王文峰 +4 位作者 童晶晶 潘琦 龙艳芹 钱伟 侯晓华 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2009年第4期481-485,共5页
Trichinella spiralis infection in rodents is a well-known model of intestinal inflammation associated with hypermotility. The aim of the study was to use this experimental model to elucidate if Thl 7 cells are involve... Trichinella spiralis infection in rodents is a well-known model of intestinal inflammation associated with hypermotility. The aim of the study was to use this experimental model to elucidate if Thl 7 cells are involved in the development of gastrointestinal hypermotility. Colonic smooth muscle contractility was investigated in response to acetylcholine. The levels of IL-17, IL-23 and TGF-β1 in colon were measured by Western blotting. Flow cytometric detection of intracellular IFN-7/IL-4/ IL- 17 cytokine production was used to analyze the proportions of CD4+ T cells subsets in colon. Our results showed that colonic muscle contractility was increased 2 weeks post infection (PI) and stayed high 12 weeks PI when no discernible inflammation was present in the gut. The proportion of Th17 cells and the expression of IL-17 were up-regulated in colon 2 weeks PI and returned to normal 8 weeks PI. The content of IL-17 was correlated with the colonic smooth muscle hypercontracility 2 weeks PI. Meanwhile, TGF-β1 was increased 2 weeks PI, while IL-23 was normal. Our results suggest that Th17 cells affect the colonic muscle contractility in mice infected with Trichinella spiralis at intestine stage but not at muscle stage and the effect of Th17 cells on muscle contractility might be induced by TGF-β1. Other cytokines might be involved in the hypercontracility of colonic smooth muscle at muscle stage. 展开更多
关键词 Th 17 IL-23 TGF-Β1 trichinella spiralis intestine contractility
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Preliminary study of immunodiagnosis of trichinosis by ELISA using urea-soluble antigen of Trichinella spiralis
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作者 张津利 赖福春 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1991年第1期84-87,92,共5页
Urea-soluble antigens of Trichinella spiralis infected larva were preparedand the efficiency of the antigens in diagnosis of trichinosis by ELISA wasstudied.Specific IgG antibodies were detected by ELISA using urea-so... Urea-soluble antigens of Trichinella spiralis infected larva were preparedand the efficiency of the antigens in diagnosis of trichinosis by ELISA wasstudied.Specific IgG antibodies were detected by ELISA using urea-solubleantigens in 91.67% (22/24) of 24 serum samples taken from patients withtrichinosis and 91.67% (11/12) of 12 blood spots on filter paper.Specific IgMantibodies were seen in 95.24% (20/21) of 21 serum samples from patients withtrichinosis using the antigens.Sera of patients infected with Schistosoma japonicumhad some cross teactions to the antigens,but the sera of mice infected withSchistosoma japoni(?) Ancylostoma caninum larva and Plasmodium yoelti were allnegative in the test. 展开更多
关键词 TRICHINOSIS FLISA ANTIGENS trichinella spiralis
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RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM(RFLP) ANALYSIS OF GENOMIC DNA OF 5 STRAINS OF TRICHINELLA SPIRALIS IN CHINA
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作者 王虹 张月清 +1 位作者 劳为德 吴赵永 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1995年第3期131-135,共5页
Five restriction endonucleases were used to digest genomic DNA from 5 isolates of Trichinella spiralis obtained from Changchun, Tianjin, Xian, Henan and Yunnan. All the isolates were secured from pigs except the Chang... Five restriction endonucleases were used to digest genomic DNA from 5 isolates of Trichinella spiralis obtained from Changchun, Tianjin, Xian, Henan and Yunnan. All the isolates were secured from pigs except the Changchun strain which came from dog. The DNA fragments digested by endonuclease were separated by agarose gel electrophoresis. The Changchun isolate had a EcoRI band at 1. 12kb and a DraI band at 1. 97kb which were unique to this isolate. A cloned specific repetitive DNA sequence (1. 12kb) from the Changchun strain was selected to prepare a probe for the Southern blotting of EcoRI restriction DNA fragments for the 5 isolates. The 1.12kb hybridizing band did not appear except in the Changchun isolate.These results seem to indicate that there are differences between the isolates obtained from hosts in different geographical regions. 展开更多
关键词 trichinella restriction fragment length polymorphisms Southern blot
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Phenotypic Characterization of the Response to Infection with <i>Trichinella spiralis</i>in Genetically Defined Mouse Lines of the CBi-IGE Stock
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作者 María D. Vasconi Griselda Bertorini +3 位作者 Ana V. Codina Paula Indelman Ricardo J. Di Masso Lucila I. Hinrichsen 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2015年第5期111-122,共12页
Trichinella spiralis (T. spiralis), which is a cosmopolitan nematode that infects humans among other species, presents a complex host-parasite relationship that hinders the development of tools to eradicate the parasi... Trichinella spiralis (T. spiralis), which is a cosmopolitan nematode that infects humans among other species, presents a complex host-parasite relationship that hinders the development of tools to eradicate the parasitosis. The aim of this research was to analyze the host response during a primary infection with T. spiralis in five genetically different mouse lines of the CBi-IGE stock. Adult males from the CBi+, CBi&minus;, CBi, CBi/L and CBi/C lines were infected with 1, 2 or 4 L1 larvae per g of body weight. In the chronic stage, the number of parasites per g of tissue (relative larval load, rLL) showed a significant host genotype-dose interaction, since it did not increase in the same way in the five genotypes. At the lowest dose, both CBii&minus;and CBi/L mice were resistant while CBi+, CBi/C, and CBi were susceptible. At the highest dose, only CBi/L remained resistant, and CBi+ was the most susceptible. The reproductive capacity index of adult worms (RCI = rLL/infective dose) evinced only a genotype effect, allowing rating each line as resistant or susceptible regardless of dose. Animals receiving 2 L1 larvae were also sacrificed in the intestinal phase (6 and 13 days p-i) to determine the number of adult parasites (nAP) recovered in a small intestine segment, and female fecundity (Ff). No differences in nAP were observed among genotypes on day 6 p-i. nAP decreased between days 6 and 13 p-i, this reduction being different among genotypes and significant only in CBi/L and CBi/C. Ff decreased in CBi/L and CBi/C on day 13 p-i. At the time of infection, serum cytokine baseline values showed a Th1 orientation for genotype CBi/L (high IFN-γ and IL-2) and a Th2 for CBi+ (high IL-4 and IL-10).The variability in the response observed in this murine model suggests its potential usefulness to gain insight into the mechanisms that regulate host-parasite relationship. 展开更多
关键词 Host Genotype-Parasite Relationship Gastrointestinal NEMATODE trichinella spiralis Infectivity Resistance
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Analysis of Diagnostic Efficiency of Excretory-Secretory Antigens for <i>Trichinella spiralis</i>and <i>Trichinella nativa</i>in ELISA
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作者 Irina Odoevskaya Sergey Movsesyan +1 位作者 Mikhail Voronin Nataya Chiljuta 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2014年第9期183-189,共7页
The comparative studies of diagnostic efficiency of excretory-secretory antigens of Trichinella spiralis and Trichinella nativa were performed using blood sera of rats from Wistar line experimentally infected with Arc... The comparative studies of diagnostic efficiency of excretory-secretory antigens of Trichinella spiralis and Trichinella nativa were performed using blood sera of rats from Wistar line experimentally infected with Arctic trichinellae. For animal infection and antigen preparation Trichinella from muscles of wild carnivorous mammals from Arctic regions of Russia were used. When antigen from T. nativa larvae was used to analyze titers of sera of rats experimentally infected with Arctic Trichinella, a significant increase in efficacy ofELISAwas detected. E.g., sera of rats infected with trichinellae from ringed seals retained in ELISA with T. nativa antigen values higher than diagnostic level at titers of 1:6400 - 1:12800, while titer of those same sera when using T. spiralis antigen was no higher than 1:200 - 1:400. 展开更多
关键词 ELISA trichinella nativa Diagnostic Efficiency Laboratory Infection Wistar Rats Blood SERA Excretory-Secretory Antigen
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旋毛虫钙网蛋白对小鼠巨噬细胞和大鼠PBMC免疫功能的影响 被引量:1
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作者 张朝莹 文兆海 +6 位作者 张玥 李嫄 徐立新 陆明敏 宋小凯 李祥瑞 严若峰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
[目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT)进行Western Blot验证;将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育,检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响;将rTsCRT... [目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT)进行Western Blot验证;将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育,检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响;将rTsCRT与大鼠外周血单核细胞(PBMC)共孵育,检测该蛋白对大鼠PBMC转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western blot结果显示,rTsCRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别;rTsCRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌,抑制小鼠巨噬细胞的凋亡;rTsCRT下调大鼠PBMC转录因子T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平,上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平;rTsCRT上调大鼠PBMC细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22的转录水平,下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应,抑制Th2和Tfh免疫,对宿主免疫调节作用复杂。 展开更多
关键词 旋毛虫 钙网蛋白 巨噬细胞 PBMC 免疫调节
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旋毛虫在感染肠道期诱导宿主免疫排虫反应的研究进展
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作者 朱祉聿 王楠 杨桂连 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第6期27-31,共5页
旋毛虫病是一种以旋毛虫(Trichinella spiralis)为病原的人畜共患寄生虫病。旋毛虫主要侵袭宿主的肠道和肌肉组织,其中旋毛虫感染肠道期指旋毛虫成虫期,该期是旋毛虫侵袭宿主的关键阶段,决定了旋毛虫在宿主体内生活史的完整性。旋毛虫... 旋毛虫病是一种以旋毛虫(Trichinella spiralis)为病原的人畜共患寄生虫病。旋毛虫主要侵袭宿主的肠道和肌肉组织,其中旋毛虫感染肠道期指旋毛虫成虫期,该期是旋毛虫侵袭宿主的关键阶段,决定了旋毛虫在宿主体内生活史的完整性。旋毛虫在宿主肠道的寄生会引发机体肠道损伤,机体通过排虫反应将其排出体外。排虫反应是多种因素相互调节的结果,即通过宿主肠道上皮细胞分泌黏蛋白和增加肠道平滑肌蠕动收缩能力来促进肠道上皮细胞中旋毛虫的排出,二者受体液免疫与细胞免疫的共同调节。笔者从宿主感染旋毛虫后发生的肠道病变、分泌黏蛋白、肠道平滑肌收缩能力增强和免疫调节方面进行综述,旨在为旋毛虫感染肠道期的排虫机制研究提供思路。 展开更多
关键词 旋毛虫 肠道期 排虫反应 黏蛋白 免疫调节
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旋毛虫副肌球蛋白缓解慢性炎症性肠病的初步研究
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作者 吴安琪 骆泽妮 +3 位作者 江垚 汪志锴 诸欣平 孙希萌 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期891-899,共9页
目的本研究旨在观察旋毛虫副肌球蛋白(Trichinella spiralis paramyosin,Ts Pmy)对于慢性结肠炎的影响。方法首先制备Ts Pmy蛋白,并通过初始T细胞诱导的方法在Rag1 KO小鼠中构建慢性结肠炎模型。随后将Rag1 KO小鼠采用随机数字表法分为3... 目的本研究旨在观察旋毛虫副肌球蛋白(Trichinella spiralis paramyosin,Ts Pmy)对于慢性结肠炎的影响。方法首先制备Ts Pmy蛋白,并通过初始T细胞诱导的方法在Rag1 KO小鼠中构建慢性结肠炎模型。随后将Rag1 KO小鼠采用随机数字表法分为3组:接受CD4^(+)Foxp3^(-)CD45RB hi T细胞与Ts Pmy共处理的小鼠组、接受CD4^(+)Foxp3^(-)CD45RB hi T细胞与磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)共处理的对照组,以及未经处理的Rag1 KO小鼠组。对小鼠进行腹腔内Ts Pmy预处理,并对其临床症状以及结肠缩短情况进行评估。通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)法观察结肠组织以评估炎症情况。此外,通过流式细胞术分析结肠固有层免疫细胞中的辅助性T细胞1(T helper 1 cell,Th1)和辅助性T细胞17(T helper 17 cell,Th17)细胞比例,以及肠道中特异性CD103^(+)耐受性树突状细胞(dendritic cell,DC)的比例。结果Ts Pmy能显著减轻小鼠的体质量下降、疾病活动指数、结肠组织的病理损害以及结肠固有层中炎性Th1和Th17细胞的比例,同时能增加耐受性CD103^(+)DC的丰度。结论Ts Pmy可能通过增加CD103^(+)DC的数量并减少Th1和Th17细胞的比例来缓解慢性结肠炎,显示其具有作为潜在治疗慢性结肠炎的候选分子的可能性。 展开更多
关键词 旋毛虫副肌球蛋白 免疫机制 慢性结肠炎 CD103^(+)耐受性树突状细胞
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旋毛虫免疫逃避机制的研究进展
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作者 钱艳红 宋帅 +4 位作者 温肖会 贾春玲 吕殿红 袁子国 罗胜军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期70-75,共6页
旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清... 旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种全球分布的食源性人兽共患寄生虫病,对动物生产和人兽公共卫生安全造成严重危害。旋毛虫发育史复杂,整个生命周期都在同一宿主体内完成,为了能与宿主相互共存,其进化出各种免疫逃避机制来躲避宿主的免疫清除,从而建立长期的慢性感染。本研究从旋毛虫抗原变异、对宿主的免疫调节作用和通过形成包囊产生免疫隔离3个方面,对其免疫逃避机制进行阐述,将为深入了解旋毛虫的致病机制提供重要帮助。 展开更多
关键词 旋毛虫 感染 免疫逃避
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猪旋毛虫抗体管式化学发光免疫分析检测方法的建立与应用
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作者 钱艳红 宋帅 +5 位作者 温肖会 牛瑞辉 杨燕秋 郑博彬 袁子国 罗胜军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期4578-4588,共11页
【背景】旋毛虫(Trichinella spiralis)是一种食源性人兽共患寄生线虫,被列为世界七大食源性寄生虫,在家畜中,旋毛虫主要感染猪,并且能够通过猪肉及副产品传播给人类,不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失,而且严重危害人类健康... 【背景】旋毛虫(Trichinella spiralis)是一种食源性人兽共患寄生线虫,被列为世界七大食源性寄生虫,在家畜中,旋毛虫主要感染猪,并且能够通过猪肉及副产品传播给人类,不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失,而且严重危害人类健康和公共卫生安全。【目的】建立一种灵敏度高,特异性强,快速自动化的猪旋毛虫血清学检测方法,为阻止人兽共患寄生虫病的传播提供帮助。【方法】利用基因克隆和原核表达技术构建原核表达载体,通过诱导表达获得旋毛虫14-3-3重组蛋白,并验证其反应原性。用制备的重组蛋白包被磁性微粒,以此为检测抗原建立化学发光免疫分析方法,并对建立的方法进行条件优化。最后对优化后的方法进行临界值的界定及特异性、敏感性和重复性的确定;通过对来自广东省和贵州省不同养猪场的1000份猪临床血清样本进行检测,评估该检测方法的实用性及符合率。【结果】成功表达并纯化出Ts14-3-3重组蛋白,该蛋白能特异性识别猪旋毛虫阳性血清中的抗体。建立的检测方法经过优化,结合缓冲液最佳pH为5,Ts14-3-3重组蛋白最佳包被量为5μg·mg^(-1)-beads,活化剂最佳使用量为50μg·mg^(-1)-beads,1%BSA封闭效果最好,酶标二抗最佳稀释度为1﹕40000,最佳反应时间为10 min,待检样本最佳孵育时间为5 min,最佳酶促反应时间为2 min。最后经过评估,该检测方法的临界化学发光值为374185 RLU,与猪弓形虫、猪球虫、猪结肠小袋纤毛虫、猪繁殖与呼吸综合征、经典猪瘟、猪伪狂犬和猪口蹄疫抗体均无交叉反应,该检测方法与现有ELISA检测方法相比敏感性更高,批内和批间重复性均小于10%,检测的1000份临床猪血清样本中旋毛虫抗体阳性率为0.6%,与市售ELISA试剂盒检出总符合率为98.18%。【结论】成功建立了猪旋毛虫抗体管式化学发光免疫分析检测方法,该检测方法特异性强,稳定性好,与ELISA方法相比更灵敏,快速,临床检测符合率高。 展开更多
关键词 旋毛虫 血清学诊断 Ts14-3-3 原核表达 管式化学发光免疫分析
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旋毛虫病疫苗研究进展
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作者 杨承鑫 孙希萌 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2024年第1期46-52,共7页
旋毛虫病是一种由旋毛虫感染而引起的人兽共患病,人因食入生的或未煮熟肉类而患病。该病在世界上广泛分布,从发现至今已有188年的历史。通过肉类制品的传播可能导致旋毛虫病的暴发,从而产生更广泛的社会影响。本文通过梳理近10年的文献... 旋毛虫病是一种由旋毛虫感染而引起的人兽共患病,人因食入生的或未煮熟肉类而患病。该病在世界上广泛分布,从发现至今已有188年的历史。通过肉类制品的传播可能导致旋毛虫病的暴发,从而产生更广泛的社会影响。本文通过梳理近10年的文献,综合分析旋毛虫病疫苗研究进展,为基于疫苗的旋毛虫病防控工作提供参考。 展开更多
关键词 旋毛虫 旋毛虫病 疫苗 防治
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旋毛虫粪口传播途径的研究
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作者 尹雪宇 张珊珊 +2 位作者 张莉 李海龙 董玲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期544-547,563,共5页
目的了解旋毛虫粪口传播途径的可行性及粪便中旋毛虫幼虫的感染力。方法试验将6只Wistar大鼠分别一次性感染4000条旋毛虫幼虫,于0、4、8、12、16、24和48 h收集3只大鼠(A组)粪便,分别分成4份于室温下保存0、24、48和72 h,显微镜下计数... 目的了解旋毛虫粪口传播途径的可行性及粪便中旋毛虫幼虫的感染力。方法试验将6只Wistar大鼠分别一次性感染4000条旋毛虫幼虫,于0、4、8、12、16、24和48 h收集3只大鼠(A组)粪便,分别分成4份于室温下保存0、24、48和72 h,显微镜下计数粪便中幼虫数量,将每份含有旋毛虫幼虫的粪便喂给5只昆明小鼠,42 d后处死小鼠,计数幼虫数并计算生殖力指数(RCI);另外3只大鼠(B组)在感染后1~23 d收集粪便,提取DNA,通过PCR扩增旋毛虫线粒体atp6基因。结果A组大鼠感染旋毛虫幼虫后4~16 h排出幼虫,8 h排虫量达高峰,24 h及以后粪便中无旋毛虫幼虫。大鼠感染4、8、12、16 h后粪便中旋毛虫幼虫总数分别为350、400、145、40条。感染后4 h收集的大鼠粪便室温保存0、24、48 h后RCI分别为112.5、20.5、2;8 h收集的大鼠粪便室温保存0 h、24 h后RCI为66.7、9;12 h采集的大鼠粪便室温保存0和24 h后RCI为13.3和5;16 h收集的大鼠粪便室温保存0 h后RCI为10。B组大鼠中2只连续18 d扩增出旋毛虫线粒体atp6基因,1只连续20 d扩增出旋毛虫线粒体atp6基因。结论一次性大量食入旋毛虫幼虫后,可排出具有感染力的旋毛虫幼虫,可通过粪口途径进行传播。PCR可以检测粪便中的旋毛虫线粒体atp6基因,但不能确定旋毛虫是否具有感染力。 展开更多
关键词 旋毛虫 粪口途径 传播 感染力 ATP6
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乳双歧杆菌诱导旋毛虫感染小鼠Th2型免疫应答的研究
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作者 迟茜文 姚梦玮 +2 位作者 解文利 马翔宇 魏洪 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第11期1631-1638,共8页
目的探究不同剂量乳双歧杆菌干预对旋毛虫感染小鼠的淋巴细胞增殖、辅助型T细胞2(Th2)型免疫和肠道损伤的影响。方法用活力良好的旋毛虫灌胃48只小鼠获得感染旋毛虫模型小鼠,随机分为感染组(0.02 mL/g PBS灌胃)、乳双歧杆菌(高、中、低... 目的探究不同剂量乳双歧杆菌干预对旋毛虫感染小鼠的淋巴细胞增殖、辅助型T细胞2(Th2)型免疫和肠道损伤的影响。方法用活力良好的旋毛虫灌胃48只小鼠获得感染旋毛虫模型小鼠,随机分为感染组(0.02 mL/g PBS灌胃)、乳双歧杆菌(高、中、低)剂量组(乳双歧杆菌浓度分别为1×10^(6)、1×10^(5)、1×10^(4) CFU/L,0.02 mL/g灌胃)连续灌胃30 d;采用噻唑蓝(MTT)法检测第7、14、21、28天各组模型小鼠脾细胞中T淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测小鼠脾脏及肠系膜淋巴结中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞表达水平,苏木精-伊红(HE)染色法对十二指肠组织病理学进行观察。结果与感染组比较,高剂量组、中剂量组脾脏T淋巴细胞的刺激指数(SI)升高(P<0.05);与感染组相比,小鼠脾脏中乳双歧杆菌高剂量组第14、21天脾脏中CD4^(+)T细胞表达升高,第21天乳双歧杆菌高剂量组表达CD8^(+)T细胞降低,小鼠肠系膜淋巴结中乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组CD4^(+)T细胞表达增加(P<0.05);HE结果显示;与感染组比较,乳双歧杆菌高剂量乳双歧杆菌灌胃后第7天和14天炎性细胞浸润减轻,肠绒毛脱落减少。结论一定浓度的乳双歧杆菌能够提高小鼠抗旋毛虫感染的免疫效应,其机制可能与通过诱导小鼠趋向Th2型免疫极化、修复肠道病理损伤有关。 展开更多
关键词 乳双歧杆菌 旋毛虫 T淋巴细胞 淋巴细胞增殖 Th2型免疫 免疫保护
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利用改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA
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作者 郑宝亮 付守申 +5 位作者 郜相君 马辉 郑鸣 赵绪永 郭宏伟 杨向科 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2007年第2期1-2,5,共3页
利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后... 利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后续试验结果显示改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA效果很理想。 展开更多
关键词 trichinella nativa 肌幼虫 总RNA
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我国首次发现乡土旋毛虫的研究报告 被引量:24
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作者 许汴利 崔兆麟 +2 位作者 张玉林 蔺西萌 夏胜利 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期257-262,共6页
目的 :对我国两株旋毛虫进行虫种归属鉴定。方法 :通过生物学特性的比较研究。结果 :单对虫体杂交试验 ,表明河南猪株与黑龙江犬株存在生殖隔离现象 ;冷冻耐力试验 ,在 - 15℃下 ,前者 9d即死亡 ,后者可存活 1年以上 ;在 4℃ ,前者肌肉... 目的 :对我国两株旋毛虫进行虫种归属鉴定。方法 :通过生物学特性的比较研究。结果 :单对虫体杂交试验 ,表明河南猪株与黑龙江犬株存在生殖隔离现象 ;冷冻耐力试验 ,在 - 15℃下 ,前者 9d即死亡 ,后者可存活 1年以上 ;在 4℃ ,前者肌肉期幼虫呈圆盘状卷曲 ,后者呈螺旋状卷曲 ;生殖力指数 ( RCI)在小鼠试验分别为 195.7和 6.2 ( P<0 .0 1) ,在大鼠分别为 191.3和 14.4 ( P<0 .0 1) ;前者对家猪易感 ,后者不易感 ;随机扩增多态性 DNA指纹分析其扩增后产物的 DNA片段电泳带型 ,河南猪株旋毛虫与 T.spiralis基本相同 ,黑龙江犬株旋毛虫与 T.nativa一致。结论 :我国至少存在上述两种旋毛虫 ,即 :河南猪株旋毛虫系 T.spiralis,黑龙江犬株旋毛虫系 T.nativa。 展开更多
关键词 旋毛虫 乡土旋毛虫 多态性 DNA 生殖力 冷冻耐力
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旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选 被引量:17
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作者 吴秀萍 付宝权 +5 位作者 刘明远 张亚兰 原丽红 李莲瑞 卢强 Pascal Boireau 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期235-239,共5页
目的 获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。 方法 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。 结果 从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8... 目的 获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。 方法 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。 结果 从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8个阳性克隆。序列分析结果表明 ,其中有 3 6个新的cDNA序列 ,已报道的序列有 5个 ,有 12个序列无开放阅读框架 (ORF) ,与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。 展开更多
关键词 旋毛虫感染 新生 免疫筛选 CDNA文库 抗原性 抗体 开放阅读框架 幼虫 猪血清 线粒体基因组
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旋毛虫成虫cDNA文库免疫筛选及序列分析 被引量:21
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作者 杨雅平 诸欣平 +2 位作者 杨静 周蕾 黄松 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期270-273,共4页
目的 为获得旋毛虫成虫抗原基因。 方法 应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。 结果 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9... 目的 为获得旋毛虫成虫抗原基因。 方法 应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。 结果 免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9个阳性克隆。对其中的Ts87进行测序 ,又采用 5′ RACE ,获取全长为 1172bp的cDNA片段 ,该基因编码 3 47个氨基酸。序列分析表明 ,克隆Ts87是个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,存在预测的抗原表位。 结论 获得具有抗原性的旋毛虫抗原新基因。 展开更多
关键词 旋毛虫 成虫 CDNA文库 免疫筛选 序列分析 抗原基因
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旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库的构建及其初步筛选 被引量:14
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作者 刘明远 黎诚耀 +6 位作者 吴秀萍 JFFabien 付宝权 CTrap 卢强 张西臣 PBoireau 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期355-358,共4页
利用差减杂交 (减法杂交 ,subtractive hybridization)技术 ,以旋毛虫新生幼虫 ( newborn larvae,NBL)的 c DNA作为试验方 ( tester) ,以肌幼虫 +成虫的 c DNA作为驱动方 ( driver) ,制备新生幼虫差减 c DNA;利用 T载体构建 NBL差减 c ... 利用差减杂交 (减法杂交 ,subtractive hybridization)技术 ,以旋毛虫新生幼虫 ( newborn larvae,NBL)的 c DNA作为试验方 ( tester) ,以肌幼虫 +成虫的 c DNA作为驱动方 ( driver) ,制备新生幼虫差减 c DNA;利用 T载体构建 NBL差减 c DNA文库 ,获克隆株 90个。以试验方的差减 c DNA第 2次 PCR产物 +未差减c DNA为试验方探针 ,以驱动方的差减 c DNA第 2次 PCR产物 +未差减 c DNA为驱动方探针 ,在 NBL差减c DNA文库中初筛 NBL的期特异性克隆 ,获初筛克隆 2 4个。这些初筛期特异性克隆进一步用 Southern blot确认鉴定 ,获真阳性期特异性克隆 2个 ( NBL SSC1 ,NBL SSC2 )。DNASIS以及 Blaster的分析结果显示 ,这2个克隆为旋毛虫的 2个新基因 ,其中 NBL SSC1编码糖蛋白 ,NBL SSC2编码丝氨酸蛋白酶。本试验为旋毛虫期特异性基因全长序列的调取、分析。 展开更多
关键词 旋毛虫 新生幼虫 期特异性基因 差减文库 CDNA文库
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旋毛虫虫体蛋白对肝癌细胞H7402的抑制作用 被引量:14
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作者 王学林 杨世杰 +7 位作者 吴秀萍 于申业 叶春艳 邓洪宽 魏征仁 王卫芳 王芯蕊 刘明远 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第5期440-444,共5页
目的:研究旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的抑制作用,确认其对肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法:通过体内、体外培养获得旋毛虫成虫与新生幼虫的混合物,采用匀浆、离心方法制备旋毛虫虫体蛋白,紫外分光光度计检测蛋白浓度。分别设0.035、0.07... 目的:研究旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的抑制作用,确认其对肝癌细胞的抗肿瘤活性。方法:通过体内、体外培养获得旋毛虫成虫与新生幼虫的混合物,采用匀浆、离心方法制备旋毛虫虫体蛋白,紫外分光光度计检测蛋白浓度。分别设0.035、0.070、0.140 mg/ml与H7402细胞作用为实验组,并设虫体蛋白对正常肝细胞HL-7702细胞作用为对照组,采用MTT检测细胞增殖能力,划痕实验、侵袭实验检测旋毛虫虫体蛋白对H7402的迁移及侵袭能力的影响,采用TUNEL法和流式细胞术分析肿瘤细胞凋亡和细胞周期。结果:成功制备了旋毛虫虫体蛋白。0.035、0.070、0.140 mg/ml旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞增殖的抑制率分别为(22.40±13.80)%、(29.45±16.80)%、(39.38±17.80)%。TUNEL实验和流式细胞术可观察到旋毛虫虫体蛋白诱导H7402凋亡,其凋亡率为(39.07±0.90)%,细胞周期阻滞于S期。划痕和侵袭的实验表明旋毛虫虫体蛋白对H7402细胞迁徙能力有抑制作用,对其侵袭的抑制率为(63.79±13.71)%。结论:旋毛虫虫体蛋白对肝癌H7402细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,可能是一个有潜在应用价值的抗肝癌生物制剂。 展开更多
关键词 旋毛虫 抗肿瘤 抗侵袭 抗增殖
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中国旋毛虫分离株成虫和新生幼虫基因文库的构建及筛选 被引量:19
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作者 刘明远 徐克诚 +4 位作者 黎诚耀 柳增善 孙远涛 赵君 郑明光 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期147-150,共4页
利用λZAPⅡ载体构建了中国分离株Trichinelaspiralis及Trichinelanativa成虫和新生幼虫cD-NA基因文库,检测结果表明,所克隆的cDNA片段分布在0.2~2.0kb之间,表明2个cDN... 利用λZAPⅡ载体构建了中国分离株Trichinelaspiralis及Trichinelanativa成虫和新生幼虫cD-NA基因文库,检测结果表明,所克隆的cDNA片段分布在0.2~2.0kb之间,表明2个cDNA基因文库对mRNA的覆盖面很大。利用RAPD技术,以肌幼虫基因文库作对照,采用70个单引物及20对复合引物对以上2个文库进行筛选扩增,结果:(1)共获得2条T.spiralis及4条T.nativa的成虫与新生幼虫特异性基因片段,鉴于成虫与新生幼虫是旋毛虫的2个侵袭性阶段,其所特有的特异性基因片段极有可能就是这2个时期虫体的侵袭性因子基因,即所要寻找的强保护性抗原基因,从而为后续研究奠定了基础;(2)发现1条T.spiralis种特有的基因片段,这一特异性基因片段为虫种鉴定提供了物质条件;(3)发现旋毛虫同种不同分离株(中国分离株及法国分离株)间cDNA文库扩增图谱完全相同。 展开更多
关键词 旋毛虫 成虫 新生幼虫 基因文库
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