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Analysis of Diagnostic Efficiency of Excretory-Secretory Antigens for <i>Trichinella spiralis</i>and <i>Trichinella nativa</i>in ELISA
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作者 Irina Odoevskaya Sergey Movsesyan +1 位作者 Mikhail Voronin Nataya Chiljuta 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2014年第9期183-189,共7页
The comparative studies of diagnostic efficiency of excretory-secretory antigens of Trichinella spiralis and Trichinella nativa were performed using blood sera of rats from Wistar line experimentally infected with Arc... The comparative studies of diagnostic efficiency of excretory-secretory antigens of Trichinella spiralis and Trichinella nativa were performed using blood sera of rats from Wistar line experimentally infected with Arctic trichinellae. For animal infection and antigen preparation Trichinella from muscles of wild carnivorous mammals from Arctic regions of Russia were used. When antigen from T. nativa larvae was used to analyze titers of sera of rats experimentally infected with Arctic Trichinella, a significant increase in efficacy ofELISAwas detected. E.g., sera of rats infected with trichinellae from ringed seals retained in ELISA with T. nativa antigen values higher than diagnostic level at titers of 1:6400 - 1:12800, while titer of those same sera when using T. spiralis antigen was no higher than 1:200 - 1:400. 展开更多
关键词 ELISA trichinella nativa Diagnostic Efficiency Laboratory Infection Wistar Rats Blood SERA Excretory-Secretory Antigen
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我国首次发现乡土旋毛虫的研究报告 被引量:23
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作者 许汴利 崔兆麟 +2 位作者 张玉林 蔺西萌 夏胜利 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期257-262,共6页
目的 :对我国两株旋毛虫进行虫种归属鉴定。方法 :通过生物学特性的比较研究。结果 :单对虫体杂交试验 ,表明河南猪株与黑龙江犬株存在生殖隔离现象 ;冷冻耐力试验 ,在 - 15℃下 ,前者 9d即死亡 ,后者可存活 1年以上 ;在 4℃ ,前者肌肉... 目的 :对我国两株旋毛虫进行虫种归属鉴定。方法 :通过生物学特性的比较研究。结果 :单对虫体杂交试验 ,表明河南猪株与黑龙江犬株存在生殖隔离现象 ;冷冻耐力试验 ,在 - 15℃下 ,前者 9d即死亡 ,后者可存活 1年以上 ;在 4℃ ,前者肌肉期幼虫呈圆盘状卷曲 ,后者呈螺旋状卷曲 ;生殖力指数 ( RCI)在小鼠试验分别为 195.7和 6.2 ( P<0 .0 1) ,在大鼠分别为 191.3和 14.4 ( P<0 .0 1) ;前者对家猪易感 ,后者不易感 ;随机扩增多态性 DNA指纹分析其扩增后产物的 DNA片段电泳带型 ,河南猪株旋毛虫与 T.spiralis基本相同 ,黑龙江犬株旋毛虫与 T.nativa一致。结论 :我国至少存在上述两种旋毛虫 ,即 :河南猪株旋毛虫系 T.spiralis,黑龙江犬株旋毛虫系 T.nativa。 展开更多
关键词 旋毛虫 乡土旋毛虫 多态性 DNA 生殖力 冷冻耐力
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P49重组抗原检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法建立 被引量:6
3
作者 李晓云 路义鑫 +2 位作者 韩彩霞 朱江巍 宋铭忻 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第12期7-9,共3页
以纯化的本地毛形线虫P49排泄分泌(ES)重组蛋白包被微量反应板,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并确定了最适反应参数:抗原包被浓度4μg/mL;血清稀释度1∶100,作用时间90min;酶标二抗稀释度1∶10 000,作用时间60min;最适封闭液为5g/... 以纯化的本地毛形线虫P49排泄分泌(ES)重组蛋白包被微量反应板,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并确定了最适反应参数:抗原包被浓度4μg/mL;血清稀释度1∶100,作用时间90min;酶标二抗稀释度1∶10 000,作用时间60min;最适封闭液为5g/L聚乙烯醇(PVA);最适稀释液为含20g/L PEG6000的PBS;底物最佳显色时间15min。ELISA体系评价结果表明,该方法重复性好,灵敏度高,且可用于不同种株旋毛虫感染的P49血清抗体检测。 展开更多
关键词 本地毛形线虫 P49重组抗原 间接ELISA
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小鼠实验感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化 被引量:7
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作者 王洁 崔晶 王中全 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期266-268,共3页
目的观察小鼠感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化。方法将50只小鼠随机分成5组(每组10只),分别感染旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7),每只感染300条幼虫,感染后1~6周每周尾部静脉采血,... 目的观察小鼠感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化。方法将50只小鼠随机分成5组(每组10只),分别感染旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7),每只感染300条幼虫,感染后1~6周每周尾部静脉采血,6周后每2周尾部静脉采血,至感染后20周,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清中抗旋毛虫IgG抗体水平。结果小鼠感染旋毛虫、乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫后3~5周,血清IgG抗体水平快速升高,至感染后第8周达高峰,此后旋毛虫和乡土旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平缓慢下降,布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平迅速下降;小鼠感染伪旋毛虫后3~5周血清IgG抗体水平快速升高,至第16周达高峰,之后缓慢下降。5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平差异具有显著性(P<0.05)。结论5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平和动态变化不同;旋毛虫肌幼虫ES抗原可用于其他4种旋毛虫(乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫)感染的血清学诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 旋毛虫 乡土旋毛虫 布氏旋毛虫 伪旋毛虫 纳氏旋毛虫 ELISA 排泄分泌抗原 小鼠
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本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达 被引量:2
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作者 郑宝亮 王秀荣 +3 位作者 路义鑫 李冬梅 闫清波 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期510-514,共5页
提取Trichinella nativa(T.nativa)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(T.spiralis)相应... 提取Trichinella nativa(T.nativa)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(T.spiralis)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠T.nativa和T.spiralis阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。 展开更多
关键词 旋毛虫 nativa 旋毛虫 spiralis种 49 KU ES蛋白 基因序列 WESTEM BLOT分析
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本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析 被引量:3
6
作者 袁金钱 路义鑫 +1 位作者 韩彩霞 宋铭忻 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1062-1065,共4页
根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物,用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增了HSP70基因,将目的基因克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ... 根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物,用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增了HSP70基因,将目的基因克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明,成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明,HSP70基因比较保守,不同物种之间氨基酸的同源性在40%~80%。与布氏旋毛虫HSP70序列相比,CDS区多出9个碱基,但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94%,存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。 展开更多
关键词 本地毛形线虫 HSP70基因 序列分析
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本地毛形线虫49ku ES重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究 被引量:1
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作者 韩周 姜曰晓 +3 位作者 李继红 肖文左 宋铭忻 路义鑫 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第2期6-8,共3页
目的研究本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法以表达的本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白免疫小鼠,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条本地毛形线虫感染性肌幼虫,检测本地毛形线虫7日龄成虫数... 目的研究本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法以表达的本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白免疫小鼠,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条本地毛形线虫感染性肌幼虫,检测本地毛形线虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数以及感染35d肌幼虫数,并且计算减虫率,应用自制的ELISA方法测定各组小鼠血清抗体OD值。结果成虫减虫率、新生幼虫减虫率、肌幼虫减虫率分别为9.4%、70.2%和71.3%,免疫组血清抗体水平远远高于佐剂对照组和感染对照组(P<0.01)。结论本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白诱导小鼠产生较好的抗本地毛形线虫的保护性免疫。 展开更多
关键词 本地毛形线虫 重组49 KU ES蛋白 保护性免疫
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本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析
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作者 郑宝亮 边传周 +1 位作者 王秀荣 宋铭忻 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第10期68-71,共4页
为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取T.nativa肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测... 为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取T.nativa肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的T.spiralis相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为T.nativa49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。 展开更多
关键词 本地毛形线虫 旋毛形线虫 49ku排泄分泌蛋白 基因序列
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利用改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA
9
作者 郑宝亮 付守申 +5 位作者 郜相君 马辉 郑鸣 赵绪永 郭宏伟 杨向科 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2007年第2期1-2,5,共3页
利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后... 利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后续试验结果显示改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA效果很理想。 展开更多
关键词 trichinella nativa 肌幼虫 总RNA
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本地毛形线虫49 Ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 姜曰晓 路义鑫 +1 位作者 王君 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期883-886,共4页
采用纯化的本地毛形线虫49KuES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株制备腹水。获得两株稳定分泌抗重组蛋白McAb的杂交瘤细胞株D5和C1。试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为... 采用纯化的本地毛形线虫49KuES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株制备腹水。获得两株稳定分泌抗重组蛋白McAb的杂交瘤细胞株D5和C1。试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为K链;间接ELISA检测细胞培养液上清和腹水效价,结果显示,两株细胞培养液上清均达到1:1.28X10^3,腹水效价均达到1:1.28X10^4;Western blot结果表明,获得的两株McAb均能特异性的识别约49Ku处的ES抗原;间接ELISA结果显示两株McAb与日本血吸虫成虫、猪囊尾蚴囊液、猪蛔虫、猪鞭虫抗原均无交叉反应,表明两株McAb特异性良好。 展开更多
关键词 本地毛形线虫 重组蛋白 杂交瘤 单克隆抗体
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旋毛虫不同地理株冷冻耐力的观察 被引量:1
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作者 李婷婷 毛福荣 +2 位作者 崔晶 李楠 王中全 《中国热带医学》 CAS 2009年第9期1671-1672,1769,共3页
目的观察旋毛虫不同地理株的冷冻耐力。方法将75只雄性昆明小鼠随机分为3组(每组25只),每组分别感染-18℃保存不同时间的旋毛虫河南株、云南株及乡土旋毛虫,每只小鼠经口接种300条肌幼虫。感染后42d剖杀,将全身骨骼肌消化后收集肌幼虫,... 目的观察旋毛虫不同地理株的冷冻耐力。方法将75只雄性昆明小鼠随机分为3组(每组25只),每组分别感染-18℃保存不同时间的旋毛虫河南株、云南株及乡土旋毛虫,每只小鼠经口接种300条肌幼虫。感染后42d剖杀,将全身骨骼肌消化后收集肌幼虫,测定其生殖力指数(Reproductive capacity index,RCI)。结果旋毛虫河南株-18℃保存0、6、12 h后的RCI分别为91.4、0.03及0(χ2=26.453,P<0.05),云南株-18℃保存0、6、12、24 h后的RCI分别为235.6、0.04、0.01及0(χ2=21.115,P<0.05);乡土旋毛虫-18℃保存0、6、12、24、48h后的RCI分别为34.6、26.8、21.9、10.8及7.4(F=8.505,P<0.05)。结论旋毛虫河南株与云南株对低温的抵抗力较低,-18℃分别保存12、24 h感染性已完全丧失;乡土旋毛虫对低温抵抗力较强,-18℃保存48 h仍有较强的感染性。 展开更多
关键词 旋毛虫 乡土旋毛虫 地理株 冷冻耐力 小鼠
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