旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诱导的肠道免疫保护作用研究

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es)。空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7 d注射1次,共3次,末次注射后7 d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染。解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中目的基因mRNA表达水平。结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49%(t=8.109,P<0.05)和67%(t=8.090,P<0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P<0.05)、GATA3(t=2.50,P<0.05)、RORγ-t(t=4.71,P<0.05)、IFN-γ(t=3.17,P<0.05)、IL-4(t=2.60,P<0.05)、IL-5(t=3.05,P<0.05)、IL-17A(t=4.88,P<0.05) mRNA表达量升高,Foxp3表达量没有统计学差异(t=1.55,P>0.05);与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组T-bet(t=4.23,P<0.05)、RORγ-t(t=4.30,P<0.05)、IFN-γ(t=3.02,P<0.05)、IL-17A(t=3.17,P<0.05) mRNA表达量下降;GATA3(t=3.96,P<0.05)、Foxp3(t=2.76,P<0.05)、IL-4(t=5.16,P<0.05)、IL-5(t=3.69,P<0.05)、IL-10(t=2.61,P<0.05) mRNA表达量升高;与空白对照组相比Ts-Es抗原免疫组GATA3(t=6.4,P<0.05)、Foxp3(t=4.32,P<0.05)、IL-10(t=2.6,P<0.05)、IL-4(t=7.26,P<0.05)、IL-5(t=6.3,P<0.05) mRNA表达量升高均有统计学差异;RORγ-t(t=0.41,P>0.05)、T-bet(t=1.02,P>0.05)、IFN-γ(t=0.09,P>0.05)、IL-17A(t=1.80,P>0.05) mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转。结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果。

旋毛虫幼虫在大鼠与小鼠肌肉分布及囊包内幼虫数量的观察

目的观察不同剂量旋毛虫感染大鼠与小鼠后幼虫在肌肉内的分布及囊包内的幼虫数量。方法将30只昆明小鼠和30只SD大鼠均随机分为轻、中、重度感染组(每组10只),分别按每g克体重1、5、20条肌幼虫经口感染。感染后42d剖杀,取不同部位肌肉称重后压片镜检,观察不同部位每克肌肉虫荷(larvaepergram,lpg)及囊包内幼虫数量。结果大鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时分别以膈肌和舌肌虫荷最高;小鼠在轻度感染时以咬肌虫荷最高,中、重度感染时均以膈肌虫荷最高。在大鼠肌肉8028个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.91%、1.95%及0.14%;在小鼠肌肉7559个囊包中,含1、2、3条幼虫的囊包分别占97.33%、2.54%及0.13%。小鼠肌肉多幼虫(2～3条)囊包的检出率明显高于大鼠(χ2=5.644,P<0.05)。多幼虫囊包的检出率在大鼠和小鼠均随感染剂量的增加而升高(χ2大鼠=42.656,P<0.05;χ2小鼠=45.713,P<0.05);在含3条幼虫囊包的肌肉,重度感染的大鼠和小鼠肌肉分别占81.82%(9/11)与100%(10/10)。未发现含有4条及4条以上幼虫的囊包。结论对鼠类旋毛虫感染的流行病学调查时应首选咬肌进行病原学检查,其次为膈肌或舌肌;进行肌肉活检或肉类检疫时发现含3条幼虫的囊包提示为重度感染。

旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究

目的 寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌 (ES)物中的特异性诊断抗原。 方法 应用SDS PAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养 18、3 0h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。 结果 旋毛虫肌幼虫培养 18、3 0h后得到的ES抗原组分大致相同 ,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为 112、110、10 8、97、5 3、49、45、42、3 5、2 3和 16kDa。18hES抗原中的 10 2、97、95和 5 3kDa以及 3 0hES抗原中的 5 3、49、45和 43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的 2 3kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应 ,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。 结论 旋毛虫肌幼虫ES抗原中的 2 3kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原 ,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。

小鼠实验感染不同种旋毛虫后肉汁抗体水平的研究

为了观察小鼠感染不同种旋毛虫后肉汁抗体水平的变化及其与血清抗体水平的相关性,将200只昆明小鼠随机分成4组(每组50只),每只分别感染300条乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7)幼虫,感染后2～6周每组每周随机剖杀10只小鼠,收集血清及肉汁,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清及肉汁中抗体水平;另取40只昆明小鼠随机分成4组(每组10只),每只分别感染500条T2、T3、T4、T7幼虫,感染后6周剖杀,制备肉样,用ELISA检测4℃及-20℃保存不同时间后的肉汁抗旋毛虫抗体动态。T2、T3、T4、T7感染小鼠后的肉汁抗体水平和变化趋势相似,均是在感染后第3周检测出肉汁特异性抗体,抗体阳性率分别为60%、30%、30%、30%,至感染后第4周肉汁抗体阳性率均升至100%。4组小鼠感染后2～6周的肉汁与血清抗体水平均具有相关性。T2、T3、T4、T7感染小鼠肌肉4℃保存7d与1d的肉汁抗体水平相比均无显著性差异;所有的感染小鼠肌肉-20℃保存2个月的肉汁抗体水平与保存1个月的相比均无显著性差异;虽然保存3个月的肉汁抗体水平与保存1个月的相比均已有显著性差异,但抗体阳性率仍均为100%并持续至实验结束时的4个月保存期。结果表明,肉汁中抗旋毛虫抗体的检测可用于新鲜肉、冷藏肉及冷冻肉中乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫检疫的初筛。

旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析

用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。

甲苯咪唑对旋毛虫幼虫及其寄生肌肉的组织学与组织化学观察

目的 观察甲苯咪唑对旋毛虫幼虫及其寄生的骨骼肌的作用。方法 观察沙鼠感染旋毛虫后的幼虫移行期和成囊期经甲苯咪唑治疗 (即感染后 2 0d、5 0d)幼虫及其寄生肌肉组织的组织学和组织化学的变化。结果 甲苯咪唑治疗后幼虫虫体不完整 ,出现空泡 ,5 0d治疗组囊壁结构明显破坏 ;幼虫SDH、NADH -TR、ATPase活性降低 ,LDH活性增高 ,两治疗组肌肉组织SDH、NADH -TR、ATPase均高于相应对照组 ,而LDH活性低于对照组。结论 甲苯咪唑可以破坏旋毛虫囊包的囊壁 ,损伤虫体 ;可抑制旋毛虫幼虫的有氧代谢 ;治疗后肌肉组织有氧代谢增强 ,而无氧糖酵解减弱。

实验感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体水平的研究

目的观察小鼠感染旋毛虫后不同时间肉汁中抗体水平的变化及其与血清抗体水平的相关性。方法将288只昆明小鼠随机分成3组(每组96只):轻度(A组)、中度(B组)及重度(C组)感染组,每鼠分别经口感染100、300、500条旋毛虫幼虫,感染后各组每周或隔周随机剖杀8只小鼠,收集血清和肉汁,用旋毛虫肌幼虫排泄物分泌抗原(ES抗原)ELISA检测血清及肉汁中抗体水平;另取30只小鼠,每鼠感染500条旋毛虫幼虫,感染后6周剖杀,制备肉样,用ELISA检测4℃及-20℃保存不同时间后的肉汁中抗体动态水平。结果轻度、中度和重度感染组小鼠分别在感染后4、3和3周开始从肉汁中检出抗体,抗体阳性率分别为87.5%、50%和87.5%;3组小鼠的肉汁抗体阳性率均随感染后时间的延长而逐渐升高,分别在感染后6、4和4周达100%,抗体水平均在感染后8周达高峰,吸光度(A490值)分别为0.43、0.49及0.52,之后肉汁中抗体水平稍有下降,但感染后第18周抗体阳性率仍均为100%,A490值分别为0.35、0.41及0.46。3组小鼠感染后不同时间肉汁与血清抗体水平均具有相关性(r100=0.940,r300=0.970,r500=0.983,P<0.05)。感染旋毛虫小鼠肉样在4℃保存7d和1d的抗体水平A490值均为0.53(F=0.250,P>0.05)。在-20℃保存8周和1周的肉汁抗体水平A490值分别是0.46和0.50,保存8周的肉汁抗体水平与1周的相比无明显下降(F=2.273,P>0.05);虽然保存10周的肉汁A490值已降至0.43,与保存1周的相比差异有统计学意义(F=15.675,P<0.05),但抗体阳性率仍为100%并持续至实验结束时(保存20周)。结论动物死亡或屠宰后不能采集血清时,可从新鲜、冷藏及冷冻胴体采集肉汁代替血清进行抗旋毛虫抗体的检测。

旋毛虫肌幼虫强反应原性抗原基因的筛选及生物学特性分析

应用感染旋毛虫60 d猪血清为抗体探针,对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行免疫筛选,获得旋毛虫肌幼虫期强反应原性抗原基因,利用生物学信息网站(NCBI、BLAST等)及其相关软件(DNA star等)对获得的基因进行序列分析。结果表明:筛选约2.5×105个重组噬菌体,获得13个阳性克隆,有6个克隆为同一个基因,编码蛋白与染色体结构维持蛋白(SMC蛋白,structural maintenance of chromosome proteins)同源性为48.1%,在免疫筛选中均有较强的反应信号;有3个克隆为同一个已知基因(AAF63473),编码蛋白与丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serine protease inhibitor)同源性为99%,在免疫筛选中反应信号次之;还有2个为同一个基因,与旋毛虫线粒体(Mitochondrion ofTrichinella spiralis)DNA有较高的同源性(同源性为87.7%),编码核糖体大亚基RNA,其他2个为未曾报道过的新基因,编码不同的未知蛋白,这4个克隆在免疫筛选过程中反应信号相对较弱。得到的2个强反应原性的旋毛虫肌幼虫cDNA分子,其中相对信号最强cDNA分子编码SMC蛋白,另一个编码丝氨酸蛋白酶抑制因子,二者有望用于旋毛虫病的诊断候选抗原基因。

旋毛虫肌幼虫在实验感染兔横纹肌内的分布

观察了旋毛虫肌幼虫在实验感染兔横纹肌内的分布 ,在舌肌中荷虫密度最高 ,顺次是咬肌、膈肌、肱三头肌、肩胛肌、肱二头肌、腓肠肌、胸大肌、肋间肌、腰肌 ,心肌中未发现幼虫 ,提示检查兔的舌肌、咬肌或膈肌发现肌幼虫的阳性率高。

免疫层析试纸条检测轻度感染小鼠肉汁抗旋毛虫抗体的研究

目的观察免疫层析试纸条对轻度感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体的检测效果。方法以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备免疫层析试纸条。将70只雄性昆明小鼠随机分为7组（每组10只），每组分别经口感染30、25、20、15、10、5、3条旋毛虫幼虫，感染后6周用试纸条进行血清及肉汁抗体检测，并与ELISA、镜检法及消化法的检测结果进行比较。结果30、25、20、15、10条旋毛虫幼虫感染的小鼠，试纸条与ELISA的血清及肉汁抗体阳性率均为100（10／10）,镜检法与消化法的幼虫检出率均为100％（10／10）。5条旋毛虫感染的10只小鼠，镜检法和消化法的幼虫检出率分别为70％（7／10）和100％（10／10），消化法检查时10只小鼠的每克肌肉虫荷为0．88～3．14条幼虫（平均为1．58条），试纸条与ELISA检测时的血清及肉汁抗体阳性率均为100％（10／10）。3条旋毛虫感染的10只小鼠，4种方法检测时均为阴性。结果表明，试纸条检验肉类中旋毛虫的敏感性与ELISA和消化法相同，且明显高于镜检法（P〈0．05）。低剂量旋毛虫感染小鼠后6周的肉汁抗体水平与感染剂量呈正相关（P〈0．05），肉汁与血清抗体水平均具有相关性（P〈0．05）。结论每克小鼠肌肉仅含0．88条旋毛虫幼虫时也可被试纸条检出，试纸条可用于轻度感染肉类中旋毛虫检疫的初筛。

免疫血清、巨噬细胞及补体对体外培养旋毛虫肌幼虫的杀伤作用

为进一步了解旋毛虫成虫抗原免疫血清在体外对旋毛虫肌幼虫的杀伤情况 ,采用体外培养方法进行了免疫血清、免疫血清与巨噬细胞、免疫血清与巨噬细胞及补体对旋毛虫肌幼虫的杀伤试验。结果显示 :单纯免疫血清对体外培养的旋毛虫肌幼虫无明显杀伤作用 ,而免疫血清与巨噬细胞或免疫血清与巨噬细胞及补体联合对体外培养的旋毛虫肌幼虫均有杀伤作用 。

旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原的保护性免疫研究

目的 比较旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原和肌幼虫抗原接种小鼠诱导产生的保护性免疫。方法 检查肠道成虫、肌幼虫和血液中嗜酸性细胞数 ;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体滴度。 结果 成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的成虫减虫率分别为 82 19%、72 31%和 42 88% ;肌幼虫减虫率分别为 6 8 83%、78 19%和 5 1 96 %。血清IgG抗体滴度明显升高 ,成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原免疫组的GMRT分别为对照组的 7 46倍、5 2 8倍和 4 92倍。血液嗜酸性粒细胞明显增多。结论 旋毛虫成虫抗原、新生幼虫抗原和肌幼虫抗原均可激发特异性体液免疫和细胞免疫 ,诱导小鼠对攻击感染产生保护性。其中 ,成虫抗原和新生幼虫抗原显示出更好的免疫原性 ,而成虫抗原有可能成为较理想的免疫疫苗来源。

ELISA检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体实验条件的研究

目的建立检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法应用棋盘滴定方法,选择适宜的旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原的包被浓度、酶结合物的种类及肉汁稀释液的种类。结果旋毛虫肌幼虫ES抗原的包被浓度为5.0μg/ml。辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗小鼠IgG对感染旋毛虫小鼠血清及肉汁的抗体检出率均为100%(10/10),HRP标记的葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)的检出率均为0(0/10),两者相比其差异有显著性(P<0.05)。对感染旋毛虫的小鼠肉汁分别用磷酸盐缓冲液(PBS)、磷酸盐缓冲液-Tween20(PBS-T)、生理盐水及含3%脱脂奶粉的PBS-T稀释后进行检测,发现含3%脱脂奶粉的PBS-T在各稀释度的P/N值均明显高于其他3种稀释液(P<0.05)。结论建立了检测小鼠肉汁中旋毛虫抗体的ELISA方法,合适的酶结合物为HRP标记的羊抗小鼠IgG,肉样的最佳稀释液为含3%脱脂奶粉的PBS-T,而HRP-SPA不适合于ELISA检测小鼠抗体IgG。

旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响

目的探讨旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响及其作用的可能机制。方法将H446细胞与0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL、1.0mg/mL、1.2 mg/mL虫体蛋白分别培养并设为实验组,不处理的H446细胞设为对照组,采用噻唑兰(MTT)比色法检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞增殖活性的抑制作用;采用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导H446细胞株凋亡的情况;采用Real-timePCR及Western blot法检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1)mRNA及蛋白的表达。结果 MTT比色法结果表明虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性;流式细胞术结果表明虫体蛋白作用于H446细胞24h后,有明显的促凋亡作用;Real-timePCR及Western blot法结果显示,与阴性对照组相比,促凋亡基因Cyt-C和Apaf-1表达均上调。结论旋毛虫肌幼虫虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性,并诱导细胞凋亡,其作用可能与Cyt-C和Apaf-1表达上调有关。

旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原保护性免疫的比较研究

目的:比较旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原诱导小鼠产生保护性免疫效果的异同。方法:制备旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原,分组免疫小鼠,并于末次免疫后10d用旋毛虫感染性幼虫对各组小鼠实施攻击感染,检测攻击感染后各组小鼠肠道成虫和肌肉幼虫数并计算减虫率,同时采用ELISA法检测各组小鼠血清IgG抗体水平。结果:成虫抗原免疫组小鼠和肌幼虫抗原免疫组小鼠检获的肠道成虫数和肌幼虫数均显著少于对照组(P<0.05),其中以成虫抗原免疫组小鼠减虫率最高(P<0.01)。成虫抗原免疫组和肌幼虫抗原免疫组小鼠于实施旋毛虫感染性幼虫进行攻击感染的当日所检测的血清IgG抗体水平与其免疫前相比均升高(P<0.01,P<0.05),与对照组相比亦升高(P<0.01,P<0.05),其中也以成虫抗原免疫组小鼠血清IgG抗体升高最为显著(P<0.01)。结论:旋毛虫成虫抗原和肌幼虫抗原均能激发小鼠产生保护性免疫,其中成虫抗原免疫组小鼠显示出更好的抗感染保护性。

紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉组织病理的影响

目的探讨紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期组织病理的影响。方法ICR小鼠分为两组,实验组为紫外线减毒弓形虫免疫3周后再感染旋毛虫,对照组为旋毛虫单独感染。结果与旋毛虫单感染相比,小鼠预先经紫外线减毒弓形虫免疫再感染旋毛虫后23d,其肌肉期幼虫周围的炎症细胞浸润明显减轻,肌肉组织的病理损伤也明显减轻。结论紫外线减毒弓形虫免疫对小鼠旋毛虫感染肌肉期的组织病理有一定的免疫调节作用。

旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析

目的鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白。方法应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24h的ES抗原的蛋白组分进行分析。结果SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62kDa～14.88kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28kDa～14.27kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02kDa)。T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21kDa～14.37kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71kDa～14.51kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同。2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11kDa～22kDa、25kDa～64kDa及100kDa～144kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12kDa～21kDa及25kDa～90kDa,所对应的pI分别为4～9.5与4.5～9.6。T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13kDa～16kDa、18kDa～22kDa及40kDa～55kDa,所对应的pI分别为4～7、3.8～6.2及5～9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10kDa～15kDa、17kDa～25kDa及29kDa～55kDa,所对应的pI分别为4.7～6.5、4.6～6及5～7。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同。

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中特异性抗原的分析

用胃蛋白酶消化旋毛虫感染鼠肌肉，获得肌肉期幼虫。３７℃，用ＲＰＭＩ１６４０培养基培养幼虫，控制虫体死亡率低于５％。每２４ｈｒ收集上清培养液，即为分泌排泄抗原（ＥＳＡ）。共获１０天次ＥＳＡ（ＥＳＡ＿（１ｄ～１０ｄ））。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及氨银染色技术进行蛋白组份分析显示：各天次ＥＳＡ的主要蛋白区带数及位置基本相同，分子量范围在９６～１４ｋｄ，主带３条，分别为４８，５３和５８ｋＤ蛋白组份。应用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术进行免疫识别分析显示：旋毛虫病人血清对各天次ＥＳＡ的免疫识别结果相似，识别的抗原组份有７～８条区带，均有上述３条主带。正常人、蛔虫病人和囊虫病人血清均未能识别任何区带。肺吸虫病人血清能识别２～３条抗原区带，但其分子量位于２４～１４ｋＤ之间。血吸虫病人血清也能识别２～３条抗原区带，其分子量位于１８～１４ｋＤ之间。结果表明：在严格控制死亡虫体抗原污染条件下，较长期内培养肌肉期幼虫获得的各天次ＥＳＡ，其成份和免疫识别效果基本无改变，各天次ＥＳＡ中的４６～５８ｋＤ蛋白均具有良好的特异性。

旋毛虫感染小鼠膈肌虫荷与血清及肉汁抗体水平的研究

目的观察旋毛虫感染小鼠膈肌虫荷(larvae per gram diaphragm,lpgd)与血清及肉汁抗体水平的关系。方法将32只雄性昆明小鼠随机分成4组(每组8只),每只分别感染50(A组)、100(B组)、300(C组)、500条(D组)旋毛虫幼虫,感染后42d剖杀,收集血清及肉汁,观察膈肌虫荷并用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清及肉汁抗体。另将50只小鼠随机分成5组(每组10只),每组分别感染旋毛虫(T1)、乡土旋毛虫(T2)、布氏旋毛虫(T3)、伪旋毛虫(T4)及纳氏旋毛虫(T7),每只感染500条幼虫,感染后42d剖杀,观察感染不同种旋毛虫小鼠的膈肌虫荷与血清及肉汁抗体水平。结果感染旋毛虫的A、B、C、D4组小鼠的膈肌虫荷与血清及肉汁抗体水平均无相关性(P>0.05),但与感染剂量呈正相关(P<0.05),每组小鼠的血清与肉汁抗体水平也均具有相关性(P<0.05)。5种旋毛虫感染小鼠的膈肌虫荷与血清及肉汁抗体水平相比均无相关性(P>0.05),但血清与肉汁抗体水平相比均具有相关性(P<0.05)。旋毛虫感染小鼠的血清及肉汁抗体水平明显高于其他4种旋毛虫(乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫及纳氏旋毛虫)感染小鼠的血清和肉汁抗体水平(P<0.05)。结论旋毛虫肌幼虫ES抗原可用于其他4种旋毛虫(乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫)感染小鼠血清及肉汁中抗旋毛虫抗体的检测。

旋毛虫肌幼虫总RNA提取方法研究初报

【研究目的】探索高质量的旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫总RNA提取方法;【方法】利用Trizol试剂采用三种方法提取旋毛虫肌幼虫总RNA。(1)液氮预冷的研钵中研磨新鲜虫体至样品快融化时,加入适量的Trizol,继续研磨至液状后转移到离心管中;(2)A将新分离的虫体放到-20℃预冷的研钵中,在研磨过程中不断地添加液氮以保持虫体冷冻,之后对冷冻状的样品粉末继续操作;B把液氮冻存的新鲜旋毛虫肌幼虫取出,放到-20℃预冷的研钵中重复A的操作;(3)新鲜虫体放入匀浆器中,加适量Trizol,在冰水混合物中研磨20分钟。虫体破碎后按Trizol说明书继续抽提。最后通过凝胶电泳和紫外吸收光度值检测。【结果】用液氮和Trizol结合的方法,使用新鲜样品提取旋毛虫肌幼虫总RNA,在纯度和得率上都较为理想;【结论】使用新鲜的样品,且液氮与裂解液结合,是获得高质量RNA的可行方法。