RAW264.7小鼠巨噬细胞与阿萨希毛孢子菌相互作用后TNF-α、IL-1β和CCL3的表达变化

目的研究RAW264.7小鼠巨噬细胞与T.asahii相互作用后TNF-α,IL-1β和CCL3的表达水平变化。方法RAW264.7细胞与T.asahii菌液共孵育3 h、6 h、9 h、12 h,对照组不加菌液。在各孵育时间点取上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测上清液中TNF-α、IL-1β和CCL3的含量。台盼蓝拒染法计各孵育时间点RAW264.7细胞的活细胞数。结果 RAW264.7细胞与T.asahii共孵育3 h、6 h、9 h、12 h后,TNF-α、IL-1β、CCL3的表达水平均明显高于对照组,有显著性差异(P<0.05)。3种细胞因子的表达水平随共孵育时间延长而增高,共孵育9 h的表达水平最高。RAW264.7细胞的活细胞数随共孵育时间延长而逐渐下降,共孵育12 h后的活细胞数量与其他各时间点有统计学差异(P<0.05)。结论 RAW264.7小鼠巨噬细胞面临T.asahii感染时可分泌TNF-α、IL-1β、CCL3等细胞因子,这些炎性细胞因子可能参与了抗T.asahii感染的免疫反应。

干扰素-γ增强RAW264.7巨噬细胞对阿萨希毛孢子菌杀伤作用的机制研究

目的探讨干扰素-γ(IFN-γ)对RAW264.7巨噬细胞(Macrophage,Mφ)体外抗阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)杀伤作用的机制。方法不同浓度(10、100、1000U/ml)的IFN-γ与RAW264.7共同培养,再加入阿萨希毛孢子菌培养后检测菌落形成单位(CFU/ml),计算各生长抑制率。在上述体系上清液中分别检测亚硝酸根离子(NO2-)。将巨噬细胞与不同终浓度的IFN-γ共同孵育后,分别检测超氧阴离子(O2-)的OD值。结果 IFN-γ浓度分别为10、100、1000U/ml时,T.asahii的生长抑制率分别为25.21%、41.95%、55.83%,组间差异具有显著统计学意义(P<0.01);上清液中NO2-的浓度分别为89.16±3.32、108.07±3.81、126.44±3.52,与空白对照组(74.47±1.48)相比差异具有显著性意义(P<0.01);上清液中O2-的OD值分别为0.317±0.006、0.424±0.006、0.518±0.006,与对照组相比差异具有显著性意义(P<0.01)。结论随着IFN-γ浓度的增加,T.asahii生长抑制率增加。IFN-γ通过增强Mφ产生一氧化氮(NO)及超氧阴离子(O2-)来发挥体外抗T.asahii的杀伤作用。

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对人THP-1单核细胞抗阿萨希毛孢子菌活性增强作用的研究

目的研究重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rh GM-CSF)对单核细胞吞噬、杀伤阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)功能的影响。方法不同浓度的rh GM-CSF(100 U/ml、200 U/ml及400U/ml)与人THP-1单核细胞预孵育48 h后,加入T.asahii临床株共培养1 h,应用瑞氏-姬姆萨染色,倒置显微镜下观察人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬情况;菌落计数法评估人THP-1单核细胞对T.asahii的杀伤情况。结果 rh GM-CSF预孵育可使人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬率从20%提高到84%左右。人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬率随rh GM-CSF浓度增高而升高,具有浓度依赖性。200 U/ml及400 U/ml的rh GM-CSF预孵育组,每毫升T.asahii菌落形成单位较对照组明显减少(P<0.05)。结论 rh GM-CSF可明显增强人THP-1单核细胞对T.asahii的吞噬、杀伤活性。