Tricine-SDSP-AGE电泳分析小分子多肽

研究旨在解决常规SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对一些小分子多肽进行电泳分析过程中极易扩散丢失,常无着色带显示等问题。实验采用不同类型胶来电泳分析低分子量多肽,比较Tricine SDS PAGE电泳分析小分子多肽时的聚丙烯酰胺浓度和交联度,为小分子多肽的分析与鉴定提供快速准确的条件。

Tricine-SDS-PAGE法对阿胶的酶解物鉴别

目的 Tricine-SDS-PAGE法分析阿胶酶解物。方法分别采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和木瓜蛋白酶对阿胶、龟甲胶和鹿角胶进行酶解,然后将酶解液分别进行Tricine-SDS-PAGE小分子电泳。结果阿胶不同酶解物的Tricine-SDS-PAGE电泳谱均出现多条细条带,与酶空白组、样品空白组相比有一定差异。阿胶与龟甲胶、鹿角胶的图谱条带有很大差异。结论采用酶解物联合Tricine-SDS-PAGE法鉴定阿胶,较普通PAGE信息量更大,可以区分其他胶类。

大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离体系的建立

为建立和优化大豆蛋白酶解肽蛋白Tricine-SDS-PAGE分离技术,从凝胶的浓度、凝胶中乙二醇的使用、上样缓冲液中甘油的浓度、上样量、染色方法等多个方面对Tricine-SDS-PAGE分离效果进行比较研究。结果显示:凝胶质量分数T为18%、交联度C为5%并加入30%(体积分数)乙二醇能分离分子质量低至1.7 ku的大豆多肽,在含30%甘油的上样缓冲液中大豆酶解肽能得到较好的分离,上样量为20μg的分离效果较理想,考马斯亮蓝G-250染色方法能提高大豆低分子多肽电泳的分辨率,同时利用改进的TricineSDS-PAGE电泳技术对不同蛋白酶酶解液的分子质量分布进行了分析。研究结果表明,通过优化的TricineSDS-PAGE电泳技术能够获得较高分辨率的大豆蛋白酶解肽电泳图谱。

Tricine电泳优化方法在针灸效应小分子蛋白检测中的应用

目的改进一种适合分离、鉴定针灸效应小分子蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法研究调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度和凝胶交联度并加入适量甘油,从而优化Tricine电泳系统。结果与常规Glycine-SDS-PAGE电泳系统比较,分离胶聚丙烯酰胺浓度为l6.8%、交联度为5.8%、含10.4%甘油的Tricine-SDS-PAGE电泳明显减少10 kD分子量蛋白的弥散,成功分离了分子量为11.0 kD的S100A8和11.8 kD的S100A11等两个针刺抗哮喘小分子蛋白。结论优化的Tricine-SDS-PAGE电泳系统可有效分离针灸效应小分子蛋白。

Tricine-SDS-PAGE鉴定不同品质饲料蛋白质的组成

[目的]探讨Tricine-SDS-PAGE技术应用于饲料蛋白质的分析与品质鉴定的可行性。[方法]采用Tricine—SDS—PAGE对菜籽饼粕、棉籽饼粕、菜籽浸出粕、热带假丝酵母固态发酵棉籽粕以及黑曲霉固态发酵棉籽粕分别进行凝胶成像分析，鉴定5种不同品质饲料的蛋白质组成。[结果]采用4．0％C、16．5％T的分离胶，可以取得较好的分离效果。菜籽蛋白和棉籽蛋白样本的凝胶成像结果表明，菜籽饼粕中的蛋白质主要集中在泳道中部，为14．4～60．0kD，而棉籽饼粕中的蛋白则在泳道顶端（约90kD）含量较高，2种饲料蛋白得到了有效区分。同一种样本相同处理方法间的凝胶成像结果表明，用黑曲霉对棉籽饼粕进行固态发酵效果优于热带假丝酵母。[结论]5种饲料之间蛋白成像差异显著、直观，Tricine-SDS—PAGE可以作为饲料蛋白品质鉴定的一种有效方法。

改进Tricine-SDS-PAGE法分析重组牛乳铁蛋白肽

为了有效分离3.1kDa乳铁蛋白肽,试验调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度及凝胶的交联度,并加入适量甘油,改进了传统的Tricine-SDS-PAGE方法。结果表明,该方法与常规的SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE相比较,改进的凝胶不仅可以有效分离3.1kDa的肽,而且对分子量为212kDa的大分子量蛋白也有很好的分离效果,明显优于常规的SDS-PAGE和现有的Tricine-SDS-PAGE方法。

改良的Tricine—SDS—PAGE电泳检测胸腺肽分子量

目的建立一种分析胸腺肽制剂中多肽分子量分布的简便可行的方法。方法采用改良的Tricine-SD-PAGE电泳方法分析胸腺肽制剂中多肽的分子量分布，并分析其中胸腺素α1的含量。结果采用该法可检出1μg的胸腺肽α1，分析国内市场上的胸腺肽制剂多肽分子量分布范围在3．5～8．5kD。结论该法适用于分析胸腺肽制剂中多肽组分的分子量分布和胸腺肽α1的存在，可用于胸腺肽制剂的质量控制。

TRICINE-SDS-PAGE电泳法用于野生全蝎粉鉴定的研究

目的:探索不同产地野生全蝎粉通过TRICINE-SDS-PAGE电泳法鉴别的可行性。方法:用TRICINE-SDS-PAGE系统对全蝎蛋白提取液进行电泳,用Quantity One软件确定各谱带对应的蛋白质分子量。结果:四种产地的全蝎粉用TRICINE-SDS-PAGE法可获得数条分辨率较高且大体位置相当的蛋白质谱带,其对应分子量大体为:42.000,33.515,27.509,25.524,21.615,17.640,15.839,13.994,11.318,10.000,8.357 kDa。结论:TRICINE-SDS-PAGE电泳法可用于不同产地全蝎粉的真伪鉴别。

菲牛蛭中多肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法研究

试验旨在探讨适合菲牛蛭中小分子多肽的Tricine-SDS-PAGE分离方法。采用电泳纯重组水蛭素验证Tricine-SDS-PAGE的分离效果,对菲牛蛭的水提醇沉粗提物进行分离,建立小分子多肽对数分子量和迁移率的回归关系方程,计算多肽分子质量。结果显示:菲牛蛭中小分子多肽对数分子量和迁移率成正比直线关系,从菲牛蛭中分离得到7个分子量在10~31 kDa的多肽。研究表明,Tricine-SDS-PAGE对菲牛蛭中的小分子多肽具有较好的分离效果。

Tricine系统检测低分子量蛋白酶抑制剂的电泳方法研究

目的建立一种能够检测不同分子大小(尤其是低分子量)蛋白酶抑制剂的电泳方法。方法根据特异蛋白酶抑制剂抑制靶蛋白酶活性的原理,借助明胶-Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品,胶板经蛋白酶水解后,以考马斯亮蓝染色。结果小分子量的胃蛋白酶抑制剂与较大分子量的BBI均能在该方法中显示出活性带,并且利用该方法检测到山合欢种子中含有一种胰蛋白酶抑制剂。结论该方法能够满足不同分子大小、不同类型蛋白酶抑制剂检测的需要。山合欢胰蛋白酶抑制剂的发现对山合欢进一步的研究和综合开发有重要意义。

Tricine-SDS-PAGE法分析腮腺唾液蛋白

多种口腔疾病或系统性疾病的发生、发展过程中，唾液成分的质和量都可能发生改变［１］。唾液蛋白作为唾液的主要有机成分，与唾液的多种生理功能密切相关［２］。因此研究唾液蛋白对于了解机体的生理及病理状况具有重要意义。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－...

Tricine-SDS-PAGE分离鼻咽癌血清多肽方法初探

目的建立鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）血清多肽稳定且灵敏的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法通过Tricine-SDS-PAGE电泳分离鼻咽癌血清多肽,比较乙腈处理与非处理血清,以及电泳时间长短等条件对分离效果的影响。结果鼻咽癌原始血清样本量200μL、经1.2倍体积乙腈沉淀,冷冻干燥后加入40μL的生理盐水溶解,取12~18μL上样,6.7%浓缩胶、夹层胶60 V,之后60 V的电压至电泳结束,电泳时间4 h 20 min,分离10 kDa以下的鼻咽癌血清多肽效果最佳。结论建立鼻咽癌血清多肽的Tricine-SDS-PAGE稳定电泳分离方法,电泳效果与样本的处理方法和电泳条件有关。

A Comparative Study on Pharmacokinetics of Tricin, a Flavone from Gramineous Plants with Antiviral Activity

Tricin (and tricin containing plant extracts) has been shown to exert a pronounced antiviral activity, high radical scavenging activity and is favored for its safety profile. In the present study we have analyzed the pharmacokinetics of tricin after a single intravenous and oral administration to Wistar rats of an ethanol extract of Calamagrostis Adans and Deschampsia Beauv plants (test agent) at different doses. Tricin concentrations in blood plasma and blood cells were measured at different time points. Two-compartment (for intravenous injection) and one compartment (for oral administration) models were used for the analysis of tricin pharmacokinetics. The results showed that the pharmacokinetics of tricin after intravenous injection of test agent has a pronounced biphasic character, is well described by a two-compartment pharmacokinetic model, and is characterized by non-linear dose-dependence. The pharmacokinetics of tricin administered orally is characterized by a high rate of absorption from the gastrointestinal tract into the blood and rather slow elimination, which leads to a large volume of distribution in the body and a fairly high bioavailability. The obtained results indicate the advantages of the oral route of administration over the intravenous route.

牛肉酶解物的Tricine-SDS-PAGE电泳分析

用Tricine-SDS-PAGE电泳法对牛肉酶解物的分子量进行了测定，结果表明产物的分子量分布在1060～24000范围，分子量在5000以下的低分子蛋白成分含量约75％。

Tricine-SDS-PAGE电泳定量检测人体泪液中溶菌酶含量

目的建立一种定量检测人体泪液中溶菌酶含量的方法。方法通过改进的Tricine-SDS-PAGE电泳,分析正常人体天然泪液中分子量在3~30 k Da的蛋白质分布,使泪液溶菌酶与其它泪液蛋白有效分离,用Image J软件对溶菌酶电泳条带进行灰度分析,定量测定其中溶菌酶的含量。结果泪液溶菌酶和其它小分子蛋白可用改进的Tricine-SDS-PAGE电泳有效分离,对于人体泪液中的溶菌酶检测专属性良好;上样量10~30μg范围内,溶菌酶含量和电泳条带灰度面积线性关系良好(r=0.9934);分析17例人体泪液的样本,其中溶菌酶的含量在1.38~3.07 mg/m L。结论改进的Tricine-SDS-PAGE电泳法简单直观,并能批量性的一次分析多个样本,可用于科研及临床上人体泪液中溶菌酶的含量检测。

A Validated High-Performance Thin-Layer Chromatography (Hptlc) Method for the Quantitative Determination of Tricin in Two <i>Spergularia</i>Species

A simple, sensitive, precise and robust high-performance thin-layer chromatographic (HPTLC) method for analysis of tricin has been developed and validated for the determination of tricin in genus Spergularia. Analysis of tricin was performed on pre-coated TLC aluminum plates with silica gel as the stationary phase. Linear ascending development was carried out in double twin trough glass chamber saturated with a mobile phase consisting of chloroform: methanol (37:3 v/v). Spectro-densitometric scanning was performed by TLC scanner III (CAMAG) in absorbance mode at the wavelength of 270 nm. The system was found to give compact spots for tricin (Rf value of 0.34 ± 0.04). The linear regression analysis data for the calibration plots showed a good linear relationship with r2 = 0.9981 in the concentration range 2-15 μl with respect to peak area. According to the International Conference on Harmonization (ICH) guidelines, the method was validated for precision, recovery, and robustness. The tricin content quantified from Spergularia marina and S. daiandra was found to be 0.398 mg/100g and 1.642 mg/100g fresh weight, respectively. Statistical analysis of the data showed that the method is reproducible and selective for the estimation of tricin.

^99Tc^m-（HYNIC-BMS-200261）（tricine）--（TPPTS）的制备及对荷乳腺癌裸鼠的显像研究

目的 制备^99Tcm－（HYNIC－BMS－200261）（N－三羟甲基甘氨酸）（三苯基膦三间磺酸钠盐）[^99Tcm－（HYNIC－BMS－200261）（tricine）（TPPTS）]三重配位化合物，评价其在正常小鼠及荷乳腺癌裸鼠体内的生物分布，并对荷乳腺癌裸鼠进行初步显像研究。方法 先用双功能螯合剂HYNIC与BMS－200261耦联，再以tricine和TPPTS为协同配体，进行^99Tcm标记，合成三重配位化合物^99Tcm－（HYNIC－BMS－200261）（tricine）（TPPTS），测定其放化纯及稳定性，并进行正常小鼠、荷乳腺癌MDA－MB－435裸鼠体内生物分布实验和荷乳腺癌裸鼠γ显像。结果 ^99Tcm－（HYNIC－BMS－200261）（tricine）（TPPTS）的放化纯〉90%，室温下放置4 h其放化纯仍大于85%。正常小鼠体内分布结果表明，该标记物的血液清除迅速，注射后2 h血液中的放射性摄取值为（0.08±0.02） %ID/g，主要经肝、肾排泄，脾、胃肠道摄取较少，注射后2 h脾、胃、小肠中的放射性摄取值分别为（0.35±0.13）、（0.27±0.11）和（0.25±0.07） %ID/g。荷乳腺癌MDA－MB－435裸鼠在注药后30 min显像即可见肿瘤部位有放射性浓聚影，1 h后T/NT比值最高，达3.40±0.30。结论 ^99Tcm－（HYNIC－BMS－200261）（tricine）（TPPTS）三重配位化合物制备成功，标记方法可行，放化纯高，稳定性好，生物分布特性良好，有望用于乳腺癌显像研究。

Tricine-SDS-PAGE分析极低分子量蛋白的条件优化

目的优化适合分析极低分子量蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳方法。方法采用Tricine-SDS-PAGE电泳方法,考察凝胶浓度、交联度对分离效果的影响,筛选出最佳电泳条件。并利用所优化方法分析验证凉山虫草中的蛋白质组分。结果在分离胶交联度为0.165、浓度为5%及浓缩胶交联度为0.04、浓度为2.7%时,Tricine-SDS-PAGE对3～20 kDa蛋白质有较高的分辨率,凉山虫草中的极低分子量蛋白质组分在该条件下比在Tris-SDS-PAGE系统下可得到更好的分离。结论所优化的方法对20 kDa以下极低分子量蛋白的分辨率高,条带的线性关系良好。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学结合分子对接的凹叶景天抗肝癌质量标志物(Q-Marker)研究

目的 利用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析凹叶景天醋酸乙酯部位的化学成分,并结合网络药理学进行凹叶景天抗肝癌质量标志物(Q-Marker)的预测分析。方法 利用UPLC-Q-TOF-MS/MS快速鉴定凹叶景天醋酸乙酯部位的化学成分;利用Swiss ADME平台,根据筛选原则确定活性成分;运用Swiss Target Prediction平台预测凹叶景天的成分靶点,GeneCards平台获得相关疾病靶点,Venny平台获得成分和疾病的交集靶点,并构建“活性成分-靶点”网络;通过String数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点;利用David数据库对潜在的核心靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;采用分子对接技术进行验证。结果 从凹叶景天醋酸乙酯部位中共鉴定58个成分,黄酮类23个、有机酸类16个、酚类4个、香豆素类4个、萜类2个、苯酞类2个等。网络药理学研究筛选出39种活性成分,药物-疾病靶点140个;PPI网络筛选出AKT1、EGFR、STAT3、CASP3、ESR1等18个核心靶点;富集分析显示,凹叶景天主要以癌症通路、PI3K-Akt信号通路、癌症中的微小RNA信号通路、MAPK信号通路等为主要信号通路,从而发挥抗肝癌的作用。分子对接结果显示预测的QMarker及核心靶点之间具有良好的亲和力。结论 凹叶景天是通过多成分、多靶点、多途径发挥抗肝癌的作用,预测出山柰素、异鼠李素、山柰酚、槲皮素、木犀草素、芹菜素和苜蓿素7个成分可作为凹叶景天抗肝癌的Q-Marker。

苜蓿素对LPS诱导HUVECs炎症反应的消除作用

【目的】研究苜蓿素对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的保护作用。【方法】以HUVECs为研究对象,用MTT法确定苜蓿素的处理浓度,用酶联免疫分析法确定LPS建模浓度以及检测HUVECs炎症相关因子(TNF-α、iNOS、COX-2、IL-1、IL-6)表达,用Western-blot法测定NF-κB和MAPK信号通路蛋白(β-Actin、P65、IKB、P-P65、P-IKB、P38、JNK、ERK1/2、P-P38、P-JNK、P-ERK1/2)表达。【结果】不同浓度的LPS均能促进TNF-α的表达(P<0.01),其中LPS浓度在2.5~7.5μg/mL时TNF-α的表达量最高,选用2.5μg/mL作为建模浓度,在该浓度下LPS促进炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01),而作为阳性对照辛伐他汀能抑制LPS诱导的炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01);苜蓿素浓度在3μg/mL之内对HUVECs活性无显著差异,因而选用3、2、1μg/mL作为苜蓿素高、中、低剂量组;苜蓿素高、中、低剂量组均能下调LPS诱导的炎症相关因子和炎症相关通路蛋白表达(P<0.01),而且苜蓿素对炎症相关因子的抑制效果弱于辛伐他汀,而对炎症相关通路蛋白的抑制效果强于辛伐他汀,各炎症相关因子表达随苜蓿素浓度升高而降低(P<0.01),炎症相关通路蛋白表达情况也有这个下降趋势。【结论】苜蓿素能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路消除LPS对HUVECs诱导的炎症损伤。