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SDS-PAGE染色-脱色方法的改良 被引量:6
1
作者 郑玉姝 赵朴 赵宏坤 《实验室研究与探索》 CAS 2007年第1期41-42,共2页
在传统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)技术的基础上,对制备的凝胶进行快速染色-水洗脱色及提高灵敏度的探讨,建立改良的SDS—PAGE染色一脱色法。与传统的方法比较,快速法在不影响检测灵敏度的情况下,大大缩短了分析所需时... 在传统的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)技术的基础上,对制备的凝胶进行快速染色-水洗脱色及提高灵敏度的探讨,建立改良的SDS—PAGE染色一脱色法。与传统的方法比较,快速法在不影响检测灵敏度的情况下,大大缩短了分析所需时间,整个分析过程只需40~60min,并且降低了实验成本,有重要的推广价值。提高灵敏度法可检测到0.1~0.5μg蛋白/条带。 展开更多
关键词 sdspage 染色-脱色 改良
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微波合成大豆蛋白-糖接枝物分子亚基结构的研究
2
作者 管军军 张同斌 +1 位作者 裘爱泳 刘晓亚 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期28-31,共4页
以大豆分离蛋白(SPI)、乳糖及可溶性淀粉(SS)为主要原料,利用微波辐射的方法合成SPI-糖接枝物,并对其分子的亚基结构进行了研究。聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,随着接枝度(DG)的增加,接枝物的亚基谱带逐渐减少,糖基谱带变得明... 以大豆分离蛋白(SPI)、乳糖及可溶性淀粉(SS)为主要原料,利用微波辐射的方法合成SPI-糖接枝物,并对其分子的亚基结构进行了研究。聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,随着接枝度(DG)的增加,接枝物的亚基谱带逐渐减少,糖基谱带变得明显。高效毛细管电泳(HPCE)对DG较高接枝物亚基的分析发现,SPI-SS接枝物亚基的相对分子质量增加;而SPI-乳糖接枝物亚基之间未发生交联。 展开更多
关键词 大豆分离蛋白(SPI) 微波 大豆蛋白-糖接枝物 亚基 sdspage HPCE
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基质金属蛋白酶-3在实验性腰椎间盘退变中的表达及其意义
3
作者 李燕 陈德胜 +1 位作者 杨卫东 金群华 《宁夏医学杂志》 CAS 2007年第3期200-202,I0004,共4页
目的检测实验性椎间盘退变中MMP-3的表达,进一步研究椎间盘退变的发病机制。方法建立SD大鼠腰椎间盘退变模型为实验组,正常SD大鼠为对照组,每组各16只,采用免疫组织化学、SDS-PAGE进行检测两组椎间盘组织中MMP-3的表达。结果实验组和对... 目的检测实验性椎间盘退变中MMP-3的表达,进一步研究椎间盘退变的发病机制。方法建立SD大鼠腰椎间盘退变模型为实验组,正常SD大鼠为对照组,每组各16只,采用免疫组织化学、SDS-PAGE进行检测两组椎间盘组织中MMP-3的表达。结果实验组和对照组的椎间盘组织均有MMP-3表达,实验组的MMP-3表达较对照组显著增高(P<0.05)。结论MMP-3在腰椎间盘退变的发生和发展中起着非常重要的作用。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-3 腰椎间盘退变 免疫组织化学 sdspage
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重组毕氏酵母中降解hIFN-βHSA蛋白酶的鉴定及其活性控制 被引量:1
4
作者 宋一丹 窦文芳 +3 位作者 许泓瑜 金坚 陆茂林 许正宏 《生物加工过程》 CAS CSCD 2008年第5期50-54,共5页
研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ-HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×104的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出... 研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ-HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×104的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了6.5×104的降解带,进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ-HSA的HSA区域。在此基础上,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)活性电泳的方法,确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中,引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B(Proteinase B,PrB)。最后,确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA,通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA,使融合蛋白的表达量达到22.18 mg/mL,与空白对照组相比增加了61%。 展开更多
关键词 毕赤酵母 蛋白酶 sdspage 高效液相色谱 人β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂
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α-淀粉酶法制备小麦胚芽蛋白的研究 被引量:17
5
作者 辛志宏 吴守一 +1 位作者 马海乐 何少华 《食品科技》 CAS 北大核心 2003年第6期11-13,共3页
小麦胚芽用超临界CO2脱脂,用α-淀粉酶水解麦胚蛋白提取液中的淀粉,酸沉淀麦胚蛋白,使麦胚蛋白含量和得率均较碱溶酸沉淀法明显提高,分别达到94.5%和81.36%,用高效毛细管电泳鉴定小麦胚芽蛋白的纯度,SDS-PAGE电泳测定小麦胚芽蛋白的分... 小麦胚芽用超临界CO2脱脂,用α-淀粉酶水解麦胚蛋白提取液中的淀粉,酸沉淀麦胚蛋白,使麦胚蛋白含量和得率均较碱溶酸沉淀法明显提高,分别达到94.5%和81.36%,用高效毛细管电泳鉴定小麦胚芽蛋白的纯度,SDS-PAGE电泳测定小麦胚芽蛋白的分子量。 展开更多
关键词 小麦胚芽蛋白 α-淀粉酶水解 高效毛细管电泳 sdspage电泳
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转基因山羊羊乳中重组人乳铁蛋白性质的检定与研究 被引量:3
6
作者 李佐刚 汤瑶 +7 位作者 孙旭 闻镍 于敏 史兴昌 李响 王秀文 王军志 李波 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期223-226,共4页
目的:检定与研究转基因山羊 CLF123-1羊乳中重组人乳铁蛋白(rhLF)及其分子特性。方法:利用 SDS~PAGE,West~ern-blotting 及 Edman 降解法测定分析转基因山羊羊乳中 rhLF 的相对分子质量、免疫学特性和 N-末端15个氨基酸残基;利用紫外... 目的:检定与研究转基因山羊 CLF123-1羊乳中重组人乳铁蛋白(rhLF)及其分子特性。方法:利用 SDS~PAGE,West~ern-blotting 及 Edman 降解法测定分析转基因山羊羊乳中 rhLF 的相对分子质量、免疫学特性和 N-末端15个氨基酸残基;利用紫外分光光度法比较 rhLF、天然人乳铁蛋白(hLF)与 Fe^(3+)离子结合的动力学过程,测定 Fe^(3+)与 LF 发生结合反应达到平衡状态后在279 nm 和465 nm 的吸收度值,Fe^(3+)与 LF 的物质的量比值分别为:0:1,0.5:1,1:1,2:1,4:1。结果:rhLF 的相对分子质量为(8.06±0.15)万(2次实验,6条电泳谱带计算结果);Western-blotting 结果显示 rhLF 可特异地与兔抗人 LF 抗体发生特异性结合;rhLF 的 N-末端1~15个氨基酸残基的序列为 G R R R R S V Q W X T V S Q P;rhLF 和 hLF 与 Fe^(3+)结合特性与趋势几乎完全一致。结论:本文所研究的转基因山羊羊乳中的乳铁蛋白是与人乳铁蛋白分子特性一致的 rhLF。 展开更多
关键词 重组人乳铁蛋白(rhLF) 转基因山羊 sdspage 免疫印迹法 -末端测序 生物反应器 铁结合蛋白
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刀额新对虾变应原的分离、鉴定与纯化 被引量:10
7
作者 喻海琼 刘志刚 +1 位作者 张帆 胡川 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1199-1201,共3页
目的通过对我国常见的刀额新对虾变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化,以提供虾特异性变应原用于食物变态反应疾病的诊断和治疗。方法通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离刀额新对虾的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏... 目的通过对我国常见的刀额新对虾变应原蛋白进行分离、鉴定与纯化,以提供虾特异性变应原用于食物变态反应疾病的诊断和治疗。方法通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离刀额新对虾的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western-blotting)法鉴定其变应原成分,通过离子交换层析对刀额新对虾变应原进行初步纯化,通过疏水层析和凝胶过滤层析进一步对变应原纯化。结果刀额新对虾有17条蛋白带,其中主要条带有10条,68和36 kD为可与虾过敏性病人血清IgE结合的特异性变应原;通过各种层析方法纯化出刀额新对虾68 kD变应原,纯度为96%。结论对刀额新对虾变应原进行分离、鉴定和纯化,得到高纯度的68 kD刀额新对虾变应原,为临床虾变态反应疾病的诊断和治疗奠定基础。 展开更多
关键词 刀额新对虾 变应原 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺疑胶电泳(sdspage) 免疫印迹(Westem—blotting) 离子交换层析 疏水层析 凝胶过滤层析
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麦胚球蛋白的分离制备及理化性质研究 被引量:18
8
作者 朱科学 周惠明 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期15-18,共4页
采用Osborne分级分离的方法制备得到麦胚球蛋白,获得的球蛋白的蛋白质含量为87.3%(干基),得率为5.8g/100g脱脂麦胚粉,其在脱脂麦胚粉蛋白中的构成比例为15.6%。氨基酸分析表明,除蛋氨酸略低于FAO/WHO的推荐值外,其它七种必需氨基酸都高... 采用Osborne分级分离的方法制备得到麦胚球蛋白,获得的球蛋白的蛋白质含量为87.3%(干基),得率为5.8g/100g脱脂麦胚粉,其在脱脂麦胚粉蛋白中的构成比例为15.6%。氨基酸分析表明,除蛋氨酸略低于FAO/WHO的推荐值外,其它七种必需氨基酸都高于或接近FAO/WHO的推荐值;另外,谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸和丙氨酸的含量十分丰富,而胱氨酸和半胱氨酸的含量最低。还原的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)表明,麦胚球蛋白主要有六条谱带,其分子量依次为57.8kDa、41.8kDa、38.7kDa、24.1kDa、16.5kDa和14.3kDa。差示扫描量热仪(DSC)分析表明麦胚球蛋白干粉和稀溶液的变性温度分别为98.2℃和83.8℃。 展开更多
关键词 麦胚 球蛋白 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(sdspage) 差示扫描量热仪(DSC)
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均匀试验设计优化酶法提取燕麦全粉蛋白质研究 被引量:3
9
作者 刘建垒 李英杰 郝利平 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期78-82,86,共6页
采用酶法从燕麦全粉中提取燕麦蛋白。先对提取所用的酶进行筛选,选定提取率最高的碱性蛋白酶为提取酶类,在单因素试验基础上用五因素十水平均匀试验设计对酶法提取燕麦蛋白的工艺进行优化。结果表明:碱性蛋白酶提取燕麦蛋白的最佳工艺为... 采用酶法从燕麦全粉中提取燕麦蛋白。先对提取所用的酶进行筛选,选定提取率最高的碱性蛋白酶为提取酶类,在单因素试验基础上用五因素十水平均匀试验设计对酶法提取燕麦蛋白的工艺进行优化。结果表明:碱性蛋白酶提取燕麦蛋白的最佳工艺为:加酶量(E/S)100.358 U/g,pH 10.5,温度53.49℃,液料比18∶1,时间60 min,在此条件下,提取率为84.09%,纯度达89.16%,得到的燕麦蛋白的等电点为4.4,分离率达93.33%。SDS-PAGE电泳分析显示,酶法制备的燕麦蛋白在65.2~12.5 ku上都有条带分布,其中74.3%的条带集中在31.3~40.0 ku和21.0~21.9 ku两个区间,与碱法相比,有条带缺失。 展开更多
关键词 燕麦全粉 燕麦蛋白 酶法提取 均匀设计 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sdspage)
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水杨酸及其衍生物对溶菌酶光敏损伤的保护作用分析
10
作者 鲍小丹 马建华 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第1期20-25,共6页
利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),研究了365 nm紫外照射引发蒽醌-2-磺酸钠(AQS)、溶菌酶(Lysozyme)和水杨酸及其衍生物(水杨醛、水杨酸甲酯)水溶液体系的光化学反应效应及影响因子.结果表明:AQS能够造成Lyso的光敏损伤... 利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),研究了365 nm紫外照射引发蒽醌-2-磺酸钠(AQS)、溶菌酶(Lysozyme)和水杨酸及其衍生物(水杨醛、水杨酸甲酯)水溶液体系的光化学反应效应及影响因子.结果表明:AQS能够造成Lyso的光敏损伤,且损伤程度随AQS浓度增加及光照时间的延长而加剧;水杨酸及其衍生物对Lyso的光敏损伤具有显著的保护作用,其保护效果与水杨酸及其衍生物的浓度呈正相关;以抗坏血酸(Vc)作为对照,相同条件下,其保护效果依次为:水杨酸≈水杨醛>Vc>水杨酸甲酯. 展开更多
关键词 蒽醌-2-磺酸钠 溶菌酶 光敏损伤 sdspage 水杨酸 衍生物
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水稻OsV3IP2和OsV3IP3原核表达与鉴定
11
作者 程英 胡颖 +2 位作者 覃永华 程钢 王春台 《湖北农业科学》 2017年第17期3349-3352,共4页
通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息... 通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息学软件对蛋白质的二级结构进行预测,将OsV3IP2、OsV3IP3分别分为2个和4个部分。将其分别克隆到p ET32a后,采用0.2 mol/L IPTG在10、20、30℃诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,证明OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1表达的融合蛋白存在于上清液中,而OsV3IP 3-2、OsV3IP 3-3表达的融合蛋白存在于沉淀中,获得了OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1可溶性目的蛋白,为进一步体外验证OsVDAC3与OsV3IP2、OsV3IP3的互作奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 OS V3IP2-3 诱导表达 sds page WESTERN BLOT
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Examination of Subunit Composition of Bombyx Mori Silk Fibroin
12
作者 蔡再生 于同隐 《Journal of China Textile University(English Edition)》 EI CAS 1998年第2期28-31,共4页
Main subunits of the silk fibroin were separated by GFC(gel filtration chromatography)technigue.The nativesilk fibroin and α,c subunits were measured by gel elec-trophoresis.The aminoacid compositions of the nativesi... Main subunits of the silk fibroin were separated by GFC(gel filtration chromatography)technigue.The nativesilk fibroin and α,c subunits were measured by gel elec-trophoresis.The aminoacid compositions of the nativesilk fibroin and α,c subunits were analyzed by means ofaminoacid measurement.Some properties of silk was inter-preted in view of subunit composition of silk fibroin. 展开更多
关键词 SILK fibroin SUBUNIT composition AMINO -acid analysis GFC sds - page.
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一种高效的真菌总蛋白质提取方法 被引量:12
13
作者 胡彬彬 林连兵 +2 位作者 魏云林 季秀玲 张琦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期53-58,共6页
蛋白的提取是蛋白质组学研究的首要步骤,其质量的好坏直接影响蛋白质表达分析研究的开展及其结果的准确性。为了从深黄被孢霉M6-22中提取细胞总蛋白质并进一步进行蛋白组学等一些相关研究,采用五种已报道的蛋白质提取方法分别提取深黄... 蛋白的提取是蛋白质组学研究的首要步骤,其质量的好坏直接影响蛋白质表达分析研究的开展及其结果的准确性。为了从深黄被孢霉M6-22中提取细胞总蛋白质并进一步进行蛋白组学等一些相关研究,采用五种已报道的蛋白质提取方法分别提取深黄被孢霉M6-22的总蛋白质,以蛋白质浓度和SDS-PAGE结果分析相结合的方法比较提取方法。结果显示,其中一种方法提取的蛋白质浓度相对较高而且蛋白质条带丰度最高,进一步对该方法进行了改良,所获得蛋白质的浓度可达约2.99mg/ml。改进后的方法操作步骤简单,蛋白质条带丰度更高。采用改进后的方法提取其他五种真菌的总蛋白质,结果显示其对其他真菌也有很好的提取效果,说明可作为一种真菌总蛋白质的高效提取方法。 展开更多
关键词 真菌总蛋白 深黄被孢霉M6-22 sdspage
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鸡蛋过敏原分离、鉴定与纯化 被引量:7
14
作者 吴序栎 杨志华 +1 位作者 刘志刚 吉坤美 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期127-128,共2页
目的对鸡蛋中主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法分别提取鸡蛋的蛋清与蛋黄的蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离鸡蛋的蛋白质组份,采用免疫印迹(Western-blotting,WB)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对鸡... 目的对鸡蛋中主要过敏原进行分离、鉴定与纯化。方法分别提取鸡蛋的蛋清与蛋黄的蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离鸡蛋的蛋白质组份,采用免疫印迹(Western-blotting,WB)方法鉴定过敏原,通过离子交换层析对鸡蛋主要过敏原进行初步纯化。结果WB检测显示,蛋黄与鸡蛋过敏患者的阳性混合血清没有反应;蛋清中有4条蛋白带起反应,分子量分别为83,71,38,13 kD,尤以13 kD的蛋白质最为明显,离子交换层析可初步纯化出13 kD的过敏原蛋白。结论鸡蛋的主要过敏原为13 kD的蛋白质,为临床诊断和治疗鸡蛋过敏性疾病提供标准化的过敏原提供了基础依据。 展开更多
关键词 鸡蛋 过敏原 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sdspage) 免疫印迹(Western^blotting) 离子交换层析
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