Tricine电泳优化方法在针灸效应小分子蛋白检测中的应用

目的改进一种适合分离、鉴定针灸效应小分子蛋白的Tricine-SDS-PAGE电泳体系。方法研究调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度和凝胶交联度并加入适量甘油,从而优化Tricine电泳系统。结果与常规Glycine-SDS-PAGE电泳系统比较,分离胶聚丙烯酰胺浓度为l6.8%、交联度为5.8%、含10.4%甘油的Tricine-SDS-PAGE电泳明显减少10 kD分子量蛋白的弥散,成功分离了分子量为11.0 kD的S100A8和11.8 kD的S100A11等两个针刺抗哮喘小分子蛋白。结论优化的Tricine-SDS-PAGE电泳系统可有效分离针灸效应小分子蛋白。

改良的Tricine—SDS—PAGE电泳检测胸腺肽分子量

目的建立一种分析胸腺肽制剂中多肽分子量分布的简便可行的方法。方法采用改良的Tricine-SD-PAGE电泳方法分析胸腺肽制剂中多肽的分子量分布，并分析其中胸腺素α1的含量。结果采用该法可检出1μg的胸腺肽α1，分析国内市场上的胸腺肽制剂多肽分子量分布范围在3．5～8．5kD。结论该法适用于分析胸腺肽制剂中多肽组分的分子量分布和胸腺肽α1的存在，可用于胸腺肽制剂的质量控制。

南极磷虾抗氧化多肽制备的研究

以清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和羟基自由基能力为指标，筛选制备南极磷虾杭氧化多肽的水解条件，得到高效的抗氧化多肽制品。结果表明：胰蛋白酶、中性蛋白酶复合，酶解南极磷虾6h后得多肽的抗氧化能力最强，超氧阴离子自由基的清除率达到11．5％，DPPH自由基的清除率达到72．7％，羟基自由基的清除率达到84．8％。经超滤分离，分子量范围在5-10ku的多肽表现出较强的清除三种自由基的能力。对其进行tricine—SDS—PAGE电泳，结果显示电泳图谱上出现了两个条带。

发酵法制备生物活性肽及其产物的初步分析

以4株蛋白水解能力较强的瑞士乳杆菌作为出发菌株,分别测定其36h内的蛋白水解动力曲线、产酸曲线,经比较分析选出一株产肽能力强、速率快的瑞士乳杆菌作为后续实验用株。采用响应面分析法优化发酵条件,TricineSDS-PAGE电泳法对发酵产物进行初步分析。结果表明:所选瑞士乳杆菌在接种量为3.5%,底物浓度13%,发酵温度37℃,发酵时间18h的条件下,水解度可达5.60%,可将乳蛋白水解成大量的生物活性肽,其中包括很多小分子肽段,表明该菌可作为水解乳蛋白制备生物活性肽的优良菌株。

油松毛虫幼虫抗菌物质及其抗菌活性研究

采用体内注射法，对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformis Tsai et Liu 3龄幼虫注射浓度为1．0×10^8孢子／mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液，诱导其产生抗菌物质，12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性，并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine—SDS—PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现，诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用，其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌E．coli和变形杆菌Proteus species的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴处理和4～9的pH值条件下保持稳定，反复冻融1～5次抗菌物质的活性降低4．3％～14．9％。电泳结果显示，诱导组血淋巴粗提液在23．2kD和15．0kD处分别出现一条特异性条带，在60．4kD处蛋自带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质分子量可能是23．2kD和15．0kD。

地特胰岛素高分子蛋白质定性和定量分析

目的:探索和建立地特胰岛素高分子蛋白质的定性和定量分析测定方法。方法:采用Tricine SDS-PAGE凝胶电泳有效地分离地特胰岛素中的高分子蛋白质组分,确定高分子蛋白质的主要组成形式;采用分子排阻色谱法分离地特胰岛素单体以及高分子蛋白质,并对高分子蛋白质进行准确定量。结果:确定了地特胰岛素中高分子蛋白质的主要形式为二聚体和寡聚体,建立的分子排阻色谱法可准确地测定地特胰岛素中高分子蛋白质的含量,并考察了高分子蛋白质产生的主要因素以及国内外产品的高分子蛋白质含量。结论:建立的方法可快速有效地对地特胰岛素高分子蛋白质进行定性和定量分析,可作为地特胰岛素的质量研究和质控分析方法。